浅谈预染蛋白Marker与未预染蛋白Marker
在Western实验中,蛋白Marker可以监控蛋白质在SDS-PAGE中的迁移,监控蛋白的转膜效率,确定蛋白分子量大小。选择正确的蛋白Marker是western blot实验成功的必备条件之一。蛋白Marker分为两种:一种是未预染的Marker,即宽分子量蛋白标准,高分子量蛋白标准及低分子量蛋白标准;另一种是预染的Marker,即单色预染和多色预染。一、未预染蛋白Marker未预染的蛋白Marker是最简单,也是最准确的一种,由于没有附带染料分子或者标记大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数选用预混合的marker,方便不同大小蛋白的比较。二、预染蛋白Marker预染蛋白Marker是一些纯化较好的蛋白混合物,通过与染料共价偶联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染Marker的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时,电泳后,以及转膜后检测电泳情况和......阅读全文
浅谈预染蛋白Marker与未预染蛋白Marker
在Western实验中,蛋白Marker可以监控蛋白质在SDS-PAGE中的迁移,监控蛋白的转膜效率,确定蛋白分子量大小。选择正确的蛋白Marker是western blot实验成功的必备条件之一。蛋白Marker分为两种:一种是未预染的Marker,即宽分子量蛋白标准,高分子量蛋白标准及低分子量蛋
蛋白质染色实验——银染法
实验材料蛋白质试剂、试剂盒脱色液戊二醛硝酸银洗印显影液仪器、耗材培养箱摇床实验步骤1. 将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以5倍体积的固定液覆盖,在旋转摇床中缓慢摇动30 min 以上。 2. 倾去固定液,加5倍凝胶体积的脱色液,缓慢摇动60 min 以上。 3. 倾去脱色液,加5倍凝胶体积的10
低背景的蛋白质银染方法
我们做蛋白质电泳的人都知道,银染色很灵敏,有很强的说服力,但通常胶背景较深,不易扫描。在这里介绍一下低背景的蛋白质银染方法。Step Reagent Time/minFix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60Rinse 50% EtOH 5 min, 3 tim
蛋白质染色实验——快速银染法
实验材料蛋白质试剂、试剂盒甲醛固定液硫代硫酸钠干胶液甲醇仪器、耗材摇床透析膜实验步骤1. 将凝胶置于塑料容器中,加入50 ml 甲醛固定液,在旋转摇床中缓慢摇动10 min。 2. 倾去固定液,用水冼两次,每次5 min,缓慢摇动。 3. 倾去水,凝胶浸泡在0.2 g/l 硫代硫酸钠溶液中1 m
银染
1.将固定液中的凝胶摇动过夜或至少1小时。2.将保温液中的凝胶轻微振荡2小时。3.去离子水清洗凝胶3次,每次20分钟。4.将硝酸银溶液中凝胶轻微振荡30分钟。5.用去离子水快速洗胶30秒。6.将定影液中凝胶摇动5~30分钟,时间由所加的蛋白质量决定。7.如果已经达到所需的颜色深度,将凝胶放到定影液中
低背景的蛋白质银染(silver-staining)方法
我们做蛋白质电泳的人都知道,银染色很灵敏,有很强的说服力,但通常胶背景较深,不易扫描。在这里介绍一下低背景的蛋白质银染方法。Step Reagent Time/minFix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60Rinse 50% EtOH 5 min, 3 tim
蛋白质染色实验——非氨盐银染法
实验材料蛋白质试剂、试剂盒DTT硝酸银碳酸盐显影液柠檬酸仪器、耗材摇床实验步骤1. 将凝胶置于玻璃或聚乙烯容器中,加入100 ml 固定液,在旋转摇床中缓慢摇动30 min。 2. 倾去固定液,将凝胶浸没在脱色液中,缓慢摇动30 min。 3. 倾去脱色液,加50 ml 10%戊二醛,在通风橱
银染实验
试剂、试剂盒甲醇(50% 和5%v v)二硫苏糖醇AgNO3柠檬酸(固态)显影液实验步骤试剂甲醇(50% 和5%v/v)10umol/L二硫苏糖醇(DTT)AgNO3(0.1%w/v)柠檬酸(固态)显影液操作程序此操作程序是根据Merril(1987)的方法修改而成。室温下,凝胶在旋转平台上缓慢摇动
银染实验
银染实验 试剂、试剂盒 甲醇(50% 和5%v v) 二硫苏糖醇 AgNO3
银染实验
试剂、试剂盒 甲醇(50% 和5%v v)二硫苏糖醇 AgNO3柠檬酸(固态)显影液实验步骤 试剂甲醇(50% 和5%v/v)10umol/L二硫苏糖醇(DTT)AgNO3(0.1%w/v)柠檬酸(固态)显影液操作程序此操作程序是根据Merril(1987)的方法修改而成。室温下,凝胶在旋转平台上缓
银染后的胶打质谱蛋白很少的原因
你指的蛋白很少是指分析出来的蛋白个数少,还是蛋白量低啊?银染灵敏度高,如果切单条带,蛋白含量本来就低,所以后续处理再损失一部分,打谱出来后,有些蛋白因为量实在太低了,低于检测下限,就没法检测出来了。建议先增加蛋白用量,另外也要查询打谱后的数据,看酶切处理是不是完全,有没有可能是不完全酶切,导致大片段
银染的应用
主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测,如内源性GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究 。
异染性染料
中文名称异染性染料英文名称metachromatic dye定 义使细胞或组织染色后显示出颜色差异的染料。如甲苯氨蓝、天青A等,它们可用于显示肥大细胞硫酸黏多糖(肝素)的含量。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
