武汉植物园植物资源可持续利用中心召开学术交流会
10月21日下午，武汉植物园植物资源可持续利用中心在2号会议室召开了2011年度学术交流会。交流会由中心主任彭俊华研究员主持，所属学科组部分组长及研究生共50余人参加了会议。 交流会上，来自植物资源可持续利用中心各学科组的科研人员为大家作了题为“三萜抗癌化合物合成途径关键酶基因的挖掘（天然药物生物合成学学科组黎佳）”、Anthocyanin Biosynthesis in Peach Leaf (Prunus persica f. atropurpurea)（果树分子育种学学科组周莹）、“能源植物中国芒研究”（植物应用基因组学学科组赵华）、“两株产油微藻分批培养过程中细胞密度、干重及总脂含量变化（植物生物技术学科组梅洪）”、“人工驯化对葡萄中糖代谢相关基因的影响（园艺作物生物学学科组辛海平）”和Biosynthesis and Regulation of Bioactive Compounds in Ep......阅读全文
基因操作的工具酶2
（三） DNA连接酶的反应条件影响连接效率的因素有：1. 温度（通常在4-15℃ ）2. ATP的浓度(10μM／L - 1mM／L )3. 连接酶浓度（一般平末端大约需1～2U，黏性末端仅需0.1U）4. 反应时间（通常连接过夜）5. 插入片段和载体片段的摩尔比（ 1∶1～5∶1）（四）T4 DN
基因操作的工具酶1
一、 限制性核酸内切酶及其应用（一）限制性核酸内切酶的发现当λ(k)噬菌体侵染E.coliB时，由于其DNA中有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列，被降解掉。而E.coliB的DNA中虽然也存在这种特异序列，但可在EcoB甲基化酶的作用下，催化S-腺苷甲硫氨酸（SAM）将甲基转移给限制酶识别序列的特定
基因操作的工具酶3
（三）T4 DNA聚合酶 T4DNA聚合酶是从T4噬菌体感染了的大肠杆菌中分离出来的， 1.酶催活性： ⑴5′→3′的聚合酶活性 ⑵3 ′→ 5 ′的核酸外切酶活性。其外切酶活性要比大肠杆菌聚合酶 I 的活性高200倍。比Klenow 片段酶强100～1,00
单胺氧化酶A基因的概述
MAO-A偏重于极性芳香胺5-羟色胺、去甲肾上腺素和肾上腺素的分解脱氨，它对选择性抑制剂如氯吉兰敏感。
什么是单胺氧化酶A基因
人类单胺氧化酶（MAO）单体的丝带模型。图中的MAO-A与线粒体的外膜相连，并与FAD和抑制剂氯吉兰相结合 单胺氧化酶A（MAO-A）存在于神经元和星形胶质细胞中。除中枢神经系统外，MAO-A还存在于肝、胃肠道和胎盘中。MAO-A是消化道摄取的单胺类物质代谢中的重要酶，可以使单胺类神经递质失活
几丁质酶用于抗病基因工程
进入20世纪80年代，随着分子生物学的蓬勃发展，使几丁质酶用于生物防治的研究上升到基因工程水平。1984年Shapira把几丁质酶基因从粘质沙雷氏菌（S.marcescens）克隆到E.coli后，被整合的E.coli和酶的提取液，在室温条件下均表现出对真菌的生物防治能力。1988年Phillio
单胺氧化酶A基因的功能
单胺氧化酶A的一个重要作用是平衡大脑中5-羟色胺的分泌。5-羟色胺的浓度水平会影响到人用来控制愤怒情绪的脑部活动区域。因此，MAOA基因表达量的高低，直接影响个体的情绪水平，进而对其行为产生影响。 MAOA基因能够调节大脑中一种分解多巴胺和其他神经传导物质的酶的活性，类似于抗抑郁药含有的“感觉
微生物果胶酶基因
近10年来，已从不同属的真菌、细菌和放线菌中克隆和测序的果胶酶基因至少有70个(表1)，其中来自真菌的超过40个，且大多是多聚半乳糖醛酸酶基因。从中克隆到果胶酶基因的真菌主要有曲霉菌、炭疽菌、镰刀菌和灰霉菌等。例如目前已从黑曲霉(Aspergillus niger)中克隆到6个多聚半乳糖醛酸酶基因，
基因突变致酶活性异常
由于基因突变导致酶活性降低或增高所引起的疾病称为遗传性酶病（hereditary enzymopathy)。遗传性酶病与分子病的区别在于后者引起机体功能障碍是蛋白质分子变异的直接后果；而前者则由于合成酶蛋白结构异常或调控系统突变后导致酶蛋白合成数量减少，通过酶的催化作用间接导致代谢紊乱所
植物酯酶同工酶基因的染色体定位
一、原理酶和蛋白质是基因表达的产物，基因位于染色体上。当某一对同源染色体缺失时，位于这对染色体上的基因和它们所编码的酶或蛋白质也就随之丢失。以正常小麦及其缺体系为材料，通过蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳和同工酶分析，即可确定编码这些酶或蛋白质的基因在基因组中的定位（位于哪对染色体上）。酯酶是催化酯类化合物
限制酶在基因工程和基因诊断中的应用
限制酶的上述特性在基因工程和基因诊断中具有重要用途：①首先不论DNA的来源如何，用同一种内切酶切割后产生的粘性末端很容易重新连接，因此很容易将人和细菌或人和质粒任何两个DNA片段连接在一起，即重新组合，这是重组DNA技术的基础。②人类的基因组很大，不切割无法分析其中的基因。限制酶能把基因组在特异的部
基因重组胰蛋白酶与传统胰酶的消化对比
胰蛋白酶（Trypsin）是一种丝氨酸蛋白水解酶。其前体为无生物活性的胰蛋白酶原（trypsinogen），产生于胰脏。随胰液分泌到小肠中，被小肠中的肠肽酶激活后，能将蛋白质分解为多肽，进而分解成为氨基酸。其切割肽链的位点主要位于赖氨酸或精氨酸的羧基端。故在体外细胞培养中，胰蛋白酶被用于消化贴壁细胞
荧光素酶基因是怎样产生的
