磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶 试剂、试剂盒二硫苏糖醇 ......阅读全文
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶 试剂、试剂盒二硫苏糖醇 碘代乙酰
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料 测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串
磷酸化蛋白鉴定实验
实验材料测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串联质谱对磷酸
渗透细胞蛋白磷酸化实验
实验方法原理 检测出目标蛋白是磷蛋白后，可将这个蛋白质的磷酸化过程在无细胞系统或天然细胞系统中进行研究。大多数蛋白激酶除了在细胞内还可在胞外进行许多底物的磷酸化。天然细胞的渗透化处理为得到满意结果提供了一个有效的实验方法，通过使用一些不同的试剂可以使细胞处于短暂的渗透状态。这个过程使反应发生在细胞内
渗透细胞蛋白磷酸化实验
基本方案 带分析 备择方案1 制备用于SDS-PAGE的天然细胞样品 备择方案2 制备用于等电聚焦的天然细胞样品 实验方法原理 检测出目标
诱饵蛋白特性鉴定实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 CM培养基仪器、耗材 水浴锅培养箱电转仪实验步骤 一、lacZ激活试验 1. 采用标准的亚克隆技术，将编码目的蛋白质的DNA插入pEG202的多接头中，构建一个符合读框的融合蛋白。2. 将下列组合的质粒，分别按“乙酸锂转化法”转化酵母菌EGY48。（1）pBait+
诱饵蛋白特性鉴定实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
诱饵蛋白特性鉴定实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒CM培养基仪器、耗材水浴锅培养箱电转仪实验步骤一、lacZ激活试验 1. 采用标准的亚克隆技术，将编码目的蛋白质的DNA插入pEG202的多接头中，构建一个符合读框的融合蛋白。2. 将下列组合的质粒，分别按“乙酸锂转化法”转化酵母菌EGY48。（1）pBait+pSH1
磷酸化蛋白质组鉴定技术路线及经典案例
蛋白质翻译后修饰（PTMs）几乎参与了细胞所有正常生命活动的过程，并发挥十分重要的调控作用。蛋白修饰已经成为国际上蛋白质研究的一个极其重要的领域，目前研究比较成熟的有磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等。蛋白质磷酸化是生物体中最常见、最重要的一种蛋白质翻译后修饰方式，它可以通过激发、调节诸多信号通路进而
蛋白质磷酸化的测定实验
代谢标记 X射线片放射自显影检测32P标记的蛋白质 实验材料 细胞
相互作用蛋白鉴定实验
鉴定诱饵蛋白（半乳糖苷酶） 鉴定诱饵蛋白（LacZ 的活性分析） 相互作用蛋白捕获 实验方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是构建能够表达
相互作用蛋白鉴定实验
实验方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是构建能够表达 LexA 与目的蛋白的融合体的质粒。这种质粒转化到包含 LEU2 和lacZ 报道基因的报道酵母株中，并要行一系列的对照实验来鉴定所构建的诱饵蛋白是否适用，是否需要修饰，或是否应改变酵母菌报道条件。这些对照实验实现了诱饵蛋白在酵母菌中作为
相互作用蛋白鉴定实验——鉴定诱饵蛋白（LacZ的活性分析）
实验方法原理捕捉相互作用蛋白的第一步是构建能够表达 LexA 与目的蛋白的融合体的质粒。这种质粒转化到包含 LEU2 和lacZ 报道基因的报道酵母株中，并要行一系列的对照实验来鉴定所构建的诱饵蛋白是否适用，是否需要修饰，或是否应改变酵母菌报道条件。这些对照实验实现了诱饵蛋白在酵母菌中作为一种稳定蛋
磷酸化蛋白质组鉴定技术路线及经典案例介绍
今天，小编跟您聊聊磷酸化蛋白质组鉴定！ 蛋白质翻译后修饰（PTMs）几乎参与了细胞所有正常生命活动的过程，并发挥十分重要的调控作用。蛋白修饰已经成为国际上蛋白质研究的一个极其重要的领域，目前研究比较成熟的有磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等。 蛋白质磷酸化是生物体中最常见、最重要的
渗透细胞蛋白磷酸化实验——带分析
本实验讨论用三磷酸核苷在可渗透细胞和分离的细胞组分体外标记蛋白的策略。这类实验在大多数情况下还是以 [γ-32P] ATP 作为外源性磷酸供体。尽管在特殊情况下[γ-32P] GTP 也能被用于蛋白质标记。实验方法原理检测出目标蛋白是磷蛋白后，可将这个蛋白质的磷酸化过程在无细胞系统或天然细胞系统中进
相互作用蛋白鉴定实验——鉴定诱饵蛋白（半乳糖苷酶）
通过确定与之结合的其他蛋白质来理解某种特定蛋白质的功能，常常是十分有用的方法。这可以通过从文库中选择或筛选与靶蛋白相互作用的新蛋白来实现。现有一种特别有用的方法即双杂交系统或相互作用阱， 用来测定新的相互作用蛋白，这种方法采用充当「试管」的酵母菌和一种报道系统的转录激活作用来识别结合蛋白。本方法也可
磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1抗体的鉴定步骤
磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1抗体的鉴定：1）抗体的效价鉴定：不管是用于诊断还是用于治疗,制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应,琼脂扩散试验,酶联免疫吸附试验等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制
胰蛋白酶切磷酸化多肽作图实验
胰蛋白酶切蛋白质样品的制备双向薄层电泳与层析分离多肽片段反向高效液相层析绘制多肽图谱实验材料蛋白质 试剂、试剂盒甲醇
胰蛋白酶切磷酸化多肽作图实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 甲醇电泳缓冲液仪器、耗材 凝胶电泳实验步骤 1. 用单向或者双向凝胶电泳将 32P 标记的目的蛋白质与其他不需要的成分分开。2. 电泳结束后，用 50% 甲醇清洗三次，时间控制在 6 小时，去处 SDS 和电泳缓冲液将凝胶放在两张塞热玢膜（Bio-Rad) 之间吸干。用
蛋白质磷酸化的测定实验—代谢标记
实验材料细胞仪器、耗材培养瓶实验步骤1. 用 60 mm 或 100 mm 培养瓶，在完全培养基中培养细胞至所希望的密度。2. 用预热的低磷酸培养基（无放射性磷酸盐）冲洗两次，然后加入含 0.5~1 mCi32P/ml 的低磷酸培养基（50~100 μmol/L 无机磷酸）。3. 培养结束后，回收
胰蛋白酶切磷酸化多肽作图实验
胰蛋白酶切蛋白质样品的制备 双向薄层电泳与层析分离多肽片段 反向高效液相层析绘制多肽图谱 实验材料 蛋白质
利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化实验
实验材料异丙基 β-D-硫代半乳糖苷试剂、试剂盒非变性裂解液非变性洗涤液非变性洗脱液苯甲基磺酰氟仪器、耗材超声匀浆器聚丙烯柱实验步骤3.1 非变性条件下重组激酶的纯化用于磷酸化筛选的激酶必须是可溶和有活性的，且无其他激酶参杂的纯化激酶。因此，我们可以从 cDNA 表达文库中，大量生产和纯化组氨酸标记
利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化实验
实验材料：异丙基 β-D-硫代半乳糖苷 试剂、试剂盒：非变性裂解液 非变性洗涤液
利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化实验
实验材料 异丙基 β-D-硫代半乳糖苷试剂、试剂盒 非变性裂解液非变性洗涤液非变性洗脱液苯甲基磺酰氟仪器、耗材 超声匀浆器聚丙烯柱实验步骤 3.1 非变性条件下重组激酶的纯化用于磷酸化筛选的激酶必须是可溶和有活性的，且无其他激酶参杂的纯化激酶。因此，我们可以从 cDNA 表达文库中，大量生产和纯
相互作用蛋白鉴定实验——相互作用蛋白捕获
实验方法原理实验要经过两次连续大量的酵母菌平板筛选过程。酵母菌含有 LexA 融合探针、报道基因和插入PJG4-5（见图19.1.6）的 GAL 启动子控制下的 cDNA 表达文库。最近，已有可供用于这个系统的文库。实验材料携带适当质粒组合的酵母菌试剂、试剂盒完全（CM）缺失成分液体培养基含有如下指
方案4－离线－microIMAC－富集磷酸化蛋白实验
实验材料来自目标磷酸化蛋白的多肽试剂、试剂盒乙酸铵EDTA氯化铁仪器、耗材接口和组合件氮压缩气体IMAC树脂聚酷亚胺涂层熔融石英毛细管压力管聚四氟乙烯管实验步骤一、IMAC 微柱的构建制备二、磷酸化多肽的富集展开
蛋白质磷酸化
Tyrosine Kinase Assay Using Synthetic Peptides (T. Miller)Small synthetic peptide substrates are especially well suited for applications such as assay
张丽华发文：N磷酸化修饰蛋白质的富集和鉴定方法
摘要 蛋白质磷酸化修饰在细胞的信号转导、代谢、发育等生命过程中发挥着重要作用。除了研究较为透彻的发生在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸侧链羟基的O-磷酸化修饰之外，近年来，发生在组氨酸、精氨酸和赖氨酸侧链氨基的N-磷酸化修饰受到了越来越广泛的关注。然而，由于N-磷酸化修饰具有独特的P-N键结构，导致其化
胰蛋白酶切磷酸化多肽作图实验—样品制备
实验材料蛋白质试剂、试剂盒甲醇电泳缓冲液仪器、耗材凝胶电泳实验步骤1. 用单向或者双向凝胶电泳将 32P 标记的目的蛋白质与其他不需要的成分分开。2. 电泳结束后，用 50% 甲醇清洗三次，时间控制在 6 小时，去处 SDS 和电泳缓冲液将凝胶放在两张塞热玢膜（Bio-Rad) 之间吸干。用放射性墨
非标记蛋白质的磷酸化作用分析实验
免疫印迹分析 化学发光法 实验材料 蛋白质样品 试剂、试剂盒