经验:反相HPLC柱子的清洁和再生

反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用最广泛的技术,主要是因为它适用于分析极大多数的非极性物质和很多的可离子化的离子化合物。大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质,因此,分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的,含有疏水的物质也能以同样的保留方式分离。图片来源于网络 固定相上还有少数物质,如混合相(例如苯基-己基)、末端封闭和非末端封闭种类和极性嵌入相-也存在于这些键合硅胶上。还有很多填料用于反相色谱,包括聚合物,聚合物表面涂上硅胶和氧化铝,无机-有机混合物,涂层氧化锆,和石墨化碳。不同种类的固定相有他们自己的优点和缺点。 反相色谱柱利用各种流动相和添加物可以有很多的应用。一些技术利用添加物可以改变或修饰填料的表面。有时候这些添加物有可能会污染键合相表面。 硅胶表面因为有着疏水键合相而有一些别的化学性质。残留的硅烷醇存在于所有的硅胶键合填料中。这些硅烷醇具有弱酸性,因此能与某些待分析物合基质成分,特别是碱......阅读全文

色谱柱、保护柱再生(清洗)以及保存方法

当保护柱或色谱柱的压力渐升时,可通过以下方法对问题配件进行清洗再生。注意:清洗色谱柱时需要将保护柱和抑制器、电导池取下,连接顺序是泵→六通阀→色谱柱(需要反接)→废液管;清洗保护柱时需要将色谱柱和抑制器、电导池取下,连接顺序是泵→六通阀→保护柱(需要反接)→废液管 亲水性离子污染按以下步骤冲洗(流量

色谱柱、保护柱再生(清洗)以及保存方法

亲水性离子污染按以下步骤冲洗(流量 0.5 mL/min)1、反接柱子(保护柱或色谱柱)注意:一定要将抑制器从流路中断开,避免损坏抑制器。2、100分钟:10倍淋洗液浓度的溶液(起清洗作用的主要是Na2CO3)3、100分钟:正常浓度淋洗液4、正接 油性物质污染(如:有机物)按以下步骤冲洗(流量 0

液相色谱柱的清洁方法

高效液相色谱(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的一种分离分析技术,是现代分离和测定的重要手段。自问世以来,它以其分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高、沸点高但不能汽化热不稳定的生理活性物质等优点,在生物化学、医学和临床分析等领域得到了广泛的应用。高效液相色谱(HPLC)柱是一种消耗品,随着使

探讨正相色谱柱与反相色谱柱的安装保存和检测

色谱柱的安装:1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积,进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线,同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前,确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。2、为了使色谱柱与仪器系统达zu

探讨正相色谱柱与反相色谱柱的安装保存和检测

色谱柱的安装:1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积,进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线,同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前,确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。2、为了使色谱柱与仪器系统达zu

色谱柱的清洗和再生方法

除非特殊说明,在所有情况下,所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40~60倍。应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等,比较色谱柱性能的改善,以确定清洗的效果。确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液,清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。

液相色谱柱的再生处理

液相色谱柱的再生处理色谱柱使用久了,会出现分离度降低,理论塔板数降低等柱效降低的现象,适当处理能使柱效恢复。但不是所有柱子都能倒冲的,zui好问问生产商。不了解的话,还是按下面的方法处理一下试试。常规处理:硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱每一次用完后用低流速长时间的二氯甲烷或正己烷等溶剂冲洗;键合相硅

色谱柱的保存操作和再生

  保存操作  1、如果流动相含有酸或无机盐,应当先用去离子水(20倍柱体积)冲洗干净。然后用用100%乙腈或甲醇保存色谱柱。最后用柱子的接头密封,并放在稳定的环境中存放。  2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落,避免造成色谱柱性能的降低。  色谱柱的再生  用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序

色谱柱的平衡和再生技巧

反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇(或乙腈)/水中的。请一定确保您所使用的活动相和甲醇(或乙腈)/水互溶,由于色谱柱在运输过程中可能会干掉,因此在用活动相分析样品之前,应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱。  假如您所使用的活动相中含有缓冲盐,应留意用含水量很高(约95%)的活动

液相色谱柱的再生处理

色谱柱使用久了,会出现分离度降低,理论塔板数降低等柱效降低的现象,适当处理能使柱效恢复。但不是所有柱子都能倒冲的,最好问问生产商。不了解的话,还是按下面的方法处理一下试试。         常规处理:硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱每一次用完后用低流速长时间的二氯甲烷或正己烷等溶剂冲洗;键合相硅胶色谱

