基因工程常用的工具酶1
一、限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）1．定义：凡能识别和切割双链DNA分子内特定核苷酸序列的酶，也称为限制酶（restriction enzyme，RE）。2．类型：来自原核生物，有三种类型。Ⅰ型：兼具甲基化修饰和ATP参与的核酸内切酶活性，随机切割。Ⅱ型：大多能特异识别4～6个核苷酸序列（回文结构），最大识别序列为8个核苷酸，如SfiI、NotI；但有近10种Ⅱ型限制酶的识别序列为非回文结构，如SfaNI、MnlI等，Ⅱ型限制酶均可作为基因工程的工具酶。另有一些来源不同的限制酶的识别位点是相同的核苷酸序列，将这类酶特称为同工异源酶（isoschizomers）或同裂酶。同工异源酶切割产生相同的末端；有一些同工异源酶对于切割位点上的甲基化碱基的敏感性有所差别，故可用来研究DNA甲基化作用，如SmaI和XmaI；HpaII和MspI；MboI和Sau3AI是成对的同工异源酶；其中HpaII和Ms......阅读全文
基因工程常用的工具酶1
一、限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）1．定义：凡能识别和切割双链DNA分子内特定核苷酸序列的酶，也称为限制酶（restriction enzyme，RE）。2．类型：来自原核生物，有三种类型。Ⅰ型：兼具甲基化修饰和ATP参与的核酸内切酶活性，随机切割。Ⅱ型：大多能
基因工程常用的工具酶2
①增加限制酶的用量，平均每微克底物DNA可高达10单位甚至更多。②增加酶反应体系的体积，以使潜在的抑制物被相应的稀释。③延长酶解反应的保温时间。④向反应体系中添加亚精胺（spermidine）（终浓度为1~2.5mmol/L），亚精胺与负电性的杂质结合。注意，亚精胺在4℃时会沉淀DNA，因此最好在反
基因工程的载体和工具酶1
第一节载体引言基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制和表达、不易进入受体细胞、不能稳定维持，所以就必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来实现。作为基因克隆的载体必须具备以下特性：⑴载体必须是复制子。⑵具有合适的筛选标记，便于重组子的筛选。⑶具备多克隆位点（M
基因工程的载体和工具酶4
与II型核酸内切酶有关的几个概念粘性末端：cohesive ends是指DNA分子在限制酶的作用之下形成的具有互补碱基的单链延伸末端结构，它们能够通过互补碱基间的配对而重新环化起来。平 末 端 ：Blunt end在识别序列对称处同时切开DNA分子两条链，产生的平齐末端结构。则不易于重新环化。同裂酶
基因工程的载体和工具酶3
2.M13噬菌体载体的构建 ⑴ 在IS区内插入LacZ基因 ⑵在标记基因区内组装MCS区段 所以能通过a互补在X-Gal/ IPTG平板上识别重组体。这类载体包括了 M13mp8、9 和 M13mp18 、 19等 这类载体的突出优点在于其既可以提供单链DNA，也可以提供双链的D
基因工程的载体和工具酶5
（二）Klenow片段酶Klenow片段是大肠杆菌聚合酶 I 全酶经枯草杆菌蛋白酶处理后产生的大片段酶分子，分子量为76KD 。酶催活性：⑴5’ →3’ 的聚合酶活性 ⑵3’→5’ 的核酸外切酶活性Klenow片段的主要用途（利用5’ →3’ 的聚合酶活性）：⑴修补限制性酶消化DNA形成的3
基因工程的载体和工具酶2
2、pUC质粒载体1987年，J.Messing和J.Vieria采用MCS技术在pBR322基础上构建的。结构：（1）来自于pBR322的Ori（2）氨苄青霉素的抗性基因(ampr)。但核苷酸序列发生了变化（3） LacZ′基因编码β—半乳糖酶的α—肽链即氨基末端。（4）MCS区段是一段用于插入外
基因工程的载体和工具酶应用结合案例
第一节 载体引 言基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制和表达、不易进入受体细胞、不能稳定维持，所以就必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来实现。作为基因克隆的载体必须具备以下特性：⑴载体必须是复制子。⑵具有合适的筛选标记，便于重组子的筛选。⑶具备多克隆位点
