RNA聚合酶复合物晶体结构获解析

中科院武汉病毒所研究员龚鹏带领研究小组解析了RNA病毒基因组复制和转录中重要物质——RdRP转位中间体的晶体结构。这将为相关抗病毒研究提供重要依据。相关成果日前发表于美国《国家科学院院刊》。 核酸聚合酶是核酸生物合成的分子机器,也是实现核酸遗传信息复制和传递的关键蛋白。在模板序列的指导下,聚合酶将单磷酸核苷逐个添加到产物链上。每一次添加过程由底物结合并诱导活性中心关闭、磷酰基转移反应以及聚合酶向模板下游转位三个主要步骤构成,其分子机制是聚合酶领域的核心研究内容。 RNA病毒对人类健康构成严重威胁,超过三分之二的传染性疾病由RNA病毒引起。这类病毒的基因组复制和基因转录由依赖RNA的RNA聚合酶(RdRP)执行。在前期工作的基础上,龚鹏研究小组以手足口病的主要病原体肠道病毒71型的RdRP为研究对象,通过获取多种类型的RdRP复合物晶体并系统性地尝试在晶体中实现单次和多次核苷酸添加,于近期报道了包括首个转位中间体在内的7个......阅读全文

RNA病毒类型介绍

病毒的核酸包括双链DNA(dsDNA)、单链DNA(ssDNA)、双链RNA(dsRNA)、正单链RNA(+ssRNA)、负单链RNA(-ssRNA)五种不同类型。病毒颗粒中的组成成分有简有繁,有的用颗粒自带专门用于病毒复制的核酸酶,有的则无。有些RNA病毒的RNA并不仅有一个分子,如流感病毒有8条

病毒RNA提取实验

病毒RNA提取可以:(1)用于RNA病毒复制机制研究;(2)用于反向遗传学研究;(3)用于分子病毒学其他研究。实验方法原理大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料TMV病毒液试剂、试剂盒TE-饱和酚:氯

双RNA病毒介绍

本科病毒形态与呼肠孤病毒相似,过去归于呼肠孤病毒科,亦曾作为分类地位 未定的病毒。1973年,当人们认识到该科成员中的传染性胰坏死病毒和传染性 法氏囊病病毒在形态学上很相似,尤其是它们的基因组都含有双股双节段RNA后 ,建议设立一个新科。1984年正式命名为双RNA病毒科。在国际病毒分类委员会(IC

提取病毒RNA方法

一、用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤,可参考(我提过N次做定量PCR都没问题):1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时,

病毒RNA提取实验

TE-饱和酚/氯仿提取法             实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获

青岛科技大学:RNA检测课题研究取得重大突破

  日前,青岛科技大学化学与分子工程学院马翠萍课题组的研究成果,在线发表于化学领域国际顶级权威期刊《美国化学会志》上。该研究发现,几种脱氧核糖核酸(DNA)聚合酶具有内在的反转录酶活性,突破了DNA聚合酶只能以DNA为模板合成DNA的传统认知,对RNA的快速检测具有重要意义。  据了解,核糖核酸(R

寨卡病毒基因组RNA结构与感染性的关系

        2018年11月21日,清华大学生命科学学院张强锋课题组、药学院谭旭课题组在《细胞宿主与微生物》(Cell Host & Mircobe)期刊在线发表题为《寨卡病毒基因组RNA结构的综合分析揭示了病毒感染性的关键决定因素》(Integrative Analysis of

miRNA、siRNA、dsRNA与shRNA-表示什么意思?

siRNA,shRNA,dsRNA,miRNA间的区别RNA干扰(RNAi),即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA(siRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默,已经迅速而广泛地应用到基因功能,基因表达调控机制研究等热门领域,并为基因治疗开辟了新的途径。近两年来,这方面的科学论文及报道爆炸性增长

核酸分子杂交法介绍

这是最早用于性病诊断的重组DNA技术。基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下(适宜的温度及离子强度等)可按碱基互补原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记,以利于杂交信号的检测。  所谓

关于RNA聚合酶的基本信息介绍

  RNA聚合酶(RNA polymerase)是以一条DNA链或RNA为模板,三磷酸核糖核苷为底物、通过磷酸二酯键而聚合的合成RNA的酶,因为在细胞内与基因DNA的遗传信息转录为RNA有关,所以也称转录酶。

RNA聚合酶的反应需要哪些底物?

