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目前，核酸筛检系统（Nucleic Acids Testing，NAT）已广泛用于血制品常规病原体（乙肝、丙肝、艾滋、梅毒）的核酸检测，极大降低了相关疾病的输血传播。但是，在输血感染性风险中，血小板的细菌污染及相关败血症性输血反应仍是棘手的问题。将核酸筛检技术用于细菌污染检测还有不少困难，包括：1、细菌污染不像特定病原体，没有统一的标准品；2、缺少合适的内参质控排除假阳性或假阴性结果；3、核酸扩增聚合酶（Taq）大多是细菌来源，带有痕量的细菌核酸成分。 近期，中国科学院苏州生物医学工程技术研究所血液免疫学研究中心提出一种双重荧光定量PCR方法可提高细菌污染检测的可靠性：设计一条人工核酸序列（IRC）作为内参，其特点是IRC与靶基因共用同一对引物进行扩增，分别用不同荧光探针进行检测。通过精确控制IRC分子数达到阳性检出限，以其Ct(i)值作为阈值，只有样本检测的Ct(s)值小于或等于Ct(i)时，检测结果才可认定为阳性。一种......阅读全文
引言芬兰科学家Ciftcioglu et al进行哺乳动物细胞培养时发现细胞内存在一种原核微生物，能通过100 nm的滤菌器，Kajander将其命名为纳米细菌(nanobacteria)。纳米细菌广泛存在于自然界的矿物质中和生物体内，能感染人类、牛、鹿和其它哺乳动物，是一种人畜共患的致病原。纳米细
试剂、试剂盒 氯仿-异戊醇酚：氯仿-异戊醇（25:24:1)氯化锂 (LiCl10mol L)酚（Tris-饱和）TE 缓冲液乙醇碱性磷酸酶平末端限制性内切酶和反应缓冲液克隆载体仪器、耗材 水浴锅真空干燥机 琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂氯仿-异戊醇（24:1)酚
许多载体及其衍生物被开发出来用于克隆 PCR 产物，其中包括典型的 pBluescript 类载体。它们具有多克隆位点和简化的多克隆位点，PCR-Script Direct 质粒也是这样。简化的多克隆位点允许使用者把常用的限制酶位点整合到 PCR 引物中，同时还避免了相同的目标序列同时出现在质粒载体
试剂、试剂盒 氯仿-异戊醇 酚：氯仿-异戊醇（25:24:1) 氯化锂 (LiCl 10mol L)
PCR反应体系与反应条件 标准的PCR反应体系： 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～1
PCR反应体系与反应条件 标准的PCR反应体系： 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板
3 生物性污染的来源、危害及预防 外界的微生物如昆虫、节肢动物、原虫、霉菌、病毒、细菌、无细胞壁的微生物(通常指支原体)和其它类型的细胞都可能侵入培养环境引起污染。只要在一个开放的环境中进行培养，都难以避免发生污染。发生污染的可能性取决于操作方法、培养室的无菌环境以及实验室的规章制度。生物性污染对细
PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引
PCR反应的准备PCR反应体系10×扩增缓冲液10μl4种dNTP混合物（终浓度）各100～250μmol/L引物（终浓度）各5～20μmol/L模板DNA0.1～2μgTaq DNA聚合酶5～10 UMg2+（终浓度）1～3mmol/L补加双蒸水100 μl其中dNTP、引物、模板DNA、Taq
（四）核酸的浓缩、沉淀与洗涤随着核酸提取试剂的逐步加入，以及去除污染物过程中核酸分子不可避免的丢失，样品中核酸的浓度会逐渐下降，及至影响到后面的实验操作或不能满足后继研究与应用的需要时，需要对核酸进行浓缩。沉淀是核酸浓缩最常用的方法，其优点在于核酸沉淀后，可以很容易地改变溶解缓冲液和调整核酸溶液至所
CsCl 等密度梯度离心用于制备最高纯度的感染性 λ 噬菌体颗粒，它没有任何细菌核酸的污染。从这种噬菌体颗粒中提取的 DNA 可用作 DNA 测序的模板、亚克隆至质粒载体和产生用于原位杂交的探针。这种方法第二个优点是，由它所获得的噬菌体原种是高度浓缩的（大于 1011 cfu/ml)，在
2.2.1 水水是唯一一种在凝固时膨胀的化合物。因此在选择冻存细胞的容器时应考虑到这个因素。容器因水的膨胀而发生破裂是引起试剂污染的重要原因。为了避免金属离子、有机分子、细胞内毒素等物质对水的污染，在配制液体，清洗容器时必须使用不含杂质的超纯水。需要注意的是，超纯水放置过久其纯度会下降。在高压蒸气灭
细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白（nucleoprotein）。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白（deoxyribonucleoprotein，DNP），RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）。其中真核生物的DNA又有染色体DNA
在组织或细胞培养过程的许多步骤中都使用水。它是缓冲液和介质的主要成分，用于溶解添加剂和药物，以及冲洗生物反应器，塑料制品和玻璃制品。因此，水质可能在细胞培养实验结果中起重要作用。细菌，酵母或霉菌对细胞培养物的污染一直是一个令人担忧的问题，科学家竭尽全力避免它们。这些污染通常是肉眼或通过光学显微镜可见
