抗原标记蛋白复合体纯化实验
组成型表达FLAG标记 条件性表达FLAG标记 变化起始材料和洗脱条件 用P11离子交换层析柱 实验方法原理 首先通过逆转录病毒介导的转基因（用于组成型表达）或四环素调控的系统（用于可诱导表达）建立表达抗原决定簇标记的蛋白复合体亚基的稳定细胞系。然后用抗原决定簇特异的单克隆抗体偶联的小珠进行免疫亲和纯化，以沉降抗原决定簇标记的多亚基蛋白复合体。最后在中性 pH 或生理条件下洗脱回收，即可用于功能试验。 实验材料 FLAG 标记蛋白的编码序列 逆转录病毒载体 50% 汇片的 H......阅读全文
抗原标记蛋白复合体纯化实验
实验方法原理 首先通过逆转录病毒介导的转基因（用于组成型表达）或四环素调控的系统（用于可诱导表达）建立表达抗原决定簇标记的蛋白复合体亚基的稳定细胞系。然后用抗原决定簇特异的单克隆抗体偶联的小珠进行免疫亲和纯化，以沉降抗原决定簇标记的多亚基蛋白复合体。最后在中性 pH 或生理条件下洗脱回收，即可用
抗原标记蛋白复合体纯化实验
组成型表达FLAG标记 条件性表达FLAG标记 变化起始材料和洗脱条件 用P11离子交换层析柱 实验方法原理 首先通过逆转录病毒
抗原标记蛋白复合体纯化实验——组成型表达FLAG标记
实验方法原理首先通过逆转录病毒介导的转基因（用于组成型表达）或四环素调控的系统（用于可诱导表达）建立表达抗原决定簇标记的蛋白复合体亚基的稳定细胞系。然后用抗原决定簇特异的单克隆抗体偶联的小珠进行免疫亲和纯化，以沉降抗原决定簇标记的多亚基蛋白复合体。最后在中性 pH 或生理条件下洗脱回收，即可用于功能
抗原标记蛋白复合体纯化实验——条件性表达FLAG标记
实验方法原理有时导入的 FLAG 标记蛋白编码序列在逆转录病毒介导的转基因和药物筛选建立的克隆化细胞系中不表达。这可能是由于外源基因产物没有被调控的或组成型表达所造成的细胞毒性。为了克服这个问题，基于四环素的使用，一个可诱导的哺乳动物表达系统可以用来“打开”或“关闭” FLAG 标记蛋白的表达。在建
抗原标记蛋白复合体纯化实验——变化起始材料和洗脱条件
实验方法原理本方案以人 RNA 聚合酶 II（Pol II）为例，描述抗原表位标记蛋白的纯化。RNA 聚合酶 II 是一个具有 12 个多肽（RPB1-12）的多亚基蛋白复合体。Pol II 最大的亚基（RPBl）具有一个唯一的七肽序列 Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser（YSP
抗原标记蛋白复合体纯化实验——用P11离子交换层析柱
实验方法原理人 TATA 结合蛋白（TBP）能够结合不同类型的细胞内蛋白以形成不同的蛋白复合体，如 SL1、TFIID 和 TFIIIB。这些蛋白质分别是通过 RNA 聚合酶 I、II 和 III 的转录所必要的。所有这些不同的蛋白复合体在核抽提物中都能找到。用一个层析步骤，如 P11 离子交换柱，
胶体金标记蛋白质的纯化
标记好的免疫金探针必须经过纯化处理才能用于IHC染色，尤其是免疫电镜的染色。纯化的目的就是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金及在标记过程可能形成的各种聚合物。其纯化方法有超速离心法、色谱柱法以及以上二者相结合应用。（一）超迷离心法根据胶体金颗粒大小不同及蛋白质种类不同，离心的转速和时间也不同
膜蛋白的纯化实验
实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能
膜蛋白的纯化实验
实验步骤一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近，人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同
纯化剪接因子SR蛋白实验
实验方法原理 前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR（serine/argininc rich，富含丝/苏氨酸）蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要参与者。SR 蛋白是重要的剪接因子，该家族的不同成员可以在体外或体内指导选择性剪接位点的选择。实验材料 超纯硫酸铵
蛋白质的纯化实验
胶体过滤法 实验材料 Sephacryl S-300胶体 试剂、试剂盒
纯化剪接因子SR蛋白实验
前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR（serine/argininc rich，富含丝/苏氨酸）蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要参与者。SR 蛋白是重要的剪接因子，该家族的不同成员可以在体外或体内指导选择性剪接位点的选择。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑
蛋白质的纯化实验
实验材料 Sephacryl S-300胶体试剂、试剂盒 缓冲液buffer A-150仪器、耗材 色析管柱铁夹试管铁架水平仪收集器浓缩用离心机 浓缩用离心管实验步骤 一、仪器设备色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；部分收集器（frac
蛋白质的纯化实验
