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印迹法(blotting)基本原理和应用

印迹法(blotting)即转移电泳,是20世纪70年代发展起来的一种新方法。Southern于1975年建立了检测特异DNA片段的DNA- RNA杂交法,称作Southern印迹法。1977年Alwine等把此方法应用到RNA的研究方面,称作Nouthern印迹法。1979年Towbin等则把该方法扩展应用到蛋白质分析方面,称作Western印迹法。1982年 Reinhart报道的双向蛋白质印迹法,称作Eastern印迹法。目前,有人把Southern,Nouthern,Western印迹法分别称作DNA印迹法,RNA印迹法和蛋白质印迹法。而每一种印迹法又可以分为斑点印迹法和电泳转移印迹法。前者是将样品直接吸附于固相载体上,而后者则是将样品先经过电泳后在转移到固相载体表面上,其余操作基本相同。由于核酸和蛋白质等大分子物质印迹到固相载体,容易和各种探针发生化学或免疫反应,因而对检测样品(尤其是粗样品)中某些组分的理......阅读全文

印迹法的基本原理及应用

印迹法(blotting)即转移电泳,是20世纪70年代发展起来的一种新方法。Southern于1975年建立了检测特异DNA片段的DNA-RNA杂交法,称作Southern印迹法。1977年Alwine等把此方法应用到RNA的研究方面,称作Nouthern印迹法。1979年Towbin等则把该方法

蛋白质印迹(Western blotting)

印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。1975年,Southern建立了将 DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上,并利用DNA-RNA杂交检测特定的DNA片段的方法,称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法,对 RNA和蛋白

Western bloting 综述

摘要:本文主要是针对Western bloting的原理及操作进行了简单的阐述,Western印迹法是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来,然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体(NC膜)上,然后再加抗体形成抗原抗体复合物,利用发光或显色原理将结果显示到膜或底片

转膜时甲醇的作用

  转膜  将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体(例如 NC 膜)上,通常有两种方法:毛细管印迹法和电泳印迹法毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易,转移效率高;而后者适用于大胶的蛋白转移,所

蛋白质印迹技术30年“进化”史

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。   有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western

新技术助蛋白质转印法提速

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。  有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western B

Western Blot的过程与优化,着重于化学发光检测

实验步骤 一、蛋白质印迹法 蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯

看似「矛盾」的「ANA 阴性、ds-DNA 阳性」该如何与医生解释?

自身免疫病相关抗体检测平台,是实验室提供多种自身抗体检测平台,包括:IIFA、ELISA、免疫印迹法、放免法等。针对同一种或同一类自身抗体,存在一种以上的检测方法,根据方法灵敏度和特异性的差异,在出现阳性或可疑结果时,可通过不同的方法进行佐证,以期为临床诊断提供可靠结果。相信大多数从事自身免疫病抗体

茶碱怎样从植物中萃取出来

专利名称:一种茶碱分子表面印迹材料的制备方法技术领域:本发明涉及分子印迹聚合物,具体涉及一种茶碱分子表面印迹材料的制备方法。背景技术:生物碱是一大类含氮的天然有机化合物,广泛存在于很多种植物组织中,大多具有较复杂的氮杂环结构,具有显著的生理活性与药理活性,比如抗肿瘤、抗炎、抗病毒以及其他药学功能。生

转基因食品检测技术

转基因食品是指利用生物技术,将外源基因转移到动物、植物或微生物等其他物种中,从而改造生物的遗传特性,使其在性状、营养品质等方面向人类所需的目标转变,由这些转基因生物为直接食品或原料加工生产的食品就是转基因食品。自1983年世界第一例转基因作物马铃薯问世以来,目前各国已经试种的转基因植物超过4500种

Western Blot的过程与优化,着重于化学发光检测

实验步骤一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中,蛋白

基因的转移与重组体的筛选和鉴定-5

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第三届全国样品制备会分会报告缤纷呈现

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关于自身免疫抗体的实验室检测

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原位杂交组织化学概述

一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究,其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是70年代末到80年代初,分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功,核酸自动

原位杂交组织化学技术的基本方法

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Northern blot技术

经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳  这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛-DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳, 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率(Mill

Northern blot实验操作步骤(2)

二、将变性RNA转移至硝酸纤维素滤膜电泳完毕后,可立即将乙醛酰RNA自琼脂糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜,有以下几种转移方法:毛细管洗脱法、真空转移法和电印迹法。毛细管洗脱法如下所述, 真空转移法和印迹法则按有关仪器生产厂家产品说明书进行。尽管有人认为在转移前对琼脂糖凝胶进行预处理实属不必(Th

将变性RNA转移至硝酸纤维素滤膜

 电泳完毕后,可立即将乙醛酰RNA自琼脂糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜,有以下几种转移方法:毛细管洗脱法、真空转移法和电印迹法。毛细管洗脱法如下所述, 真空转移法和印迹法则按有关仪器生产厂家产品说明书进行。尽管有人认为在转移前对琼脂糖凝胶进行预处理实属不必(Thomas,1980)甚至有害(Thomas

Northern blot技术

经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳  这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛-DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳, 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率(Mill

Northern blot实验技术

一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛-DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳,因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率(Mille

转基因食品的检测

摘要:本文论述了转基因农产品、食品的安全性问题以及对转基因食品从基因、基因转录、基因翻译表达三个层面的检测技术做了概述。 关键词:转基因食品 转基因农产品 食品安全 生物技术 检测技术 Abstract: discuss on the question Genetically modifi

转基因食品的检测(二)

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试论转基因食品检测技术研究进展

  【摘 要】随着科学技术的迅猛发展,转基因食品大量出现,并且大量涌入市场。转基因食品到底对人们的健康有没有影响,至今还没有一个定论,因此,对转基因食品的检测受到了世界各国卫生组织机构的广泛关注。    随着现代科技的快速发展,以基因工程为代表的现代生物技术也取得了令人注目的成绩,特别是与

免疫学检验中的酶免疫技术

 目前,免疫学检验中的标记技术主要包括酶免疫技术、荧光免疫技术、放射免疫技术、金免疫技术、化学发光免疫技术等。其中酶免疫技术是以酶标记的抗体(抗原)作为主要试剂,将抗原抗体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性和专一性结合起来的一种免疫检测技术。作为经典的三大标记技术之一,酶免疫技术在检验医学中得到广

Western Blot的过程与优化,着重于化学发光检测(二)

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