DNA转染
DNA转染· Transfection of Mammalian Cells Using Lipofectamine (LTI)· Guide to Eukaryotic Transfections with Cationic Lipid Reagents (PDF) (LTI)· Transfection of Mammalian Cell (Calcium Phophate Method) (Botwell Lab)· &n......阅读全文
DNA转染
DNA转染· Transfection of Mammalian Cells Using Lipofectamine (LTI)· Guide to Eukaryotic Transfections with Cationic Lipid Reagents (PDF)
DNA体外转染试剂_如何准备转染所需的质粒DNA
转染效率受到诸多因素的影响，除了细胞、培养基和载体等影响因素外，另外一项非常重要的因素便是DNA的质量。为了比较不同厂家的转染效率，我们分别从三家不同的供应商购买了质粒制备试剂盒来制备pEGFP-N3质粒DNA，并通过不同的方法将制备的pEGFP-N3质粒转运至NIH-3T3细胞。pEGFP-N3质
电穿孔转染－DNA－实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养液试剂、试剂盒 Giemsa 染液甲醇磷酸盐缓冲液丁酸钠载体 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿基因脉冲器 II电穿孔设备与电转化池Sorvall H1000B 转子或类似设备实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需
电穿孔转染－DNA－实验
电穿孔可以有效地转染磷酸钙-DNA 沉淀物等其他方法转染效果不好的细胞系。但是，与其他转染方法一样，未使用过的细胞系进行电穿孔转染的实验条件要经过优化。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料指数生长的哺乳动物细胞培养液试剂、试剂盒Giem
电穿孔转染－DNA－实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养液 试剂、试剂盒 Giemsa 染液 甲醇 磷酸盐缓冲液
DNA转染的基本概念
中文名称DNA转染英文名称DNA transfection定 义将外源DNA分子导入真核细胞的过程。一般细胞很难接受外源DNA分子，可用适当的化学或物理方法处理(如磷酸钙法、电穿孔法等)，使外源DNA容易进入细胞。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
脂质体介导DNA转染法
脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 DMSO(30%) 含血清培养基Giemsa 染液甲醇Polybrene丁酸钠要转染的 DNA仪器、耗材 最低基础培养基组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。DMSO(30%)/含血清培养基第 3
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
利用 Polybrene 进行 DNA 转染实验 实验材料 指数生长的哺乳动物细胞
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
下面讲述的 Polybrene 与 DMSO 转染的方法是 Aubin 等（1997) 方法的改进。利用此方法可以有效地将质粒 DNA 转染中国仓鼠卵巢细胞与角化细胞，产生的转化体比磷酸钙-DNA 沉淀物方法的多 15 倍。但是使用高分子量 DNA 时两种方法的转染效率无明显差别。本实验来源于分子克
如何优化GenMuteTM转染试剂，提高siRNA/DNA共转染效率？
GenMuteTM siRNA转染试剂（Cat#SL100568）是市场上最有力的siRNA传递工具之一。siRNA/DNA共转染时，siRNA的最佳浓度范围是0.5ηM到10ηM，过多的siRNA可能导致沉默效果差的“洪水效应”，切勿使用超过20ηM的siRNA。以24孔板为例，如下步骤将对如何优
生物粒子介导的－DNA－转染实验
生物粒子介导的 DNA 转染实验 试剂、试剂盒 CaCl2 乙醇
脂染介导的－DNA－转染实验
下述方法是 Mark Evans 所研究的一种方法的改进（Alexion Pharmaceuticals,New Haven,Connecticut)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。实验材料指数生长的哺乳动物细胞培养物试剂、试剂盒脂染试剂N
生物粒子介导的－DNA－转染实验
下面是拫据 Horch 等（1999)、Sanford 等（1993)、主要基因枪生产商的出版物（US/EG Bulletins 1688 and 2087;Bio-Rad) 以及 Steve Finkbeiner(University of California,San Francisco) 建立
脂染介导的－DNA－转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养物 试剂、试剂盒 脂染试剂 NaCl 枸橼酸钠
生物粒子介导的－DNA－转染实验
试剂、试剂盒 CaCl2乙醇甘油亚精胺质粒DNA细胞生长培养基仪器、耗材 基因枪金或钨粒子镜头纸微量离心管需转染的细胞或组织实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录1。稀释贮存液至所需浓度CaCl2(2.5mol/L)乙醇未曾打开过的纯乙醇一瓶。乙醇有吸湿性，在空气中会吸收水分。在
贴壁/悬浮细胞瞬时转染RFect质粒DNA转染操作步骤和注意..
本文以RFect Plasmid DNA Transfection Reagent（RFect质粒DNA转染试剂盒），作为携带质粒穿膜的载体物质，具体介绍DNA转染方法。图. 用本产品4ul转染1ug pEGFP-C2质粒到293T细胞后，绿色荧光蛋白的表达情况。贴壁/悬浮细胞瞬时转染-RFect质
基因转染技术的DNA的准备介绍
用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其它化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。DNA的质量和纯度能影响某些细胞系的转染效率，可以通过CsCl梯度法或标准柱层析法进行纯化。
基因转染(磷酸钙DNA共沉淀法)
基因转染技术可以应用于：基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。实验方法原理核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使DNA 附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA 仅有1%～5%可以进入细胞核中，其
基因转染(磷酸钙DNA共沉淀法)
实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 HBSCaCl2TEG418(新霉素G418)液G418选择培养基仪器、耗材 培养瓶
基因转染(磷酸钙DNA共沉淀法)
实验方法原理 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使DNA 附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA 仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA 可以与细胞D
癌基因转化细胞：基因组DNA转染法
实验概要 癌基因转化细胞实验步骤1．提取基因DNA（含癌基因）。2．DNA准备：取供体DNA50～100微克，加3M NaCl或醋酸钠使最终浓度至0.3M混匀。3．再加2倍体积无水乙醇，3000转/分离心10分钟，去上清。4．加入转染缓冲液，待DNA充分融解后，再加入2.5M CaCl2，令最终浓度
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
本方法中介绍的磷酸钙介导的质粒 DNA 转染贴壁细胞是对 Jordan 等建立的方法 (1996) 的改进。Jordan 等大大优化了磷酸钙介导的中国仓鼠卵巢细胞与人胚肾 293 细胞的转染方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料指数
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 CaCl2氯喹Giemsa 染液甘油HEPES 盐缓冲液甲醇磷酸盐缓冲液丁酸钠TE质粒 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿（60 mm) 或 12 孔板实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。CaCl
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞 试剂、试剂盒 CaCl2 氯喹 Giemsa 染液
转染
细胞传代(1) 试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。(2) 弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。(3) 用Tip头加入1ml Trypsin液，消化1分钟（37。C，5%CO2 )。用手轻拍
细胞转染电穿孔转染法
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，可以大大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率
细胞转染脂质体转染法
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性
转染和转染效率测定步骤
LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤此实验步骤设计用来进行24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染，其为设计用来在生长培养基中直接加入复合物。1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。2. 对于每孔细
xCELLigence系统实时监测低毒性XtremeGENE－DNA转染实验（二）
■ 终点法分析，转染约72h后通过细胞增殖试剂盒WST-1分析确定细胞活性（图3）。与X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent相比，其他试剂转染细胞后，显著降低代谢活力，显示出细胞毒性效应。图3：比较罗氏X-tremeGENE 9和X-tr