不发生电泳现象，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向负极移动，蛋白质粒子带正电荷；在等电点偏碱性溶液中，在电场中向正极移动，可以将蛋白质进行分离纯化。这种现象称为蛋白质电泳(Electrophoresis).蛋白质的分离纯化的一般原则①高回收率②高纯度③高活性④方便与快捷⑤经济蛋白质的分离纯化的一般步骤①
纯化剪接因子SR蛋白实验
实验方法原理 前体 mRNA ( pre-mRNA ) 剪接因子 SR（serine/argininc rich，富含丝/苏氨酸）蛋白家族是将剪接体组装到前体 mRNA 上的重要参与者。SR 蛋白是重要的剪接因子，该家族的不同成员可以
膜蛋白的纯化实验（一）
一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近，人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同
膜蛋白的纯化实验（二）
三、膜蛋白的纯化一 旦 使 用 了 合 适 的 去 污 剂 将 膜 蛋 白 从 细 胞 膜 中 増 溶 出 来 ，就 可 以 分 离 目 标 蛋 白 质 了 。传 统 色 谱 层 析 技 术 ，如 凝 胶 过 滤 、亲 和 、离 子 交 换 和 层 析 聚 焦 （chromatofocusi
蛋白质复合体性质的研究
方案1 用 FLAG抗原表位标记蛋白质进行蛋白质免疫共沉淀 方案2 细胞裂解液中相互作用蛋白的亲和纯化 方案3 多蛋白质复合体的非变性琼脂糖凝胶电泳实验 方案4 BN-PAGE 蛋白质分析法 方案5 采用交联法和质谱法对蛋白质复合体进行拓扑
靶蛋白的放射标记实验
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞 酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记 实验材料 细胞
靶蛋白的放射标记实验
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记实验材料细胞 仪器、耗材培养基
靶蛋白的放射标记实验
实验材料 细胞仪器、耗材 培养基实验步骤 1. 制备活跃生长着的细胞。从单层培养细胞（约铺满 75% 表面积）中吸去培养基。用预热至 37℃ 的无血清培养基冲洗两次（培养基中应该不含蛋氨酸和半胱氨酸）。对于悬浮培养细胞，通过 400 g 离心 5 分钟收集细胞。用顶热至 37℃ 的无蛋氨
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白纯化实验_DEAE纯化肌肉肌球蛋白
实验材料肌肉肌球蛋白试剂、试剂盒焦磷酸钠柱平衡缓冲液柱缓冲液高盐缓冲液肌球蛋白-DEAE 透析缓冲液仪器、耗材SDS-PAGE实验步骤一、准备 DEAE 柱和材料1. 准备贮存液和材料200 mmol/L 焦磷酸钠（NaPPi )，pH 7.0用 HCl 和 H3PO4 调 NaPPi 溶液的 pH
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验——肌球蛋白的纯化
实验材料冷冻肌肉试剂、试剂盒肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材玻璃器皿实验步骤1. 准备下面的贮存液（都冷却到 4℃）。肌球蛋白抽提溶液：0.5 mol/L KCl，0.1 mol/L K2HPO4几升冷的用玻璃器皿蒸馏过的水（dH2O）4 mol/L KCl0.5 mol/L KCI0.5 mol/L C
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 DNA 库 不含甲硫氨酸的翻译混合物
纯化非肌肉肌球蛋白实验
细胞匀浆非肌肉肌球蛋白的层析纯化实验材料细胞 试剂、试剂盒缓冲盐溶液
GST融合蛋白的亲和纯化实验
实验方法原理 琼脂糖颗粒和诱饵蛋白复合体在洗涤时并不会损失而且所有反应都含有等量的诱饵蛋白。为了证明在洗涤期间没有任何材料损失，应使用 1/10 的 GST 融合体加样做平行 SDS-PAGE 凝胶电泳并染色以便更确切地比较 GST 融合体蛋白带。另外，融合蛋白的降解可能导致诱饵蛋白的量减少
GST融合蛋白的亲和纯化实验
GST 共结合纯化法 实验方法原理 琼脂糖颗粒和诱饵蛋白复合体在洗涤时并不会损失而且所有反应都含有等量的诱饵蛋白。为了证明在洗涤期间没有任何材料损失，应使用
GST融合蛋白的亲和纯化实验
实验方法原理琼脂糖颗粒和诱饵蛋白复合体在洗涤时并不会损失而且所有反应都含有等量的诱饵蛋白。为了证明在洗涤期间没有任何材料损失，应使用 1/10 的 GST 融合体加样做平行 SDS-PAGE 凝胶电泳并染色以便更确切地比较 GST 融合体蛋白带。另外，融合蛋白的降解可能导致诱饵蛋白的量减少，尤其是当
纯化非肌肉肌球蛋白实验
细胞匀浆 非肌肉肌球蛋白的层析纯化 实验材料 细胞 试剂、试剂盒
制备和纯化－mRNA－显示蛋白实验
实验方法原理 实验材料 DNA 库不含甲硫氨酸的翻译混合物试剂、试剂盒 MgCl2核苷三磷酸溶液转录缓冲液去离子超滤水T7 RNA 聚合酶固体 EDTA尿素缓冲液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶缓冲液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 连接酶缓冲液T4 DNA 连接酶乙酸钾溶液兔网织