SSR银染方法
SSR银染方法(轻轻震荡)1、固定10%乙醇+0.5%冰乙酸 6min×2次2、染色0.2% AgNO3 12min3、漂洗(1)蒸馏水 1-2min(2)0.002% Na2S2O3 1-2min(3)显色1.5%NaOH + 0.4%甲醛(4)保存0.75%Na2CO3
RF预失真(RFPD)与数字预失真(DPD)
Maxim 的 RF 预失真技术(也称为模拟预失真)与 DPD 有相似之处,用于补偿 AM-AM 以及 AM-PM 失真、交调和 PA 的记忆效应,并且均采用反馈信息补偿温度变化和 PA 老化导致的损害。尽管这两种方法在理论上有相似之处,但仅限于电路设计和系统实施方面。介绍数字预失
什么是异染性?
异染性metachromasy 指在用单一染料染细胞和组织时,染色部分被染成与染剂色调不同的颜色。
核酸的银染方法
核酸硝酸银染色:参考《锌对缺血再灌注大鼠肝脏金属硫蛋白一1基因表达的影响》营养学报2000年第22卷第4期294-297取PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳,所得凝胶进行硝酸银染色.程序如下:(1)于10%乙醇+0.5% 冰醋酸溶液中固定6 min;(2)于10%乙醇+0.5% 冰醋酸溶液
银染实验用水指南
SDS聚丙烯酰胺凝胶染色是蛋白质研究的一个基础方法。染色方法有很多,实际应用中,考马斯亮蓝染色(考染)和银染是运用的最多的方法。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色,它与蛋白质结合后变为蓝色,结合物在595 nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。银染实验中
负染技术及其应用
负染技术是利用重金属盐(常用磷钨酸盐或醋酸铀溶液)沉积到样品四周,样品四周散射电子的能力就较强,因而表现为暗区;样品本身散射电子的能力较弱,则表现为亮区,这样便能把样品的外形与表面结构清楚地衬托出来。是观察微小颗粒状生物材料的外部形状常用的染色方法。主要应用于病毒、支原体、细菌等微生物外部形态的观察
蛋白marker为什么能作为显色条带
蛋白marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。在western Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Wes
蛋白marker为什么能作为显色条带
蛋白marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。在western Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Wes
实现蛋白marker与Annexin-V双染的同时检测的实验方法
要用AnnexinV双染法测凋亡,又想同时标记蛋白marker,甚至还有胞内指标,可是PI和7-AAD都不能洗,怎么办? eBioscience的可固定细胞活力染料Fixable Viability Dye帮您完美解决固定、破膜以及洗涤步骤不影响Fixable Viability Dye的染色,
蛋白标准品(Marker)知识汇总
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蛋白marker是什么?蛋白marker的分类
在Western Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精-确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示
电泳maker条带依次大小都是多少
常用的dna电泳marker:dl2000。只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。蛋白marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子量蛋
电泳maker条带依次大小都是多少
常用的dna电泳marker:dl2000。只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。蛋白marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子量蛋
预浓缩仪简介
预浓缩仪是一种用于环境科学技术及资源科学技术领域的分析仪器,于2011年7月28日启用。 技术指标 全新三级冷阱设计,更出色的除H2O、除CO2能力。 “微进样”技术极大的减少了管路残留并提高了进样精准度,最小样量可至10ml,进样体积10-1000ml。 0.25-1cc定量环可选。 冷阱
什么是预电泳?
预电泳,是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂,提高分辨率的一种做法,不加任何物质,一般30-60分钟后再加样电泳。
什么是预电泳?
预电泳,是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂,提高分辨率的一种做法,不加任何物质,一般30-60分钟后再加样电泳。
竟用工业染料染牛肉
9月19日,西安市工商局又在沙井村捣毁了一个往牛肉里添加布匹染料的黑窝点。 这个黑窝点在西安市沙井村一居民生活区内,极其隐蔽。记者昨日一踏近窝点,就闻到一股恶臭,地面上满是血色的杂秽,院内有几个大盆,盆中泡着膨大的牛皮,在灰暗的作坊内放着已经切好的牛下水和香肠,菜刀上粘着牛油等东西,