什么是液相色谱柱再生

色谱柱使用久了,会出现分离度降低,理论塔板数降低等柱效降低的现象,适当处理能使柱效恢复。但不是所有柱子 都能倒冲的,最好问问生产商。不了解的话,还是按下面的方法处理一下试试。常规处理:硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱每一次用完后用低流速长时间的二氯甲烷或正己烷等溶剂冲洗;键合相硅胶色谱柱、离子交换色谱

安捷伦色谱柱的保存与再生

保存色谱柱:1、如果流动相含有酸或无机盐,应当先用去离子水(20倍柱体积)冲洗干净。然后用用100%乙腈或甲醇保存色谱柱。zui后用柱子的接头密封,并放在稳定的环境中存放。   2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落,避免造成色谱柱性能的降低色谱柱的再生:用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序冲洗柱

导致液相色谱仪反相色谱柱污染的因素

反相色谱在高效液相色谱中是应用最广泛的技术,主要是因为它适用于分析极大多数的非极性物质和离子化合物。大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质,因此,分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的。    反相色谱柱在分离检测过程中,分析物和基质污染能使固定相受到影响,使用过程中应当注意固定

反相高效液相色谱柱的维护如何?

反相高效液相色谱柱是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式,任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分,这部分越大,一般保留值越高。     在高效液相色谱中这是应用面较广的一种分离模式,在生物大分子的反相液相色谱条件下,流动相多采用酸性的、低离子强度的水溶液,并加一

高性能聚合物基质反相色谱柱

图1.  ODP2 HP-4D与早期产品聚合物基质反相色谱柱(ODP-50 4D)相比,理论塔板数(N)提高了约2倍。 创新点: 与早期产品(ODP-50)比较理论塔板数提高了约2倍。 对高极性物质保留力强。 可以很好地分离蛋白质和药物。   图2. 各种色

常规反相色谱柱安装及使用维护指南

何谓常规反相色谱柱?在硅胶或杂化基质颗粒上键合了如C18、C8、C4或苯基等键合相的色谱填料所装填的色谱柱,按反相色谱条件进行操作和分离。反相是液相色谱中zui常使用的分离模式,而C18柱是zui常使用的反相色谱柱之一。新色谱柱开启和安装的推荐步骤:使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统,确保系统干净,不

如何对反相色谱柱进行保养和保存

色谱柱保存,要避免的是两点:细菌滋长导致的发霉以及因保存溶剂挥发导致的填料变干。有机相成分有杀菌作用,在保存试剂中含量不能太低;但100%有机相或接近100%有机相,因为挥发性太强也不好。所以80%上下甲醇含量的甲醇水作为保存溶剂是适宜的。当然,无论选什么作为保存试剂,色谱柱两端的Peek堵头是一定

极性改性反相色谱柱有哪些新特性

Spursil HPLC 极性改性反相色谱柱是以高纯硅胶为基质,采用独特的极性改性技术生产的色谱柱。这个系列的色谱柱不但保留了传统硅胶基质反相色谱柱的性能,而且又增加了一些新的特性: * 填料表面具有极性基团,适合于高水相流动相条件下的分离;* 增强了对亲水性、极性化合物的保留能力;* 独特的选择性

反相液相色谱柱原理及运用维护

反相液相色谱柱是根据溶质、极性活动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱形式,任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分,这部分越大,一般保留值越高,在液相色谱中这是运用面较广的一种别离形式,在生物大分子的反相液相色谱条件下,活动相多选用酸性的、低离子强度的水溶液,并加一定比例的能与水互溶

反相高效液相色谱柱的维护如何?