该酶需要四种核糖核苷酸三磷酸(NTP:ATP、GTP、CTP、UTP)作为RNA聚合酶的底物,DNA为模板,二价金属离子Mg2+、Mn2+是该酶的必需辅因子。其催化的反应表示为:(NMP)n+NTP→(NMP)n+1+PPi。RNA链的合成方向也是5’→3',第一个核苷酸带有3个磷酸基。其后

RNA聚合酶链式反应(PCR)步骤

1),准备工作    8, 实验器具与材料: (1)移液枪:200ul、10ul (2)吸头:200ul、20ul    (3)吸头台:放置 200ul 和 20ul 的吸头一个 (4)EP 管 1.5ml、100ul2),实验器具的处理与准备    (1) 塑料制品:(包括吸头、EP 管等)   

RNA干扰的作用机制

病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应,其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA(大约21~23 bp),即siRNA。siRNA在细胞内R

正粘病毒培养和增殖

(1)培养〖HT5SS〗 甲型流感病毒虽能引起人和多种动物的疾病,但大多数毒株具有比较明显的宿主特异性。各型流感病毒都能在鸡胚内良好增殖。初代分离时最好应用羊膜腔接种法,但许多毒株也能适应于鸡胚尿囊腔,特别是已在羊膜腔内传代的毒株。丙型流感病毒只能在羊膜腔内增殖。多数流感病毒可在牛胚肾、鸡胚肾、猴

流感病毒的形态及实验室分离纯化

引起人类流感的病毒是冠状病毒。冠状病毒只感染脊椎动物。 感染流感病毒后会引起人与动物的呼吸道、消化道与神经系统病患。 流感病毒的代表型在上世纪 60年代被查明, 60年代后对各种流感病毒的完整形态已进行了深入研究。冠状病毒的基因图谱序列(包括各种蛋白酶和病毒内部的核甘酸序列)已被查明。 

依赖核酸序列的扩增技术叙述

  国内外的研究结果均表明,草莓组织中富含多糖等物质,分离优质核酸较困难,核酸巾的杂质影响taq DNA聚合酶的活性,从而影响PCR技术在草莓病毒检测中的应用。为了提高利用PCR技术草莓病毒检测的稳定性,国内外的学者在草莓核酸提取方法做了较多的研究,利用OIAGEN公司生产的植物RNA提取试剂盒(P

HIV是DNA病毒还是RNA病毒

RNA病毒HIV:人类免疫缺陷病毒直径约120纳米,大致呈球形。病毒外膜是类脂包膜,来自宿主细胞,并嵌有病毒的蛋白gp120与gp41;gp41是跨膜蛋白,gp120位于表面,并与gp41通过非共价作用结合。向内是由蛋白p17形成的球形基质,以及蛋白p24形成的半锥形衣壳,衣壳在电镜下呈高电子密度。

类病毒与RNA病毒的区别

相同点:1. 都侵入宿主细胞。2. 借助宿主细胞增殖机制完成自身增殖。不同点:1. 类病毒没有蛋白质衣壳包裹,是一类小分子RNA。2. 被类病毒感染的组织并不会包含病毒颗粒。3. 类病毒自身不编码任何蛋白质。4. 在感染的宿主细胞中直接复制,更不经过逆转录步骤整合到宿主细胞的染色体上。

dna病毒和rna病毒的区分

这两种病毒的遗传物质是不一样的,DNA病毒以DNA作为遗传物质,而RNA病毒以RNA作为遗传物质,其次这两种病毒的结构也是不一样的,DNA病毒一般是双螺旋结构的,而RNA病毒一般是单链结构的,除此之外,RNA病毒的复制过程要比DNA病毒的更复杂一些,因此在治疗上多半也是更困难一点,比如由艾滋病毒引起

RNA病毒与类病毒的区别

相同点:1. 都侵入宿主细胞。2. 借助宿主细胞增殖机制完成自身增殖。不同点:1. 类病毒没有蛋白质衣壳包裹,是一类小分子RNA。2. 被类病毒感染的组织并不会包含病毒颗粒。3. 类病毒自身不编码任何蛋白质。4. 在感染的宿主细胞中直接复制,更不经过逆转录步骤整合到宿主细胞的染色体上。

