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westernblotmarker的作用

电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以:1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移;2 确认转膜效率;3 根据marker的条带估计分子量;4 确定目的蛋白位置.......阅读全文

电泳时的DNA分子量Marker和Agarose浓度的选择

电泳时的DNA分子量Marker和Agarose浓度的选择DNA片段长度Agarose浓度  使用Marker种类200 bp以下3%以上 фX174-Hae Ⅲ digest DNA Marker  фX174-Hinc Ⅱ digest DNA Marker  DL500™DNA Ma

蛋白标准品(Marker)知识汇总

相关专题 蛋白Marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子 量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。在western blot 过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类

蛋白marker是什么?蛋白marker的分类

在Western Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精-确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

UVP的凝胶电泳分析软件使用方法

在各个论坛上看以过许多凝胶电泳分析的软件,但没有UVP使用的Labwork的介绍。如果你购买了UVP的凝胶电泳拍摄及分析系统,上面就会带一个labwork分析软件。打开这个软件你就可以发现其界面非常熟悉,原来这就是Media Cybernetics公司利用Imageproplus程序的内核专门应用于

DNA Marker产品选择指南

1.Marker选择标准 (1)应选择在目标片段大小附近ladder较密的marker,这样对目标片段大小的估计较准确。 (2)所选marker应能清楚反映目标片段的大小,且次要片段大小也能反映出来。如作酶切鉴定时,目的片段和切后载体片段最好能在同一个marker中反映出来,若二

浅谈预染蛋白Marker与未预染蛋白Marker

在Western实验中,蛋白Marker可以监控蛋白质在SDS-PAGE中的迁移,监控蛋白的转膜效率,确定蛋白分子量大小。选择正确的蛋白Marker是western blot实验成功的必备条件之一。蛋白Marker分为两种:一种是未预染的Marker,即宽分子量蛋白标准,高分子量蛋白标准及

miRNA克隆实验

            实验方法原理 在细胞中表达的 RNA 除了我们所熟悉的 mRNA 以外,还有大量不编码蛋白质的非编码 RNA(noncoding RNA,ncRNA),非编码 RNA 在细胞中起

Western Blot详解(四)

还有一种离子交换型膜是羧甲基(CM)修饰的纤维素膜,它可以结合蛋白和多肽分子,以及其他的一些带正电荷的样品,最适结合pH范围在4-7。结合的多肽分子可以从CM膜上洗脱下来,用于氨基酸系列分析或微测序。5.Marker的相关疑问MM.我用的是可视marker(BIO_RAD),但是电泳总跑不全8条带,

miRNA 克隆实验

实验方法原理 在细胞中表达的 RNA 除了我们所熟悉的 mRNA 以外,还有大量不编码蛋白质的非编码 RNA(noncoding RNA,ncRNA),非编码 RNA 在细胞中起着非常重要的作用,如 rRNA 和 tRNA 维持着基因的表达,还有一部分则起着调控基因表达的作用。实验材料 寡核

miRNA克隆实验

在细胞中表达的 RNA 除了我们所熟悉的 mRNA 以外,还有大量不编码蛋白质的非编码 RNA(noncoding RNA,ncRNA),非编码 RNA 在细胞中起着非常重要的作用,如 rRNA 和 tRNA 维持着基因的表达,还有一部分则起着调控基因表达的作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主

双重PCR-毛细管电泳法快速检测大豆中转基因成分

【摘要】 目的建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法:针对转基因大豆基因组中被导入的35S启动子、NOS终止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因,自行设计了两对引物,采用双重PCR同时扩增上述基因,用8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质,在50cm×100μm i.d.涂壁毛细管中,于一1

高灵敏度化学发光技术应用心得

  一.概述   化学发光 (ChemiLuminescence ,简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类,它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理,利用仪器对体系化学发光强度的检测,而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光与其它发光

Western Blot详解-常见的问题指南(二)

4. 滤纸、胶和膜的问题X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别?解答:尼龙膜是较理想的核酸固相支持物,有多种类型;硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物,价格最便宜;PVDF膜介于二者之间。就结合能力而言:尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2,可结合短至10bp的核酸

电泳Marker问题集锦

Q:为什么marker条带非常模糊,无法辨别具体条带?  A:出现上述情况,可能有以下几个原因:  1. marker条带出现了降解。请确保在使用过程中避免核酸酶污染;  2. 电泳缓冲液陈旧。电泳缓冲液多次使用后,离子浓度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而

