NatureMethods：2016年最值得关注的八大技术
《Nature Methods》盘点2015年度技术，选出了最受关注的技术成果：单粒子低温电子显微镜（cryo-EM）技术。 除此之外，也整理出了2016年最值得关注的几项技术，分别为：细胞内蛋白标记（Protein labeling in cells）、细胞核结构（Unraveling nuclear architecture）、动态蛋白质结构（Protein structure through time）、精准光遗传学（Precision optogenetics）、高度多重化成像（Highly multiplexed imaging）、深度学习（Deep learning）、亚细胞结构图谱（Subcellular maps）和综合单细胞图谱（Integrated single-cell profiles）。 新蛋白标记 荧光化学染料相对较小，具有很好的光物理性质和光谱跨度。这些特性使荧光染料特别有吸引力，有望替代荧......阅读全文
独特高通量方法改进新蛋白结构设计
根据发表在《美国国家科学院院刊》上的一项研究，美国西北大学医学研究人员使用独特的高通量方法，解决了具有挑战性的蛋白质设计难题。这种方法可促进新疗法和生物技术工具的开发。 研究的资深作者、西北大学药理学助理教授加布里尔·罗克林博士称，设计ɑββɑ蛋白质的经验教训对于任何计算蛋白
从预测进化－AI能“构想”新蛋白质结构
半个世纪以来，科学家一直在寻找解决“蛋白质折叠问题”的方法。这是生物学领域的一项重大挑战，难倒了几代科学家。但现在，人工智能（AI）解决了这一问题。据《自然》杂志1日发表的论文，包括美国华盛顿大学、伦斯勒理工学院和哈佛大学的研究人员在内的研究小组描述了一种升级的阿尔法折叠系统，该系统由深度思维（
动物所发现肺癌精准治疗新标记
发现基因及其编码蛋白质的异常是癌症精准治疗的基础。局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)是一种重要的非受体型酪氨酸激酶，在几乎所有的细胞中均有表达，可将细胞外的重要信号（如细胞生长、营养等）向细胞内传导，调控细胞的基本生物学功能。FAK在肺癌等肿瘤中表达增高并与病
微核破坏：癌症诊断新标记物
癌症科学家们知道微核(micronuclei)已有一段时间。这些额外的核结构游离于主核之外，大小约在主核的1/3以下。是由细胞分裂后没有纳入到子细胞中去的染色体片段或整个染色体构成。其与某些特殊的癌症类型相关，预示着预后不良。 在发表在7月3日《细胞》(Cell)杂志上的一项新研究中，来自
靶蛋白的放射标记实验
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记实验材料细胞 仪器、耗材培养基
靶蛋白的放射标记实验
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞 酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记 实验材料 细胞
免疫球蛋白标记技术
酶标记抗体 荧光素标记抗体技术 125I标记单克隆抗体技术 实验方法原理 酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量
免疫球蛋白标记技术
实验方法原理 酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前
靶蛋白的放射标记实验
实验材料 细胞仪器、耗材 培养基实验步骤 1. 制备活跃生长着的细胞。从单层培养细胞（约铺满 75% 表面积）中吸去培养基。用预热至 37℃ 的无血清培养基冲洗两次（培养基中应该不含蛋氨酸和半胱氨酸）。对于悬浮培养细胞，通过 400 g 离心 5 分钟收集细胞。用顶热至 37℃ 的无蛋氨
抗原标记蛋白复合体纯化实验——组成型表达FLAG标记
实验方法原理首先通过逆转录病毒介导的转基因（用于组成型表达）或四环素调控的系统（用于可诱导表达）建立表达抗原决定簇标记的蛋白复合体亚基的稳定细胞系。然后用抗原决定簇特异的单克隆抗体偶联的小珠进行免疫亲和纯化，以沉降抗原决定簇标记的多亚基蛋白复合体。最后在中性 pH 或生理条件下洗脱回收，即可用于功能
抗原标记蛋白复合体纯化实验——条件性表达FLAG标记
实验方法原理有时导入的 FLAG 标记蛋白编码序列在逆转录病毒介导的转基因和药物筛选建立的克隆化细胞系中不表达。这可能是由于外源基因产物没有被调控的或组成型表达所造成的细胞毒性。为了克服这个问题，基于四环素的使用，一个可诱导的哺乳动物表达系统可以用来“打开”或“关闭” FLAG 标记蛋白的表达。在建
DNA－蛋白复合结构的多级可控构筑获新突破
近年来，一些科学家利用非共价交联手段，进行DNA支架—蛋白质复合纳米结构的组装研究。但是，这些研究往往局限于特殊蛋白个体在DNA支架上的结合排布，并且不涉及后续组装调控。构建更加高级而有序的DNA—蛋白质复合结构，并实现蛋白分子化学计量学和原位组装调控，是发展基于核酸和蛋白质的杂化生物纳米材料所
AI设计新蛋白质再现突破，生成在拓扑结构
《自然》杂志11日发表的论文描述了一项结构生物学新突破：一种能设计新蛋白质的深度学习方法，名为RoseTTAFold Diffusion（RFdiffusion）。其能生成各种功能性蛋白质，包括在天然蛋白质中从未见过的拓扑结构。 研究示意图（部分） 深度学习推动了蛋白质结构的预测和设计，但仍
郑国荣教授PLosONE揭示胃癌新标记物
近日来自广州军区武汉总医院的研究人员在新研究中确定了hsa-miR-335可作为一种有效的胃癌诊断分子标记物。相关论文“Identification of hsa-miR-335 as a Prognostic Signature in Gastric Cancer.”发表在《PLos
岛津新推出Nanotrap生物标记物发现平台