反相高效液相色谱柱是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式,任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分,这部分越大,一般保留值越高。     在高效液相色谱中这是应用面较广的一种分离模式,在生物大分子的反相液相色谱条件下,流动相多采用酸性的、低离子强度的水溶液,并加一

色谱柱再生——污染填料后对色谱柱的处理过程

1、故障现象 用户反映YWG C18 10μ(4.6mmX150mm)色谱柱使用20天左右后,柱压升高约1Mpa左右,分离效果变差,用蒸馏水清洗色谱柱没有明显改善。 色谱柱分离度不好,柱效不高,可能是用户分析发酵液,简单的过滤后进样分析,其中的蛋白质等可能没有去除完全,致使过多的蛋白质沉淀在色谱柱中

色谱柱再生——污染填料后对色谱柱的处理过程

1、故障现象用户反映YWG C18 10μ(4.6mmX150mm)色谱柱使用20天左右后,柱压升高约1Mpa左右,分离效果变差,用蒸馏水清洗色谱柱没有明显改善。色谱柱分离度不好,柱效不高,可能是用户分析发酵液,简单的过滤后进样分析,其中的蛋白质等可能没有去除完全,致使过多的蛋白质沉淀在色谱柱中,加

高效液相色谱仪反相色谱柱的使用方法

高效液相色谱仪反相色谱柱的使用方法:    1.以0.5ml/min的流速用正己烷-乙腈(99∶1)洗涤柱体积10次,然后用氯仿、异丙醇和甲醇-水依次冲洗柱子。    2.以0.5ml/min的流速用30倍体积的ph 11.0氢氧化钠溶液注意ph值不得超过11.0冲洗柱然后立即用水0.5ml/min

液相色谱仪聚合色谱柱的再生方法

液相色谱仪因其对沸点低的高分子化合物的精度较高,在生物医药行业有较为广泛的应用。用来分离生物分子的聚合柱长期使用会被污染,从而较低柱效,影响检测的速率和灵敏度。因此,须定期进行清洁。    聚合材料的化学稳定性通常以作用力来衡量。一般情况下,主要使用硝酸或氢氧化钠溶液来清洗。一些反相聚合色谱柱的清洗

液相色谱仪聚合色谱柱的再生方法

液相色谱仪因其对沸点低的高分子化合物的精度较高,在生物医药行业有较为广泛的应用。用来分离生物分子的聚合柱长期使用会被污染,从而较低柱效,影响检测的速率和灵敏度。因此,须定期进行清洁。    聚合材料的化学稳定性通常以作用力来衡量。一般情况下,主要使用硝酸或氢氧化钠溶液来清洗。一些反相聚合色谱柱的清洗

液相色谱仪聚合色谱柱的再生方法

液相色谱仪因其对沸点低的高分子化合物的精度较高,在生物医药行业有较为广泛的应用。用来分离生物分子的聚合柱长期使用会被污染,从而较低柱效,影响检测的速率和灵敏度。因此,须定期进行清洁。        聚合材料的化学稳定性通常以作用力来衡量。一般情况下,主要使用硝酸或氢氧化钠溶液来清洗。一些反相聚合色谱

液相色谱柱的保护与再生

    液相色谱仪色谱柱在色谱分析系统中主要起着分离检测物质的作用,如同色谱系统的心脏,同时也是易损耗品。  色谱柱在吸附样品时,样品中所含有的盐、脂质、疏水蛋白质和其它一些生物物质都有可能与色谱柱发生相互作用,一些保留值较小的物质如盐类比较容易被冲出色谱柱,而一些保留性较强的组分,流动相溶液不足以

液相色谱柱的保护与再生

液相色谱柱的保护与再生液相色谱仪色谱柱在色谱分析系统中主要起着分离检测物质的作用,如同色谱系统的心脏,同时也是易损耗品。  色谱柱在吸附样品时,样品中所含有的盐、脂质、疏水蛋白质和其它一些生物物质都有可能与色谱柱发生相互作用,一些保留值较小的物质如盐类比较容易被冲出色谱柱,而一些保留性较强的组分,流

IC色谱分离柱的保养与再生

离子色谱(IC)是非常精密的分析仪器。通常,IC样品都需要前处理后,方可进样分析,不建议用户未经任何处理直接进样!分离柱(A Supp5 阴离子)部分维护注意pH范围3-12,浓酸、浓碱必须经处理后方可进样样品要事前过滤(0.45μm),流速

色谱柱的再生手段有哪些?

(1 )反相柱的再生,采用以甲醇:水=90: 10(V/V),纯甲醇,异丙醇,二氯甲烷等溶剂作流动相,顺次冲洗,每种流动相流经色谱柱的量为20~30倍色谱柱体积然后再以相反顺序冲洗色谱柱。(2)正相柱再生。顺次以正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作流动相冲洗色谱柱。每步注意平衡溶剂的顺序,不要颠倒。每种