单克隆抗体制备
1. 免疫动物：三只Balb/c小鼠 2. 佐剂：首先用完全弗氏佐剂（CFA），后用不完全弗氏佐剂（IFA）。 3. 免疫原：蛋白或KLH偶联多肽。每次免疫使用50-100µg免疫原。 4. 免疫：用PBS稀释免疫原，然后与相应的佐剂1：1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在小鼠双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/8的免疫原。接着将1/2的免疫原进行腹腔注射，这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。以后每个星期进行腹腔注射直到达到要求的效价。 5. 第0星期 预采血 完全弗氏佐剂（CFA）混合的100µg抗原免疫小鼠。 第2星期 完全弗氏佐剂（CFA）混合的50µg抗原免疫小鼠。 第3星期 不完全弗氏佐剂（IFA）混合的50µg抗原免疫小鼠。 第4星期 溶解在PBS中的50......阅读全文
单克隆抗体上清制备实验——大量制备
实验材料目的杂交瘤试剂、试剂盒完全 DMEM-10 培养液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）仪器、耗材250 ml 无菌锥形离心管转瓶培养装置850 cm2 旋转培养瓶175 cm2 组织培养瓶实验步骤1. 重复基本方案 1 步骤 1，并按 1:10 分传到终体积为 1
单克隆抗体制备
1. 免疫动物：三只Balb/c小鼠 2. 佐剂：首先用完全弗氏佐剂（CFA），后用不完全弗氏佐剂（IFA）。 3. 免疫原：蛋白或KLH偶联多肽。每次免疫使用50-100µg免疫原。 4. 免疫：用PBS稀释免疫原，然后与相应的佐剂1：1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在小鼠双
单克隆抗体的制备
实验方法原理使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握），然后对理想的杂交瘤细胞加以扩增、冷冻和
单克隆抗体的制备
实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握），然后对理想的杂交瘤细胞加
单克隆抗体的制备
实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛
单克隆抗体上清制备实验
与多克隆抗血清相比，采用单克隆抗体（MAb）的最主要的优势就是有可能得到大量的特异性单克隆抗体可供应用。MAb 制剂通常包括杂交瘤上清、由接种了杂交瘤的小鼠制备的腹水，以及纯化的 MAb。杂交瘤上清容易制备，特别是用于制备大量不同的 MAb , 但其中 MAb 的浓度则相对较低。为得到纯化的制剂，可
单克隆抗体的制备过程
1.免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处死小
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体上清制备实验
实验方法原理 实验材料 目的杂交瘤试剂、试剂盒 完全 DMEM-10 培养液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）仪器、耗材 50 ml 无菌锥形离心管175 cm2 组织培养瓶实验步骤 1. 将杂交瘤置于一个盛有完全 DMEM-10 培养基的 175 cm2 组织培养瓶中
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备原理
单克隆抗体技术原理如下：由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交
单克隆抗体的制备过程
单克隆抗体在现代生物医学中的作用越来越大，它不仅被广泛应用于生化和免疫检测，而且治疗癌症和自体免疫疾病的单抗药物也逐渐批准上市。因此单抗的制备和筛选具有其内在的重要性。 动物免疫 取4只6周龄雌性BALB/c小鼠皮下注射抗原（20 μg/只），第一次免疫与等量弗氏完全佐剂乳化，0.2 mL/只
单克隆抗体的制备步骤
过程1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞
单克隆抗体制备技术
单克隆抗体制备技术 单克隆抗体制备标准化操作方案(McAb-sop) 第一章: 小鼠免疫 第二章: 细胞融合 第三章: 细胞建株 第四章: 细胞株鉴定 第五章: 腹水制备 第六章: 抗体纯化和鉴定（略） 第一章. 小鼠免疫(BALB
单克隆抗体制备技术
单克隆抗体制备技术 单克隆抗体制备标准化操作方案(McAb-sop) 第一章: 小鼠免疫 第二章: 细胞融合 第三章: 细胞建株 第四章: 细胞株鉴定 第五章: 腹水制备 第六章: 抗体纯化和鉴定（略） 第一章. 小鼠免疫(BALB
单克隆抗体的制备实验
单克隆抗体的制备实验可以用于：（1）将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交， 获得既能产生抗体， 又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体；（2）该技术是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。实验方法原理单克隆抗体技术(monoclo
单克隆抗体的制备过程
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体
单克隆抗体的制备过程
1.免疫动物选择免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处
单克隆抗体的制备（一）
材料1. 免疫原一旦作出制备单克隆抗体的决定后，首先要考虑的问题是使用何种免疫原(第2章）。免疫原(或抗原）可以有多种：全细胞、细胞提取物、纯化蛋白、融合蛋白、多肽、糖 类 、脂类或 D N A 等 。此外，制备单克隆抗体时不需要很纯或单一特异性的抗原，因为在单克隆抗体筛选的过程时，每个克隆
单克隆抗体的制备（二）
3 免疫策略不同实验室使用的免疫策略是不同的，很多免疫策略都同样有效。 目的是扩大宿主体内抗原反应性 B 细胞的数量。体内每次接触到蛋白质抗原，都会增加抗原反应性B 细胞的数量。在对抗原的再次应答中，产生的抗体量会增加，总的免疫球蛋白类别会从以IgM 为主转变为以IgG 为主，特异性抗体
单克隆抗体制备技术
单克隆抗体制备标准化操作方案(McAb-sop)第一章.小鼠免疫(BALB/c)小鼠免疫是单抗制备的关键一环,质控小鼠免疫是制备优质单抗的唯一保证。一.小鼠免疫分两程方案:根据免疫学原理小鼠免疫方案设计如下:1.短程免疫方案:第一次: 1d 100ug(可溶性Ag)+等体积完全佐剂. 腹
单克隆抗体的制备（三）
3.2 免 疫 B 细胞的制备血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性B 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人CO2 处死，在无菌操作下取组织，放 在 4°C无血清培养基中，最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得单细胞
单克隆抗体的制备步骤
过程1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞
单克隆抗体腹水制备实验
实验方法原理 高滴度的单克隆抗体的制备可以通过在小鼠的腹腔内接种能产生 MAb 的杂交瘤细胞，从而产生腹水来获得。腹水可收集几次，经热灭活、滴定后储存。实验材料 裸鼠（6～8 周龄 无特定病原体／注射了鼠鼠杂交瘤细胞的同系宿主）目的杂交瘤试剂、试剂盒 完全DMEM-10培养液（含10mmol／L H
单克隆抗体的制备步骤
1、免疫动物的选择：免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。2、细胞融合：采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同
单克隆抗体培养—含有单克隆抗体的腹水制备
实验步骤材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)裸 鼠 ， 6〜8 周龄，无 特 殊 病 原（SPF)，或者是同基因型宿主（注射小鼠-小鼠杂交瘤时）姥 鲛 焼（Pristane， 2,6，10，14-四甲基十五焼； Aldrich 公司提供）杂 交 瘤（单 元 1.3)添 加 10 mmol/L H
方案27.11－单克隆抗体的制备
方案27.11 单克隆抗体的制备 实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT
单克隆抗体上清的制备实验
实验材料 杂交瘤试剂、试剂盒 完全培养基仪器、耗材 培养箱转子离心机实验步骤 1. 将杂文瘤置于一个盛有完全DMEM-10培养基的175 cm2组织培养瓶中，置37 ℃CO2培养箱中，直至生长旺盛适于分传。2. 按1：10的比例将细胞分传到一个新的175 cm2的培养瓶中，加入完全DMEM-10
单克隆抗体技术的制备过程
1.免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处死小