从复杂的生物基质中直接富集、保存和筛选痕量的生物标志物 一些问题已阻碍了发现和确证更好的生物标志物，比如复杂的分离和富集，很难分析痕量的化合物，样本中可能包含许多丰度蛋白质等。岛津科学仪器的合作伙伴——Ceres NanoSciences公司、以及Nonlinear Dynamics公司，已经
PNAS：卵巢癌早期诊断治疗新标记
众所周知，卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位。但卵巢上皮癌死亡率却占各类妇科肿瘤的首位，对妇女生命造成严重威胁。由于卵巢的胚胎发育、组织解剖及内分泌功能较复杂，早期症状不典型，卵巢癌的术前诊断相当困难。 最近，来自美国加州大学圣地亚哥分校
抗原标记蛋白复合体纯化实验
组成型表达FLAG标记 条件性表达FLAG标记 变化起始材料和洗脱条件 用P11离子交换层析柱
靶蛋白的放射标记实验2
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞实验材料细胞仪器、耗材培养基实验步骤1. 制备活跃生长着的细胞。从单层培养细胞（约铺满 75% 表面积）中吸去培养基。用预热至 37℃ 的无血清培养基冲洗两次（培养基中应该不含蛋氨酸和半胱氨酸）。对于悬浮培养细胞，通过 400 g 离心 5 分钟
蛋白质的胶体金标记
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后，便可进行标记。具体步骤如下。（1）根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。（2）边搅拌边将蛋白质溶液加入胶体金溶液中，逐渐加入，lmg的蛋白质量大约需5min,或在搅拌下将胶体金逐渐加入到蛋白质溶液中，大约需5~10min。（3）继续
抗原标记蛋白复合体纯化实验
实验方法原理 首先通过逆转录病毒介导的转基因（用于组成型表达）或四环素调控的系统（用于可诱导表达）建立表达抗原决定簇标记的蛋白复合体亚基的稳定细胞系。然后用抗原决定簇特异的单克隆抗体偶联的小珠进行免疫亲和纯化，以沉降抗原决定簇标记的多亚基蛋白复合体。最后在中性 pH 或生理条件下洗脱回收，即可用
肿瘤标记物检验血清铁蛋白
血清铁蛋白介绍: 铁蛋白是铁贮存于人体的主要形式之一。具有结合铁和贮备铁能力,以维持体内铁的供应和血红蛋白的相对稳定。血清铁蛋白测定是检查体内铁缺乏的最灵敏的指标,用于诊断缺铁性贫血、肝病等,也是恶性肿瘤的标志物之一。血清铁蛋白正常值: 男 性:15-200μg/L; 女 性:12-150μg/L
蛋白质的胶体金标记
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后，便可进行标记。具体步骤如下。（1）根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。（2）边搅拌边将蛋白质溶液加入胶体金溶液中，逐渐加入，lmg的蛋白质量大约需5min,或在搅拌下将胶体金逐渐加入到蛋白质溶液中，大约需 5~10min。（3）继
绿色荧光蛋白分子标记的研究
分子标记 作为一种新型的报告基因，GFP已在生物学的许多研究领域得到应用。利用绿色荧光蛋白独特的发光机制，可将GFP作为蛋白质标签（protein tagging），即利用DNA重组技术，将目的基因与GFP基因构成融合基因，转染合适的细胞进行表达，然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋白质进行细胞内
生物素标记蛋白操作方法
下面的操作方法可以使约3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合，对某些蛋白来说，生物素与蛋白的分子比可根据不同的生物素化要求进行调整。1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS中透析或
生物素标记蛋白操作方法
下面的操作方法可以使约3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合，对某些蛋白来说，生物素与蛋白的分子比可根据不同的生物素化要求进行调整。 1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS
生物素标记蛋白操作方法
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算：蛋白质量（mg）/蛋白分子量（MW）＝蛋白质的毫摩尔数。 2. 在打开之前，平衡生物素至室温。加2 mg
怎样提取细胞质或细胞核中的蛋白
细胞比较简单，只有细胞膜，抽提过程中，很容易破坏细胞膜，从而得到蛋白，相应蛋白中受到其他物质干扰也比较少，样品较为干净。但是用组织的时候，组织由细胞组成，但是从组织中抽提丹巴就要复杂，做组织匀浆以后，再分离组织碎片和蛋白，但是分离过程可能没有那么好，组织中含有的各种杂质，杂蛋白就比细胞中要多，要复杂
给鸡蛋换蛋白：解读细胞核移植“三父母”技术
新华社华盛顿１０月１９日电（记者林小春）美国新希望生殖医学中心张进团队１９日在美国生殖医学学会会议上宣布，世界首个细胞核移植“三父母”婴儿于今年４月诞生。那么，什么是细胞核移植“三父母”技术？张进对新华社记者解释道，简单而言，就相当于给鸡蛋换蛋白。 每个人都从父母那里继承三份遗传物质，分别是
为什么亲核蛋白进入细胞核需要能量
核蛋白参与构成核的结构，而细胞核是一个有序的结构，任何一个系统要维持有序状态必须消耗能量。因此细胞需要消耗能量将蛋白质搬运到核内进行加工。
怎样提取细胞质或细胞核中的蛋白
细胞比较简单，只有细胞膜，抽提过程中，很容易破坏细胞膜，从而得到蛋白，相应蛋白中受到其他物质干扰也比较少，样品较为干净。但是用组织的时候，组织由细胞组成，但是从组织中抽提丹巴就要复杂，做组织匀浆以后，再分离组织碎片和蛋白，但是分离过程可能没有那么好，组织中含有的各种杂质，杂蛋白就比细胞中要多，要复杂