常用的水处理方法有：(一)沉淀物过滤法、(二)硬水软化法、(三)活性炭吸附法、(四)去离子法、(五)逆渗透法、(六)超过滤法、(七)蒸馏法、(八)紫外线消毒法等。一、沉淀物过滤法沉淀物过滤法的目的是将水源内之悬浮颗粒物质或胶体物质清除干净。这些颗粒物质如果没有清除，会对透析用水其他精密的过滤膜造成破
常用的水处理方法有：(一)沉淀物过滤法、(二)硬水软化法、(三)活性炭吸附法、(四)去离子法、(五)逆渗透法、(六)超过滤法、(七)蒸馏法、(八)紫外线消毒法等。一、沉淀物过滤法沉淀物过滤法的目的是将水源内之悬浮颗粒物质或胶体物质清除干净。这些颗粒物质如果没有清除，会对透析用水其他精密的过滤膜造成破
一、沉淀物过滤法 沉淀物过滤法的目的是将水源内之悬浮颗粒物质或胶体物质清除干净。这些颗粒物质如果没有清除，会对透析用水其他精密的过滤膜造成破坏或甚至水路的阻塞。这是古老且简单的净水法，所以这个步骤常用在水纯化的初步处理，或有必要时，在管路中也会多加入几个滤器(filter)以清除体积较大的杂质。
核酸的分离与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术。随着分子生物学技术广泛应用于生物学、医学及其相关等领域,核酸的分离与纯化技术也得到进一步发展。各种新方法、经完善后的传统经典方法以及商品试剂方法的不断出现,极大地推动了分子生物学的发展。现就核酸分离与纯化的原理及其方法学进展作一综述。核酸分离
1、核酸抽提原理 简单地讲，核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。 经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等
常用的水处理方法有：(一)沉淀物过滤法、(二)硬水软化法、(三)活性炭吸附法、(四)去离子法、(五)逆渗透法、(六)超过滤法、(七)蒸馏法、(八)紫外线消毒法等。 一、沉淀物过滤法 沉淀物过滤法的目的是将水源内之悬浮颗粒物质或胶体物质清除干净。这些颗粒物质如果没有清除，会对透析用水其他精密的过滤
常见问题PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。假阴性，不出现扩增条带。PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中
磁珠提核酸磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤、磁珠法纯化DNA原理。核酸分离与纯化的原则核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分
如何使用KeyPro污染净化仪防止RNA的降解和保证PCR的结果准确性在此次的新型冠状病毒疫情中，核酸检测作为确诊的金标准发挥着重要的作用。众所周知，本次新冠病毒的核酸检测流程为采样（咽拭子、肺泡灌洗液），提取病毒RNA，再经过RT-qPCR或者一步法RT-数字PCR检测样本。但近期关于核酸检测准确
定义 聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction）， 聚合酶链式反应具体内容点击： 聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异
新冠病毒的研究会用到实验室最常见的仪器——二氧化碳培养箱，通过模拟类似细胞/组织在生物体内的生长环境，来对细胞/组织进行体外培养，广泛应用于医学、免疫学、遗传学、微生物、农业科学、药物学的研究和生产。根据工作原理二氧化碳培养箱可分为水套式和气套式两种。水套式二氧化碳培养箱需要加水，通过水的热量传递保
磁珠法纯化DNA原理 磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核
随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应，已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力，已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法
摘要：本文主要讲述了食源性病原菌免疫学、核酸探针技术、PCR技术、生物芯片技术生物传感器检测技术在食品安全检测中的一些应用。关键词：现代食品微生物；检测技术；食品安全；应用近年来食品安全问题已日渐深入人心，微生物性食物中毒事件的报告起数和中毒人数正逐年升高，随着人们生活水平的提高，安全意识的增强，对
天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早期，体外培养细胞都是利用天然培养基。但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大，因此逐渐为合成培养基所替代。目前广泛使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培
核酸的分离与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术。随着分子生物学技术广泛应用于生物学、医学及其相关等领域,核酸的分离与纯化技术也得到进一步发展。各种新方法、经完善后的传统经典方法以及商品试剂方法的不断出现,极大地推动了分子生物学的发展。现就核酸分离与纯化的原理及其方法学进展作一综