华南植物园发现构建植物ihpRNA的新方法
自从发现双链RNA能引发RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象后,RNAi已经成为分析基因功能的重要工具之一。随着RNAi技术在植物基因功能分析上的广泛应用,迫切需要一种高通量构建发夹RNA(hpRNA)表达载体的方法。 中科院华南植物园华南农业植物遗传育种重点实验室博士生言普在导师段俊研究员的指导下,研究出了一种基于Golden Gate克隆技术构建含内含子发夹结构RNA(ihpRNA)表达载体的新方法。利用该方法,只需在扩增靶基因序列的同时,由引物在序列两端加上相应的BsaI识别和切割位点,经一步酶切/连接反应后,此靶基因片段能同时以正向和反向的位置克隆到pRNAi-GG,形成ihpRNA表达载体结构;整个构建过程只需在一管中通过一个反应完成,构建效率高,且无背景干扰,同时由于pRNAi-GG为植物双元表达载体,构建好的ihpRNA表达载体可直接用于农杆菌转化研究。 该载体构建方......阅读全文
核糖体RNA的结构及功能
结构 测定rRNA的空间排列方式的方法主要有电镜法和交联法。其功能部位通过几种方法确定在70S核糖体图中显示了rRNA分子的结合部位和方向。在电镜下,16SrRNA的排列呈V型,一个臂比一个臂稍厚和长。23S的大小和形状可与50S"皇冠"式样很好匹配。有结论认为,rRNA形成了核糖体亚基的骨架
核糖体RNA的组成及结构
组成 rRNA一般与 核糖体蛋白质结合在一起,形成 核糖体(ribosome),如果把rRNA从核糖体上除掉,核糖体的结构就会发生塌陷。 原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。S为 沉降系数(sedimentation coefficient),当用 超速离心测定一个粒子的
利用-ConcertPlant-试剂从植物组织中纯化-RNA-实验
以下概述的是 ConcertPlant 试剂(Invitrogen) 所附带的方案。该方案不是以酚为基础的,但需要加氯仿。该试剂用于多种植物的组织中分离 RNA, 包括蓝叶云杉针、马铃薯块茎、玉米种子和棉花叶。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。 实验材料
利用-ConcertPlant-试剂从植物组织中纯化-RNA-实验
实验材料 植物组织 试剂、试剂盒 Concert Plant RNA试剂NaCl氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水 实验步骤 一、材料 1.缓冲液、溶液和试剂 ConcertPlantRNA试剂(Invitrogen),4°C预冷 NaCl,5mol/L(无RNA酶)
RNA干扰用于在植物学中的应用
Napoli等将1个查尔酮合成酶基因(chs)置于1个强启动子后导人矮牵牛(Petunia hybrida),试图加深花朵的紫颜色。结果部分花的颜色并非期待中的深紫色,而是形成了花斑状甚至白色,而且这种性状可以遗传。因为导入的基因和其同源的内源基因同时都被抑制,他们将这种现象命名为共抑制(co-su
填补Qiagen空白的植物RNA提取试剂盒
填补Qiagen空白、不用DNA酶消化的植物RNA提取试剂盒 一般公司多糖多酚植物RNA提取试剂盒失败原因和解决方案 很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分,造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的CTAB类的方法提取因为时间太长
RNA干扰技术在植物学中的应用
Napoli等将1个查尔酮合成酶基因(chs)置于1个强启动子后导人矮牵牛(Petunia hybrida),试图加深花朵的紫颜色。结果部分花的颜色并非期待中的深紫色,而是形成了花斑状甚至白色,而且这种性状可以遗传。因为导入的基因和其同源的内源基因同时都被抑制,他们将这种现象命名为共抑制(co-
RNA干扰在植物学中的应用介绍
Napoli等将1个查尔酮合成酶基因(chs)置于1个强启动子后导人矮牵牛(Petunia hybrida),试图加深花朵的紫颜色。结果部分花的颜色并非期待中的深紫色,而是形成了花斑状甚至白色,而且这种性状可以遗传。因为导入的基因和其同源的内源基因同时都被抑制,他们将这种现象命名为共抑制(co-su