用作报告基因的荧光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物，在还原型黄素单核苷酸参与下，使脂肪醛氧化为脂肪酸，同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素，同时放出光
双荧光素酶报告基因测试
在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不够便利。因为各自的测试化学，处理要求，检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因
双萤光素酶报告基因检测
萤光素酶报告基因系统广泛应用于真核生物基因表达和细胞生理学研究，包括受体活性、转录因子、细胞信号转导、mRNA加工和蛋白质折叠等。萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单萤光素酶报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双萤光素
等位基因酶的基本信息
中文名称等位基因酶英文名称allozyme定 义由等位基因产生的一组酶，其氨基酸序列不同，因此在性质上有差异。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
基因工程常用的工具酶1
一、限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）1．定义：凡能识别和切割双链DNA分子内特定核苷酸序列的酶，也称为限制酶（restriction enzyme，RE）。2．类型：来自原核生物，有三种类型。Ⅰ型：兼具甲基化修饰和ATP参与的核酸内切酶活性，随机切割。Ⅱ型：大多能
基因工程常用的工具酶2
①增加限制酶的用量，平均每微克底物DNA可高达10单位甚至更多。②增加酶反应体系的体积，以使潜在的抑制物被相应的稀释。③延长酶解反应的保温时间。④向反应体系中添加亚精胺（spermidine）（终浓度为1~2.5mmol/L），亚精胺与负电性的杂质结合。注意，亚精胺在4℃时会沉淀DNA，因此最好在反
荧光素酶基因是怎样产生的
用作报告基因的荧光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物，在还原型黄素单核苷酸参与下，使脂肪醛氧化为脂肪酸，同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素，同时放出光
荧光素酶基因是怎样产生的
用作报告基因的荧光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物，在还原型黄素单核苷酸参与下，使脂肪醛氧化为脂肪酸，同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素，同时放出光
荧光素酶基因是怎样产生的
用作报告基因的荧光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物，在还原型黄素单核苷酸参与下，使脂肪醛氧化为脂肪酸，同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素，同时放出光
荧光素酶基因是怎样产生的
用作报告基因的荧光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。细菌荧光素酶以脂肪醛为底物，在还原型黄素单核苷酸参与下，使脂肪醛氧化为脂肪酸，同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素，同时放出光
等位基因酶的基本信息
中文名称等位基因酶英文名称allozyme定 义由等位基因产生的一组酶，其氨基酸序列不同，因此在性质上有差异。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
β半乳糖苷酶基因在基因工程中的应用
β-半乳糖苷酶基因被广泛地应用于包括作为报告基因、构建载体、转基因研究和基因治疗等多个分子生物学研究领域。具体介绍如下：1在载体构建中的应用β-半乳糖苷酶可催化X-ga1（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷） 水解，产物呈蓝色，易于检测和观察，基于这一特点，β-半乳糖苷酶基因常作为载体组分，
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的技术流程
启动子的预测转录因子的预测报告基因质粒的构建实验方法及结果分析 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。扩增转录因子质
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
荧光素酶报告基因的应用原理
应用原理转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase
关于转座酶基因的作用的介绍
在基因组进化过程中，转座酶基因的作用在许多方面起作用。最明显的效应是转座子能够启动重组，最后导致基因组重排。这种作用与这些转座因子的转座活性无关，而只是由于染色体上有某一转座因子的几份拷贝，于是在同一染色体或不同染色体上有着相同转座因子序列的部位之间发生重组。重组的结果可能会缺失若干个有重要功能
荧光素酶报告基因的技术流程
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