生化与细胞所研究发现转录中介体复合物的新功能

《细胞》子刊《分子细胞》(Molecular Cell)杂志于1月19日在线发表了中国科学院上海生科院生化与细胞所王纲研究组、惠静毅研究组和美国新泽西医科大学的田斌研究组合作的一项最新研究成果。该工作发现了中介体复合物(Mediator Complex)在调控mRNA可变加工中的重要作用。 基因的表达调控受到转录及转录后等多种水平的调节。mRNA的加工,包括加帽、剪接、加尾等作为转录后调控的重要方式,是维持生物蛋白质功能多样性的重要机制。mRNA可变加工与细胞的命运决定等发育过程、以及疾病的发生发展相关。转录中介体复合物(Mediator Complex)的经典功能是转录因子和通用转录机器之间传递信息的分子桥梁,精细控制基因的转录发生。长期以来有预测性假说认为,转录中介体复合物可能与mRNA的加工有关,但一直缺乏突破性发现。 王纲研究组的博士研究生黄燕、姚潇等首先用体外的方法表达纯化了一系列可溶的中介体......阅读全文

3.5-RNA-反转录

利用 RNA 模板通过反转录获得 DNA,进而复制和感染细胞实验材料poly(A)+RNA反转录酶鼠源反转酶 或禽源反转录酶试剂、试剂盒oligo(dT)12-18lmol LTris-Cl1mol LTris-Cllmol LKC125 mmol LMgCl2dNTP 混合物0.lmol LDTT

mRNA转录加工过程

加帽即在mRNA的5'-端加上m7GTP的结构。此过程发生在细胞核内,即对HnRNA进行加帽。加工过程首先是在磷酸酶的作用下,将5'-端的磷酸基水解,然后再加上鸟苷三磷酸,形成GpppN的结构,再对G进行甲基化。加尾这一过程也是细胞核内完成,首先由核酸外切酶切去3'-端一些过

转录水平的调控

该模型认为在整合基因的5’端连接着一段具有高度专一性的DNA序列,称之为传感基因。在传感基因上有该基因编码的传感蛋白。外来信号分子和传感蛋白结合相互作用形成复合物。该复合物作用于和它相邻的综合基因组,亦称受体基因,而转录产生mRNA,后者翻译成激活蛋白。这些激活蛋白能识别位于结构基因(SG) 前面的

什么是转录中止?

转录终止: 当RNA链延伸到转录终止位点时,RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键,RNA-DNA杂合物分离,转录泡瓦解,DNA恢复成双链状态,而RNA聚合酶和RNA链都被从模板上释放出来,这就是转录的终止(termination。

RNA-大量转录合成

            实验材料 模板 DNA 或质粒 试剂、试剂盒 TE   TE 饱和酚   氯仿

RNA-标准转录反应

实验材料 模板 DNA 或质粒试剂、试剂盒 TE 异丙醇 3mol LNaAc 无水乙醇 5×转录缓冲液 l00 mmol L DTT RNasin rATPrGTPrUTP 各 2.5 mmol L [α42P] rCTP SPGT3 或 T7RNA 聚合酶 TE-饱和的酚氯仿异戊醇 DN

tRNA转录加工过程

主要加工方式是切断和碱基修饰。真核生物tRNA前体一般无生物学特性,需要进行加工修饰。加工过程包括:(1)剪切和拼接tRNA前体在tRNA剪切酶作用下,切成一定大小的分子。大肠杆菌RnaseP特异切割tRNA前体5′旁侧序列,3′-核酸内切酶如RnaseF可将tRNA前体3′端一段序列切下来。Rna

转录的过程介绍

在转录过程中,DNA模板被转录方向是从3′端向5′端;RNA链的合成方向是从5′端向3′端。RNA的合成一般分两步,第一步合成原始转录产物(过程包括转录的启动、延伸和终止);第二步转录产物的后加工,使无生物活性的原始转录产物转变成有生物功能的成熟RNA。但原核生物mRNA的原始转录产物一般不需后加工

胞外转录反应

实验概要RNA聚合酶由一条多胜肽  (polypeptides)所构成,其在进行转录反应时所须辨认的启动子长度仅20bp左右,而且转录起始位置非常明确,转录效能良好,成了目前进行胞外转录反应时的最佳选择。要进行胞外转录反应时,仅需将目标基因次选殖   (subclone)至带有SP6,T3或T7启动

RNA-标准转录反应

            实验材料 模板 DNA 或质粒 试剂、试剂盒 TE 异丙醇 3mol LNaAc

转录物的定义

中文名称转录物英文名称transcript定  义在DNA模板上由RNA聚合酶催化转录生成的mRNA。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

RNA-大量转录合成

实验材料 模板 DNA 或质粒试剂、试剂盒 TE TE 饱和酚 氯仿异内醇 3mol LNaAc 无水乙醇 5X 转录缓冲液 lOOmmoL LDTT RNasin rATPrGTPrUTPrCTP SF6T3 或 T7RNA 聚合酶 异戊醇 DNase 7.5mol L 乙酸铵 无水乙醇 乙醇实验

rRNA转录加工过程

主要加工方式是切断。真核细胞的rRNA基因(rDNA)属于一种被称为丰富基因(redundant gene)族的DNA的序列,即染色体上一些相似或完全一样的纵列串联基因(tandem gene)单位的重复。由不能转录的间隔区(spacer)把这些单位分隔开。在这里,间隔区与内含子是不同的概念。在分类

转录因子和转录因子之间可以有相互作用吗

可以转录因子真核生物转录起始十分复杂,往往需要多种蛋白因子的协助,转录因子与RNA聚合酶Ⅱ形成转录起始复合体,共同参与转录起始的过程。根据转录因子的作用特点可分为二类;第一类为普遍转录因子,它们与RNA聚合酶Ⅱ共同组成转录起始复合体时,转录才能在正确的位置开始。除TFⅡD以外,还发现TFⅡA,TFⅡ