用于检测植物组织RNA的原位杂交法
用于检测植物组织RNA的原位杂交法(一)组织切片制备l 植物组织的甲醛固定和包埋1.将植物组织切成小块,立即放入一个装有10~50ml固定剂溶液的烧杯中,把烧杯放到真空脱水机内。调节真空度以形成一个温和的真空,然后慢慢恢复常压。微量便于固定剂渗入组织,必须反复真空和非真空状态。待固定剂充分
植物总RNA的提取实验原理和操作步骤
一、实验目的通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法二、实验原理RNA是一类极易降解的分子,要得到完整的RNA,必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍,可溶解蛋白质,破坏细胞结构,使核蛋白与核酸分离,失活RNA酶,所以RNA从细胞中释放出来时不
植物所利用根系解剖结构揭示草原植物根系功能
通过根系性状理解根系功能及其对植物生长、生态系统过程和功能的影响是根系生态学研究的热点和难点问题。根的解剖结构是理解根系功能以及根系结构与功能关联的关键基础。然而,目前关于单子叶和双子叶草本植物的根系解剖结构及其揭示的根系功能的研究较匮乏。 中国科学院植物研究所研究员白文明研究组以内蒙古典
植物中独特双链RNA合成机制获解析
中科院分子植物科学卓越创新中心研究员张余团队和研究员王佳伟团队与浙江大学教授冯钰团队合作,首次解析了Pol IV-RDR2蛋白复合物的三维结构,并提出了Pol IV-RDR2以双链DNA为模板合成双链RNA的独特分子机制。该研究成果12月24日在线发表于《科学》。Pol IV-RDR2复合物三维
从富含多糖的植物组织中提取和纯化-RNA
实验方法原理 硫氰酸胍能溶解细胞并使蛋白变性. 当用于抽提缓冲液时,可产生无 RNase 的环境□组织抽提后,以中等转速离心匀浆液,以除去小溶性多搪。用苯酚:氯仿将上清液抽提出,RNA 位于水相,DNA 和蛋白质位于苯酚相和两相交界面。用乙酸钾将位于水相的多糖选择件的沉淀出来,然后用氯化锂选
新型植物RNA甲基化编辑工具研发成功
原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/3/519898.shtm近日,中国农业科学院深圳农业基因组研究所联合国内多家单位成功开发出新型植物RNA甲基化编辑工具。该研究对作物基因编辑育种有重要的潜在应用价值。相关研究成果发表在《植物生物技术》(Pla
植物小RNA进入血液,惊世发现还是南柯一梦?
植物小RNA究竟有没有进入人的血液?这个热点起源于2011年南京大学生命科学学院教授张辰宇的研究。 小RNA是?19~24个核苷酸的非编码RNA,可调控蛋白质表达。2011年,张辰宇在国内《Cell research》(细胞研究)杂志上发表研究称,稻米中有一种含量丰富的植物微小RNA(
植物组织总RNA的制备:异硫氰酸胍—酚法
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下:GIT与β-巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性;GIT与 十二烷基肌氨酸钠 (Sarcosyl)作用使蛋白质变性,从而释放RNA;酸性条件下DNA极少发生解离,同蛋白质一起变性被离心下来,RNA则溶于上清中。该法所提RNA纯度高完整性好较适合纯化mRNA,
从富含多糖的植物组织中提取和纯化-RNA
实验方法原理 硫氰酸胍能溶解细胞并使蛋白变性. 当用于抽提缓冲液时,可产生无 RNase 的环境□组织抽提后,以中等转速离心匀浆液,以除去小溶性多搪。用苯酚:氯仿将上清液抽提出,RNA 位于水相,DNA 和蛋白质位于苯酚相和两相交界面
植物基因组DNA及总RNA提取技术1
幼嫩组织的细胞处于旺盛的分裂阶段,核较大而胞质较少,核酸浓度高,且内含物少、次生代谢产物少,蛋白质及多糖类物质相对较少,在SDS或 CTAB物质存在时,经机械研磨,使细胞破裂并释放出内含物,提取的DNA、RNA的产量高,纯度好。 提取DNA所用的提取液、吸头、离心管等需要高压灭菌以灭活DNase。R
植物基因组DNA及总RNA提取技术2
(二)植物总RNA提取 (1)65°C水浴中预热15 mL CTAB提取液。 (2)液氮中研磨2~3 g新鲜或-70°C冷冻的材料。 (3)转移样品至有CTAB提取液的离心管中,立即激烈涡旋30s,短时放回 65°C水浴中(4~5 min)。 (4)加入等体积的氯仿/异戊醇并涡旋混合,10000 r
