俄研究用新方式改善基因疗法效果
如何使具有治疗作用的遗传物质顺利穿过靶细胞的内外膜,并且躲避细胞器的分解,是基因疗法成功与否的关键。俄罗斯科研人员发现,用一种蛋白质制作“密封船”运送少量遗传物质,有望获得更佳疗效。图片来源网络将核糖核酸(RNA)或脱氧核糖核酸(DNA)等外源性遗传物质植入细胞的过程名为“转染”。此前研究发现,用特定的“小干扰RNA”转染靶细胞可抑制其细胞核内的“问题基因”,使这类基因无法指导生成有害物质。为使小干扰RNA顺利穿透靶细胞的内外膜并发挥功效,研究人员尝试制成多种能包裹这种遗传物质并可生物降解的“密封船”——阳离子脂质体,但转染效果并不稳定。 俄联邦医学生物局下属莫斯科免疫研究所的专家日前在荷兰期刊《胶体与表面B辑:生物界面》上发表论文说,为探究上述转染效果的优劣,他们用氨基酸分子数不同且含有荧光物的胶原蛋白二胜肽、三胜肽、四胜肽,分别制成“密封船”,并向其内部填充不同数量的小干扰RNA,然后用这种复合......阅读全文
转染的概念和常规转染技术分类
转染(transfection)是细胞在一定条件下主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两大类。
基因转染技术的转染与分析介绍
具体的基因转染条件应参考所使用的试剂和方法进行优化。靶基因被导入细胞后,一般在转染后48小时,靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。如若建立稳定的细胞系,则可对靶细胞进行筛选,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物,最常用的真核表达基因载体
细胞转染实验的实验步骤细胞转染
1)转染试剂的准备A.将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。B.震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。2)选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡
胜红蓟素的概念
中文名称胜红蓟素英文名称ageratochromene定 义胜红蓟(Ageratum conyzoides)释放到土壤中的他感素的主要成分,对其他植物根的生长有抑制作用。应用学科生态学(一级学科),化学生态学(二级学科)
C肽测定的三个用途
C-肽测定的主要用途包括:①最主要用于评估空腹低血糖。某些β细胞瘤病人医学教|育网搜集整理,特别是有间歇性胰岛素分泌过多时,检测胰岛素可正常但C-肽浓度都升高。当低血糖是由于胰岛素注射所致时,胰岛素水平会很高而C-肽降低,这是因为C-肽不存在于药用胰岛素中,并且外源性胰岛素会抑制β细胞分泌功能。②评
C肽测定的三个用途
C-肽测定的主要用途包括: ①最主要用于评估空腹低血糖。某些β细胞瘤病人,特别是有间歇性胰岛素分泌过多时,检测胰岛素可正常但C-肽浓度都升高。当低血糖是由于胰岛素注射所致时,胰岛素水平会很高而C-肽降低,这是因为C-肽不存在于药用胰岛素中,并且外源性胰岛素会抑制β细胞分泌功能。 ②评估胰岛素
三篇论文:靶定健康细胞抑制癌转移
最近,英属哥伦比亚大学(UBC)的一项脑肿瘤研究提出了一种策略,通过靶定肿瘤周围的健康细胞,来防止肿瘤的扩散。 UBC的这个研究小组——包括Christian Naus、Wun Chey Sin和John Bechberger,致力于研究神经胶质瘤——一种最具侵袭性的脑肿瘤。神经胶质瘤的5年生
siRNA的转染
将制备好的siRNA,siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种: 1.磷酸钙共沉淀将氯化钙,RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合,沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至
细胞瞬时转染
1. 1细胞瞬时转染 原理:通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。应用: 观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失)一
LSCM细胞转染
细胞转染对于活细胞实验,需要实验设备能够维持细胞的生长。显微镜上需要配备合适的热台,可控制一定的 CO2 浓度、合适的湿度和温度等。此外,是否是倒置显微镜? 能否使用高倍镜、油镜或水镜观察细胞? 为了便于成像,一般使用底部为玻璃片的细胞培养皿。由于显微镜并不是无菌的环境,因此对于一般的活细胞实验并不
细胞瞬时转染
摘要: 通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。 原理: 通过 脂质 体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细
siRNA-转染程序
A.siRNA转染的方法 哺乳动物转染的常见方法有:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法(例如,显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。应用脂质体型转染试剂进行转染需要注重的几个方面:1. 转染试剂的用
miRcroRNA转染流程
细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两大类。本实验室主要是质粒转染、miRcroRNA转染、慢病毒转染、药物转染、多肽转染等。 一. 实验材料及试剂 六孔板、CO2培养箱、EP管、酒精灯等;无血清培养基、MEM-α或DM
真核转染
一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉,然而许多在细菌中合成的真核蛋白或因折叠方式不正确,或因折叠效率低下,结果使得蛋白活性低或无活性。不仅如此,真核生物蛋白的活性往往需要翻译后加工,例如二硫键的精确形成、糖基化、磷酸化、寡聚体的形成或者由特异性蛋白酶进行的裂解等等,而
什么是转染-?