体外转录合成单链RNA探针:体外转录法

体外转录法l        体外转录合成单链RNA探针1.      用适当的限制酶消化超螺旋质粒DNA制备5 pmol的线性模板DNA。取一小份消化的DNA(100ng)进行琼脂糖凝胶电泳分析。如有必要,再补加限制性酶进行温育,直至不再残存痕量的未消化DNA。2.      如必须用产生3’突出端

反转录病毒原液检测实验——反转录酶分析法

实验材料病毒试剂、试剂盒SSC乙醇仪器、耗材滴定板滤纸离心机实验步骤1.  加50 μl RT反应混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每个待测或对照样品占一孔。加10 μl 病毒上淸,盖上平板,置于37℃培养箱中温育1~2 h。2.  将各反应液10 μl 点于一张2.5 cm 直径的圆形DE52或

关于启动子的转录单元和转录起点的介绍

  一、转录单元  转录单元(transcription unit) 是一段从启动子开始至终止子(terminator)结束的DNA序列,RNA聚合酶从转录起点开始沿着模板前进,直到终止子为止,转录出一条RNA链。在细胞中,一个转录单元可以是一个基因,也可以是几个基因。  二、转录起点  转录起点是

连缀转录分析实验

核连缀分析用于确定某个克隆的基因是否受转录调控。理论上,核连缀分析应该在检测稳定状态 mRNA 水平变化的杂交实验之后,而在启动子分析之前进行。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验方法原理离心机和转头,沸腾的水浴锅, Dounce 匀浆器,

转录组高通量测序

  (第二代高通量测序技术-454)   转录组即特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和,是研究细胞表型和功能的一个重要手段。与基因组不同的是,转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下,其基因表达情况是不完全相同的。罗氏GS-FLX-Titaniu

转录物组的定义

转录组也称“转录物组”。是一个基因组转录的所有RNA。

简述转录因子的作用

  是通过和顺式因子的互作来实现的。这段序列可以和转录因子的DNA结合域实现共价结合,从而对基因的表达起抑制或增强的作用。  目前,人工转录因子(Artificial Transcription Factor,ATF)的构建已用于转录因子的生物学功能研究中起到重要作用。ATF是指将不同的DNA结合结

转录组测序流程步骤

以真核转录组测序为例,实验流程为总RNA提取-mRNA分离-建库试剂-定量-文库回收-桥式扩增-上机测序;项目分析流程为数据产出数据=数据去杂-转录组拼接-SSR分析及SNP分析-基因功能注释-基因表达差异分析-差异基因表达模式聚类-差异基因富集分析。

人类首次“转录”太阳声波

  英国科研人员对太阳日冕层产生的声波实施“转录”,首次推出太阳“交响乐”。这项研究不但有助于了解太阳大气层活动,还有助于预测太阳耀斑爆发。首次“转录”  谢菲尔德大学太阳物理和空间等离子体研究中心首次把日冕环状磁场振荡转变为人耳可以听到的声音。  3年前,这一研究中心宣布,观察到太阳日冕

转录的调节控制方式

转录的调节控制是基因表达调节控制中的一个重要环节。促进基因转录叫正调节,抑制基因转录叫负调节。在原核生物方面1961年F.雅各布和J.莫诺提出的操纵子学说,得到许多人的验证和充实。操纵子通常的调控方式为:①诱导和阻遏作用;②环腺苷酸(CAMP)和降解物活化蛋白(CAP)的调节作用;③弱化作用。对真核

逆转录的简介

  逆转录(reverse transcription)是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。是某些病毒的复制形式,需逆转录酶的催化。艾滋病病毒(HIV)就是一种典型的逆转录病毒。  逆转录与反转录严格意义上来说没有什么区别,但是逆转录是某些病毒的自主行为,如逆转录病毒,它们

关于转录的特点介绍

  转录时,细胞通过碱基互补的原则来生成一条带有互补碱基的mRNA,通过它携带密码子到核糖体中可以实现蛋白质的合成。与DNA的复制相比,转录有很多相同或相似之处,亦有其自己的特点。  转录中,一个基因会被读取并复制为mRNA。就是说,以特定的DNA片段作为模板,以DNA依赖的RNA聚合酶作为催化剂,

转录的定义和过程

转录(Transcription)是遗传信息从DNA流向RNA的过程。即以双链DNA中的确定的一条链(模板链用于转录,编码链不用于转录)为模板,以A、U、C、G四种核糖核苷酸为原料,在RNA聚合酶催化下合成RNA的过程。作为蛋白质生物合成的第一步,进行转录时,一个基因会被读取并被复制为mRNA,即特

转录组高通量测序

(第二代高通量测序技术-454)  转录组即特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和,是研究细胞表型和功能的一个重要手段。与基因组不同的是,转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下,其基因表达情况是不完全相同的。罗氏GS-FLX-Titanium第二代

转录抑制剂分类

转录抑制剂分为两大类。第一类抑制剂特异性地与DNA链结合,抑制模板的活性,使转录不能进行。这类抑制剂同时抑制DNA复制,例如:放线菌素D、纺锤菌素、远霉素、溴乙锭和黄曲霉素等。第二类抑制剂作用于RNA聚合酶,使RNA聚合酶的活性改变或丧失,从而抑制转录的进行。这类抑制剂只抑制转录,不影响复制,是研究

转录终止因子的定义

中文名称转录终止因子英文名称transcription termination factor定  义辅助具有RNA聚合酶活性的转录复合体特异性地识别转录终止信号的蛋白质因子(如ρ因子等),其作用导致转录终止。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),基因表达与调控(二级学科)