基因工程操作的各种工具酶都是什么
基因工程操作中涉及一系列相互关联的酶促反应。已经知道有许多重要的核酸酶，如限制性内切核酸酶、外切核酸酶、DNA连接酶、DNA聚合酶、反转录酶、DNA及RNA的修饰酶等，在基因工程的操作中有着广泛的用途。 1.限制性内切核酸酶 限制性内切核酸酶(restrictionendonuclease)
基因操作的工具酶1
一、 限制性核酸内切酶及其应用（一）限制性核酸内切酶的发现当λ(k)噬菌体侵染E.coliB时，由于其DNA中有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列，被降解掉。而E.coliB的DNA中虽然也存在这种特异序列，但可在EcoB甲基化酶的作用下，催化S-腺苷甲硫氨酸（SAM）将甲基转移给限制酶识别序列的特定
基因工程中主要的工具酶有哪几种
基因工程工具酶主要包括限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类，具体解释如下：1、DNA限制性内切酶生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息；2
基因工程的载体1
引 言基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制和表达、不易进入受体细胞、不能稳定维持，所以就必须借助于“载体”及其“寄主细胞”来实现。作为基因克隆的载体必须具备以下特性：⑴载体必须是复制子。⑵具有合适的筛选标记，便于重组子的筛选。⑶具备多克隆位点（MCS），
什么是工具酶呢？工具酶都有哪些？
作为试剂用于测定化合物浓度或酶活力的酶称为工具酶。对于底物或产物不能直接测定或难于准确测定的酶促反应，采用酶耦联法测定。1.NAD（P）十或NAD（P）H偶联的脱氢酶及其指示反应。2.偶联H2O2的工具酶及其指示反应有些酶作用于底物时，可使其氧化产生H2O2，在POD的作用下使色素原氧化显色进行测定
模具检测常用的工具有哪些
模具检测常用的工具有哪些模具检测常用的工具有哪些？珠海天创仪器公司为大家详细说明：1 手动三坐标 测量坐标尺寸，一般线性尺寸 0.01mm 2 投影仪 相交构造尺寸，一般线性尺寸 0.01mm 3 精密千分尺 测量线性尺寸直径等 0.001mm 4 卡尺 相交构造尺寸，一般线性尺寸 0.01mm 5
几丁质酶用于抗病基因工程
进入20世纪80年代，随着分子生物学的蓬勃发展，使几丁质酶用于生物防治的研究上升到基因工程水平。1984年Shapira把几丁质酶基因从粘质沙雷氏菌（S.marcescens）克隆到E.coli后，被整合的E.coli和酶的提取液，在室温条件下均表现出对真菌的生物防治能力。1988年Phillio
关于工具酶的连接酶的介绍
它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 连接酶有T4噬菌体
基因操作的工具酶2
（三） DNA连接酶的反应条件影响连接效率的因素有：1. 温度（通常在4-15℃ ）2. ATP的浓度(10μM／L - 1mM／L )3. 连接酶浓度（一般平末端大约需1～2U，黏性末端仅需0.1U）4. 反应时间（通常连接过夜）5. 插入片段和载体片段的摩尔比（ 1∶1～5∶1）（四）T4 DN
基因操作的工具酶3
（三）T4 DNA聚合酶 T4DNA聚合酶是从T4噬菌体感染了的大肠杆菌中分离出来的， 1.酶催活性： ⑴5′→3′的聚合酶活性 ⑵3 ′→ 5 ′的核酸外切酶活性。其外切酶活性要比大肠杆菌聚合酶 I 的活性高200倍。比Klenow 片段酶强100～1,00
关于工具酶的相关介绍
基因工程涉及众多的工具酶可粗略的分为限制酶，连接酶，聚合酶，核酸酶和修饰酶五大类。其中，以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。 DNA限制性内切酶： 生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使
常用酶的配制