DNA Marker电泳常见问题分析

Q:为什么marker条带非常模糊,无法辨别具体条带? A:出现上述情况,可能有以下几个原因:1. marker条带出现了降解。请确保在使用过程中避免核酸酶污染;2.电泳缓冲液陈旧。电泳缓冲液多次使用后,离子浓度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果,建议经常更换电泳缓冲液;3.电泳条件

Western Blot详解-常见的问题指南(四)

9. 条件的摸索DDD. 用的是Santa Cruz的抗体,也实验过一抗和二抗肯定能结合,二抗加DAB肯定能显色。电泳的胶用考马斯亮蓝染色没问题,但是不知道与Marker对应的条带是否是我要的(我目的蛋白的分子量分别是55KD、29KD)。半干法2小时转膜后,丽春红染色发现大分子量蛋白转过去的较少。

双重PCR-毛细管电泳法检测大豆转基因

双重PCR-毛细管电泳法检测大豆转基因可应用于快速检测抗草甘膦转基因大豆。实验方法原理针对转基因大豆基因组中被导入的35S启动子、NOS终止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因,自行设计了两对引物,采用双重PCR同时扩增上述基因,用8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质,在50cm×100μm

RNA Markers的使用方法(适用于RNA Marker RL1,000、RL6,000、RL1

RNA Marker ( RL1,000; RL6,000; RL10,000)可以进行一般琼脂糖凝胶电泳和变性琼脂糖凝胶电泳。以RL10,000为例,具体使用方法如下:普通琼脂糖凝胶电泳时1.按下列组份配置RNA Marker样品。2.均匀混合后65℃加热10分钟,迅速冷却至室温(最好用PCR仪)

RNAMarkers的使用方法

RNA Marker ( RL1,000; RL6,000; RL10,000)可以进行一般琼脂糖凝胶电泳和变性琼脂糖凝胶电泳。以RL10,000为例,具体使用方法如下:普通琼脂糖凝胶电泳时1.按下列组份配置RNA Marker样品。2.均匀混合后65℃加热10分钟,迅速冷却至室温(最好用PCR仪)

多色流式中,如何让荧光配色和谐共处地刷出存在感?

  随着科学研究的深入,我们对样品指标的分析要求也越来越高,希望能够在有限的样品中获取尽可能多的数据。多色流式就是一项为此量身定做的实用技术。但如何保证数据质量,在很大程度上取决于优化的配色方案设计。   经常会有初入流式分析的同学来问到,师兄,这个荧光强不强?这个通道能测出来不?是不是抗体不好使

胚胎干细胞和成体干细胞标志物

ContentsEmbryonic Stem Cell MarkersHematopoietic Stem Cell MarkersMesenchymal/Stromal Stem Cell MarkersNeural Stem Cell MarkersReferencesWhile stem ce

多色流式中,如何让荧光配色和谐共处地刷出存在感?

随着科学研究的深入,我们对样品指标的分析要求也越来越高,希望能够在有限的样品中获取尽可能多的数据。多色流式就是一项为此量身定做的实用技术。但如何保证数据质量,在很大程度上取决于优化的配色方案设计。经常会有初入流式分析的同学来问到,师兄,这个荧光强不强?这个通道能测出来不?是不是抗体不好使?为啥这个补

双重PCR-毛细管电泳法检测大豆转基因

            实验方法原理 针对转基因大豆基因组中被导入的35S启动子、NOS终止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因,自行设计了两对引物,采用双重PCR同时扩增上述基因,用8g/L羟丙基

Western Blot详解(七)

TTT.目的蛋白是一种6KD的分泌性蛋白,RT-PCR就显示细胞中mRNA表达不高,估计将培养上清冻干浓缩后采用Western Blot还可能检测不出,但如果用western,是否一定要用0.2μm的膜?用Tris-tricine SDS-PAGE电泳,电泳时分别管制三层凝胶,分离胶用40%

Western Blot详解(原理、试剂、步骤及问题解答)-5

NN. 用的是Roche molecular Biochemicals公司的由100kd,75kd,45kd,30kd,20kd,10kd组成的marker。开始做Western Blot时还能够看到marker,当然也仅能看见其中最多三条带。用80V进行SDS-PAGE电泳,用恒压10V4

单细胞转录组测序(scRNA-seq)的十个问答解惑

高通量组学研究已经发展了快20年,从最开始的基因芯片到二代测序,从编码基因到lncRNA,circRNA,从三代测序的出现到单细胞组学研究的火热,相信在这个领域中共事的小伙伴们都深有感触。大家都知道高通量单细胞测序现在很火,但是不是所有的研究都适用,是不是所有的样本都能进行单细胞测序呢?本期小编带来

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Western Blot操作步骤

背景:   蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术