动植物组织总RNA提取(Trizol法)和mRNA提取
一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。 三、试剂 1、无RNA酶灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(180℃ 2小时)装蒸馏水,然后加入0.01%的DEPC(体积/体积),处理过夜后高
异硫氰酸胍酚法植物组织总RNA的制备
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下:GIT与β-巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性;GIT与 十二烷基肌氨酸钠 (Sarcosyl)作用使蛋白质变性,从而释放RNA;酸性条件下DNA极少发生解离,同蛋白质一起变性被离心下来,RNA则溶于上清中。该法所提 RNA纯度高完整性好较适合纯化mR
核内不均一RNA的结构特点
hnRNA的结构有以下特点:(1) 5′端有帽结构;(2) 3′端有poly(A)尾巴;(3) 帽结构后有3个寡聚U区,每个长约30nt;(4) 有重复序列,位于寡聚U区后面;(5) 有茎环结构,可能分布于编码区(非重复序列)的两侧;(6) 非重复序列中有内含子区。
核内不均一RNA的结构特点
hnRNA的结构有以下特点:(1) 5′端有帽结构;(2) 3′端有poly(A)尾巴;(3) 帽结构后有3个寡聚U区,每个长约30nt;(4) 有重复序列,位于寡聚U区后面;(5) 有茎环结构,可能分布于编码区(非重复序列)的两侧;(6) 非重复序列中有内含子区。
转运RNA的一级结构的介绍
自1965年R.W.霍利等首次测出酵母丙氨酸tRNA的一级结构即核苷酸排列顺序到1983年已有200多个tRNA(包括不同生物来源、不同器官、细胞器的同功受体tRNA以及校正tRNA)的一级结构被阐明。按照A-U、G-C以及G-U碱基配对原则,除个别例外。
Science发现RNA全新结构,可抵抗酶降解
美国科罗拉多大学医学院的研究人员在黄病毒(flavivirus)中发现了一种全新的RNA结构,该结构允许RNA抵抗宿主核酸外切酶的降解。这一发现可以帮助人们开发治疗药物或疫苗,对抗那些致病性的黄病毒,例如登革热病毒、西尼罗病毒、黄热病病毒和乙型脑炎病毒等等。 据介绍,世界上约有40%的人面
核内不均一RNA的结构特点
hnRNA的结构有以下特点:(1) 5′端有帽结构;(2) 3′端有poly(A)尾巴;(3) 帽结构后有3个寡聚U区,每个长约30nt;(4) 有重复序列,位于寡聚U区后面;(5) 有茎环结构,可能分布于编码区(非重复序列)的两侧;(6) 非重复序列中有内含子区。
新研究“点亮”荧光RNA成像的结构机制
5月17日,中国科学院生物物理研究所方显杨研究组与动物研究所李幸研究组合作在《自然-通讯》上发表研究论文,揭示荧光点亮RNA适配体RhoBAST结合与激活荧光团TMR-DN的机制,为理性设计和优化这一重要的FLAP系统提供了机制见解。在活细胞中对生物大分子如蛋白质和RNA等进行时空定位和追踪,对于理
核糖体RNA的结构和功能特点
核糖体RNA,即rRNA,是细胞内含量最多的一类RNA,也是3类RNA(tRNA,mRNA,rRNA)中相对分子质量最大的一类RNA,它与蛋白质结合而形成核糖体,其功能是在mRNA的指导下将氨基酸合成为肽链(肽链在内质网、高尔基体作用下盘曲折叠加工修饰成蛋白质,原核生物在细胞质内完成)。rRNA占R
新研究“点亮”荧光RNA成像的结构机制
5月17日,中国科学院生物物理研究所方显杨研究组与动物研究所李幸研究组合作在《自然-通讯》上发表研究论文,揭示荧光点亮RNA适配体RhoBAST结合与激活荧光团TMR-DN的机制,为理性设计和优化这一重要的FLAP系统提供了机制见解。在活细胞中对生物大分子如蛋白质和RNA等进行时空定位和追踪,对于理
新研究“点亮”荧光RNA成像的结构机制
5月17日,中国科学院生物物理研究所方显杨研究组与动物研究所李幸研究组合作在《自然-通讯》上发表研究论文,揭示荧光点亮RNA适配体RhoBAST结合与激活荧光团TMR-DN的机制,为理性设计和优化这一重要的FLAP系统提供了机制见解。在活细胞中对生物大分子如蛋白质和RNA等进行时空定位和追踪,对于理