1．溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。 2．蛋白水解酶类 贮存液 贮存温度 反应浓度 反应缓冲液 温度 预处理 0.01mol/L Tris(pH7.8)
常用酶的配制
实验概要常用酶的配制实验步骤1．溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。2．蛋白水解酶类 a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。 b：自消化可消除DN
常用引物设计工具大集合
Oligo 6作为目前最好、最为专业的引物设计软件，Oligo 的功能很强大，他主要功能有：普通引物对的搜索、测序引物的设计、杂交探针的设计以及评估「引物对」质量的功能。如何使用Oligo6 请参看：「两分钟教你学会 Oligo 7」BLASTBLAST（Basic Local Alignment
常用的酶和常用的底物有哪些？
常用的酶1.辣根过氧化物酶（HRP）：目前酶联免疫吸附试验中应用最广泛的标记用酶。由无色的糖蛋白（主酶）和亚铁血红蛋白（辅基）结合而成的复合物。辅基是酶活性基团，而主酶则与酶活性无关，HRP的纯度用RZ（HRP分别在403nm和275nm处的吸光度比值）表示，RZ值应大于3.0。RZ值仅说明血红素基
基因工程角蛋白酶的研究
以往对角蛋白酶的研究工作主要集中于菌种筛选、酶的提取纯化和活力测定等基础工作，对酶结构和基因表达的研究极少。20世纪90年代，随着分子生物学技术的发展，国外的一些学者开始进行角蛋白酶基因工程表达和分子结构等方面的研究。Lin X等采用随机引物PCR的方法获得了编码地衣芽孢杆菌PWD-1菌株分泌的角蛋
基因工程角蛋白酶的研究
以往对角蛋白酶的研究工作主要集中于菌种筛选、酶的提取纯化和活力测定等基础工作，对酶结构和基因表达的研究极少。20世纪90年代，随着分子生物学技术的发展，国外的一些学者开始进行角蛋白酶基因工程表达和分子结构等方面的研究。Lin X等采用随机引物PCR的方法获得了编码地衣芽孢杆菌PWD-1菌株分泌的角蛋
常用的酶有哪些？
常用的酶有：1.辣根过氧化物酶（HRP）： 目前酶联免疫吸附试验中应用最广泛的标记用酶。由无色的糖蛋白(主酶)和亚铁血红蛋白(辅基)结合而成的复合物。辅基是酶活性基团，而主酶则与酶活性无关，HRP的纯度用RZ(HRP分别在403nm和275nm处的吸光度比值)表示，RZ值应大于3.0 。RZ值仅说明
修饰性工具酶功能应用
（一）末端转移酶（terminal transferase）l 末端转移酶是一类不依赖于DNA模板的DNA聚合酶。l 特性：该类酶可以在没有模板链存在的情况下，将核苷酸连接到dsDNA或ssDNA的在3’－OH。特别是对于平末端的双链DNA末端加尾十分有用。l 最常见的用途：给外源DNA片段及载体分
免疫酶技术中常用的酶底物系统
各种免疫酶技术,最终都是以某种显色反应而揭示待测物质来进行定性和定量分析。不同酶要选择相应的底物,见下表。免疫酶技术中常用的酶-底物系统酶底物显色反应测定波长/nm辣根过氧化物酶二氨基联苯胺深褐色沉淀5-氨基水杨酸棕色449邻苯二胺橘红色492/460邻联甲苯胺蓝色4254-硝基酚磷酸黄色400碱性
酶活力测定常用的方法
酶活力测定常用的方法有终点法和动力学方法两类。终点法测定完成一定量反应所需的时间，如α-淀粉酶的活力测定。因为碘对淀粉呈现蓝色反应，当淀粉溶液中加入淀粉酶后，碘的蓝色反应消失而呈现红棕色;碘对淀粉颜色反应消失的时间可表示淀粉酶活力的大小。碘对淀粉颜色反应消失花的时间越短，表示酶的活力越高。动力学方法
Realtime－PCR实验注意事项（防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...1
实验中的一些好习惯 加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均 移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性 一定要记着关水浴箱，切记切记 多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了 所有的试剂都自己配