兰州大学PLOS解析赤霉素信号转导分子机理
2014年7月10日，国际学术期刊《PLOS Genetics》（五年影响因子9.44）在线发表了兰州大学的一项最新研究成果“Arabidopsis DELLA Protein Degradation Is Controlled by a Type-One Protein Phosphatase, TOPP4”， 该研究揭示了DELLA蛋白去磷酸化修饰的分子机理，解决了GA信号转导中去磷酸化修饰这一经典的生物学问题，对植物激素信号转导机理研究和实际生产中农作物改良等具有重要的科学价值。 本文通讯作者为兰州大学生命科学学院细胞活动与逆境适应教育部重点实验室的博士生导师侯岁稳教授，其1994年毕业于西北师范大学生物系，1997 年于中科院昆明植物研究所获硕士学位，2004年在兰州大学生命科学学院获博士学位，2002年至2003年，为英国剑桥大学访问学者，2005年至 2008年在中科院近代物理研究所从事博士后研究。研究方向为植......阅读全文
什么是磷酸化与去磷酸化
磷酸化，将磷酸基团加在中间代谢产物上或加在蛋白质（protein）上的过程。其中除去磷酸基团的酶称为磷酸酶。 蛋白质磷酸化可发生在许多种类的氨基酸（蛋白质的主要单位）上，其中以丝氨酸为多，接着是苏氨酸。去磷酸化：磷酸基团的除去，对许多生物起着“开/关”作用。防止质粒载体的自身连接，最常用于质粒进行单
什么是去磷酸化？
去磷酸化:是磷酸基团的除去，对许多生物起着"开/关"作用。防止质粒载体的自身连接，最常用于质粒进行单酶切连接时。去磷酸化是由于DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。载体去磷酸化后因自身5'端无磷酸基团，因而不可以和自身3'端连接。
蛋白磷酸酯酶的去磷酸化过程
蛋白磷酸酯酶(PP)-2A和PP-2B可使AD神经原纤维缠结中的II型双螺旋丝（PHFII-tau）在Ser-199/Ser-202去磷酸化，Ser-396/Ser-404部分去磷酸化;此外，PP-2A和PP-2B可分别使PHFII-tau的Ser-46和Ser-235去磷酸化;去磷酸化后PHFII
关于去磷酸化的简介
蛋白磷酸酯酶(PP)-2A和PP-2B可使AD神经原纤维缠结中的II型双螺旋丝（PHFII-tau）在Ser-199/Ser-202去磷酸化，Ser-396/Ser-404部分去磷酸化；此外，PP-2A和PP-2B可分别使PHFII-tau的Ser-46和Ser-235去磷酸化；去磷酸化后PHF
去磷酸化作用的概念
去磷酸化作用是指将磷酸基团加在中间代谢产物上，用于探讨阿尔茨海默病(AD)脑损伤逆转的可能性及其途径。
质粒DNA的去磷酸化实验
实验方法原理 去除 5' 端的磷酸基可防止质粒 DNA 的自身连接和环化。在体外连接反应中，DNA 连接酶可在邻近的两个分子间形成磷酸二酯键。但只有当一个分子的 5' 端带有磷酸基另一分子的 3' 端带有羟基时，这一反
什么是去磷酸化作用？
去磷酸化作用是指将磷酸基团加在中间代谢产物上，用于探讨阿尔茨海默病(AD)脑损伤逆转的可能性及其途径。
质粒DNA的去磷酸化实验
实验方法原理 去除 5' 端的磷酸基可防止质粒 DNA 的自身连接和环化。在体外连接反应中，DNA 连接酶可在邻近的两个分子间形成磷酸二酯键。但只有当一个分子的 5' 端带有磷酸基另一分子的 3' 端带有羟基时，这一反应才能完成。实验材料 小牛肠碱性磷酸酶（CIP) 或
去磷酸化的对象和方法
一、组织和抗体来源该研究中的AD及年龄、性别匹配对照者的脑组织来源于死后6小时内的尸体解剖(各取6例混合后制备匀浆)，AD确诊基于尸检组织切片的病理学检查，人脑组织均贮于-75℃直至使用。牛脑PP-2A和PP-2B的分离纯化分别参照Cohen等[5]和Sharma等[6]的方法。多克隆抗体92e和1
质粒DNA的去磷酸化实验
去除 5' 端的磷酸基可防止质粒 DNA 的自身连接和环化。在体外连接反应中，DNA 连接酶可在邻近的两个分子间形成磷酸二酯键。但只有当一个分子的 5' 端带有磷酸基另一分子的 3' 端带有羟基时，这一反应才能完成。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理
关于去磷酸化的结论的介绍
因为tau蛋白异常过度磷酸化并形成PHF被认为是AD神经原纤维退化的基础，PHF可在体外被蛋白磷酸酯酶去磷酸化的结果提示，AD脑损伤可能是可逆的。 阿尔茨海默(AD)脑中有三种tau蛋白： (1)易溶型非异常磷酸化的tau(C-tau)； (2)易溶型异常磷酸化的tau(ADp-tau)；
磷酸化位点分析实验用酶和化学方法去磷酸化
实验材料蛋白样品实验步骤这种方法得到特别关注、但它能提供磷酸肽中磷酸化氨基酸的定位，可以在非磷酸肽占主导地位的混合物中鉴别磷酸肽，此方法使用的是磷酸酶 。用简单的 MALDI-TOF仪器就可以得到磷酸化蛋白水解后产生肽段的质量，同样的样品用磷酸酶处理后，除去了丝氨酸，苏氨酸和酪氨酸上的磷酸，再分析其
克隆中载体的处理和去磷酸化
克隆成功与否,除与连接方式以及载体选择有关外，载体的处理也是一个重要环节。为了提高连接效率，处理载体时应注意以下几点： (1)应加入常用量5～10倍的内切酶水解载体，以保证载体被完全酶切； (2)如用双酶切割载体，则必须电泳回收载体片段，除去双酶切所产生的小DNA片段； (3)如粘端连接,
克隆中载体的处理和去磷酸化
克隆成功与否,除与连接方式以及载体选择有关外,载体的处理也是一个重要环节。为了提高连接效率,处理载体时应注意以下几点:(1)应加入常用量5~10倍的内切酶水解载体,以保证载体被完全酶切;(2)如用双酶切割载体,则必须电泳回收载体片段,除去双酶切所产生的小DNA片段;�(3)如粘端连接,单酶切处理过的
去磷酸化的对象和方法的介绍