核糖核酸的种类转移RNA

转移RNA(tRNA)在蛋白质合成过程中负责转运氨基酸、解读mRNA遗传密码。tRNA占细胞总RNA的10%~15%,绝大多数位于细胞质中。tRNA由Crick于1955年提出其存在,Zamecnik和 Hoagland于1957年鉴定。1.tRNA一级结构具有以下特点: ①是一类单链小分子RNA,

核酸电泳(RNA电泳与DNA电泳)

(一)DNA的凝胶电泳:凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一。琼脂糖凝胶用于分离大于200~1000bp的片段;操作简单、快速,且分离范围广,分辨率高。2.聚丙烯酰胺凝胶用于分离5-500bp的片段; 效果好、分辨率极高,相差1bp的DNA片断就能分开,能容纳相对大量的DNA ,用于核苷酸多态性的分析。

5.5-RNA-SI-核酸酶作图

SI 核酸酶是种内切酶,它是从米曲霉米曲霉 (Aspergillusoryzae) 中分离得到。它能降解单链核酸,却不能降解双链核酸。此外,它能高灵敏度地降解局部错配的双链分子,即使只有一对碱基错配,也能因 S1 核酸酶的切割而被检测出来。用 S1 核酸酶来识别和切割错配或未复性的区域,再通过变性内

核糖核酸的种类信使RNA

信使RNA(mRNA)最早发现于1960年,在蛋白质合成过程中负责传递遗传信息、直接指导蛋白质合成,具有以下特点。1.含量低,占细胞总RNA的1%~5%。 2.种类多,可达105种。不同基因表达不同的mRNA。3.寿命短,不同mRNA指导合成不同的蛋白质,完成使命后即被降解。细菌mRNA的平均半衰期

上海巴斯德所研究人员阐述丙型肝炎病毒体外复制机制

  4月30日,Plos pathogens在线发表了中科院上海巴斯德所丰田哲也研究组关于丙型肝炎病毒体外复制机制的最新研究成果。这项研究由丰田哲也研究组的研究人员与日本国立感染症研究室的Takaji Wakita研究室共同完成。   由于体外感染系统模型有限,丙型肝炎病毒(HCV)

RNA病毒的基本概念

RNA病毒是病毒的一种,属于一级。 它们的遗传物质是核糖核酸(RNA ribonucleic acid)。通常其核酸是单链的(ssRNA single-stranded RNA),也有双链的(dsRNA double-stranded RNA).单链RNA病毒根据他们的翻译意义可分为正译、负译和双译

关于核糖核酸酶H的特征介绍

  在许多反转录病毒中与多功能酶的反转录酶有关,在病毒基因组进入DNA转录的不同阶段执行重要的功能。在真细菌中,核糖核酸酶H确信在以下方面是所必需的:从Okazaki片段去除RNA引物时、在转录子进入DNA聚合酶I启动DNA合成所用引物的转录过程时,以及在去除R-环为在大肠杆菌染色体复制起点提供不规

核糖核酸酶H的特征介绍

  在许多反转录病毒中与多功能酶的反转录酶有关,在病毒基因组进入DNA转录的不同阶段执行重要的功能。在真细菌中,核糖核酸酶H确信在以下方面是所必需的:从Okazaki片段去除RNA引物时、在转录子进入DNA聚合酶I启动DNA合成所用引物的转录过程时,以及在去除R-环为在大肠杆菌染色体复制起点提供不规

核糖-核酸酶H的特征

在许多反转录病毒中与多功能酶的反转录酶有关,在病毒基因组进入DNA转录的不同阶段执行重要的功能。在真细菌中,核糖核酸酶H确信在以下方面是所必需的:从Okazaki片段去除RNA引物时、在转录子进入DNA聚合酶I启动DNA合成所用引物的转录过程时,以及在去除R-环为在大肠杆菌染色体复制起点提供不规则D

核糖核酸酶H的基本特征

在许多反转录病毒中与多功能酶的反转录酶有关,在病毒基因组进入DNA转录的不同阶段执行重要的功能。在真细菌中,核糖核酸酶H确信在以下方面是所必需的:从Okazaki片段去除RNA引物时、在转录子进入DNA聚合酶I启动DNA合成所用引物的转录过程时,以及在去除R-环为在大肠杆菌染色体复制起点提供不规则D