转染 (transfection)采用与质粒DNA转化受体细胞相似的方法,即宿主菌先经过CaCl2,电穿孔等处理成感受态细菌,再将重组噬菌体DNA直接导入受体细胞,进入感受态细菌的噬菌体DNA可以同样复制和繁殖,这种方式称为转染。转染是转化的一种特殊形式。
细胞瞬时转染
细胞瞬时转染可用于(1)观察目的基因功能(2)表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失)。实验方法原理通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。
细胞瞬时转染
细胞瞬时转染 实验方法原理 通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的
siRNA的转染
将制备好的siRNA,siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种: 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙,RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合,沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转
PEI-转染法
材料:质粒DNA指数生长的真核细胞PEI (聚乙烯亚胺)1×HBS (pH7.4)配方:PEI 储存液(100 μM):称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS (pH7.4)中, 0.2 μm 滤膜过滤,储存于4℃备用。1×HBS (pH7.4): 将8.76 g NaCl 溶解
PEI转染手册
使用方法1. 接种细胞:用胶原酶消化细胞并计数(不建议用胰酶)。转染前 18-24 小时进行细胞的铺板,以便在转染时,贴壁细胞的密度大约在 80%左右。注:培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。2. 准备 EZ Trans-DNA 复合物1)转染前将所有试剂置于室温 10 分钟。下面,以转染 24
PEI-转染法
材料: 质粒DNA 指数生长的真核细胞 PEI (聚乙烯亚胺) 1×HBS (pH7.4) 配方: PEI 储存液(100 μM):称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS (pH7.4)中, 0.2 μm 滤膜过滤,储存于4℃备用。 1×HBS (pH7.4): 将8.76 g
转染试剂:Roche
转染试剂:Roche[选购宝典]现转染市场多个新产品涌现而出,一些旧产品更弦易主。一提起罗氏的转染试剂,大家肯定立马想到Fugene 6/HD。即使Fugene 6/HD不在手,罗氏也毫不畏惧,因为它集合二十年的转染经验,推出了X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP转染试
转染的分类
包括:1.DEAE-葡聚糖法DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一,DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取,用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究,但用于稳定转染却不是十分可靠。2.磷酸钙法磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法,因为试剂易取得,价格便宜
细胞转染:脂质体转染的几个实验方法
实验原理 脂质 体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1:1)。它适用于把DNA 转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高,优于磷酸钙法,比它高5-100倍,能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时,首先需要优化转染条件,应找出该批LR对转
什么细胞转染方法可以转染thp1细胞
如果细胞转染效率很低,可以试试LTX试剂,这种试剂比较贵,但是效率高。如果还是不行,那就只能电转了。
细胞转染原理及常见转染方法的比较(一)
实验原理:转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的
细胞转染原理及常见转染方法的比较(二)
线型PEI(Line PEI,LPEI)与其衍生物用作基因转染载体的研究比分枝状PEI(Branched PEI,BPEI)要早一些,过去的研究认为在不考虑具体条件,LPEI/DNA转染复合物的细胞毒性较低,有利于细胞定位,因此与BPEI相比应该转染效率高一些。但最近研究表明BPEI的分枝度高有
上海大学校长刘昌胜向新生提出三点希望
8月23日,上海大学2024级新生开学典礼举行。典礼上,上海大学校长、中国科学院院士刘昌胜向2024级新生送上寄语。“上海大学”微信公众号图“置身全面推进强国建设、民族复兴伟业的关键时期,你们生逢其时,重任在肩,责无旁贷。”刘昌胜指出,当前,新一轮科技革命和产业变革,正以前所未有的速度重塑着世界格局
肽、多肽、活性肽与大肽如何划分?
分子量段在50~5000之间的才能称为肽。分子量段在5000~10000之间的称为大肽。分子量段在50~2000之间的称为小肽、寡肽、低聚肽,也称为小分子活性多肽。生物学家将肽称为“氨基酸链”,将小分子活性多肽统称为“生物活性肽”。常见的有二肽(Dipeptide),三肽(Tripeptide),甚
细胞转染快准狠GeneCopoeia转染试剂的适用细胞
细胞转染是指将外源基因如DNA,RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程,细胞培养完成后需进行细胞转染,根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前,常用的细胞转染方法主要分为三类途径:物理介导(电穿孔法,基因枪法、显微注射法)、化学介导(脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物