一、组织和抗体来源 该研究中的AD及年龄、性别匹配对照者的脑组织来源于死后6小时内的尸体解剖(各取6例混合后制备匀浆)，AD确诊基于尸检组织切片的病理学检查，人脑组织均贮于-75℃直至使用。牛脑PP-2A和PP-2B的分离纯化分别参照Cohen等[5]和Sharma等[6]的方法。多克隆抗体9
J－Exp－Med：蛋白去磷酸化修饰调控炎症微环境的新机制
浙江大学基础医学院柯越海课题组与附属邵逸夫医院曹倩团队合作在J Exp Med杂志上发表研究论文"Phosphatase Shp2 exacerbates intestinal inflammation by disrupting macrophage responsiveness to int
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子标记效率低。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5'
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
实验方法原理 在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子标记效率低。 实验材料
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
实验方法原理 在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子标记效率低。实验材料 T4 噬菌体多核苷酸激酶试剂、试剂盒 乙酸铵EDTA乙醇咪唑缓冲液聚乙二醇仪器、耗材 液体闪烁计数仪Sephadex G-50 离心柱Seph
克隆中载体的处理和去磷酸化方法
克隆成功与否,除与连接方式以及载体选择有关外，载体的处理也是一个重要环节。为了提高连接效率，处理载体时应注意以下几点：(1)应加入常用量5～10倍的内切酶水解载体，以保证载体被完全酶切；(2)如用双酶切割载体，则必须电泳回收载体片段，除去双酶切所产生的小DNA片段；(3)如粘端连接,单酶切处理过的载
通过被磷酸化和去磷酸化来被调节活性的酶有哪些
磷酸化和去磷酸化就是细胞内的信号级联放大系统。简单来说，就是细胞针对外界各种信号（物理或者化学）在体内引发一系列指数级的催化反应（多为磷酸化），导致核内特定基因的表达，成功完成对外界信号的应激性。当这种应激完成之后，再经由去磷酸化去除这些蛋白的活力，使细胞恢复到正常状态。磷酸化是可逆共价修饰中最常见
蛋白质磷酸化
Tyrosine Kinase Assay Using Synthetic Peptides (T. Miller)Small synthetic peptide substrates are especially well suited for applications such as assay
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串联质谱对磷酸
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶 试剂、试剂盒二硫苏糖醇 碘代乙酰
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料 测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串
磷酸化蛋白指的是什么
买能够区分磷酸化构型和未磷酸化构型的两种不同抗体没有听过磷酸化因子的概念。你说的两种都是蛋白质，都是细胞分子信号通路中的重要元素。JAK是一种磷酸激酶，可以将STAT磷酸化。没有听说过JAK自身被磷酸化。所以需要区分是否磷酸化的只有STAT。
磷酸化蛋白检测小妙招
蛋白质磷酸化是一种非常重要且广泛存在于原核生物和真核生物中的翻译后修饰调控方式,参与细胞的增殖、发育、分化、凋亡,细胞骨架调控、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢及肿瘤发生等,对许多生物的细胞功能起着生物“开/关”作用。蛋白质磷酸化指由蛋白质激酶催化的把ATP的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基（丝氨酸、苏
使用Azurespot分析软件定量非磷酸化与磷酸化蛋白
背景去除背景扣除对于有效定量是必不可少的。 例如，AzureSpot有五个自动后台选项和三个手动选项。> 如果背景不均匀，请使用 Rolling Ball。 类似指定半径的圆盘在泳道轮廓下“滚动”，对信号求平均，从而产生平滑小的变化。 半径越大，滚动越平滑。> 如果轮廓的末端与轮廓的其余部分没有
使用Azurespot分析软件定量非磷酸化与磷酸化蛋白
在上期我们回顾了使用多重来成像磷酸化蛋白的技巧，在这部分中，我们将介绍使用Azurespot分析软件进行定量。 背景去除 背景扣除对于有效定量是必不可少的。 例如，AzureSpot有五个自动后台选项和三个手动选项。 > 如果背景不均匀，请使用 Rolling Bal
用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化
实验材料 牛小肠碱性磷酸酶虾碱性磷酸酶蛋白酶 K限制性内切核酸酶DNA 样品试剂、试剂盒 氯仿EDTA乙醇酚氯仿SDS醋酸钠TETris-ClCIP 去磷酸化缓冲液SAP 去磷酸化缓冲液仪器、耗材 水浴或加热板实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液氯仿EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0)