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细胞瞬时转染

细胞瞬时转染可用于(1)观察目的基因功能(2)表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失)。实验方法原理通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。实验材料细胞样品试剂、试剂盒FuGENE 6脂质体仪器、耗材电穿孔实验步骤一般流程:1)细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖。2)细胞转染(脂质体、电穿孔、FuGENE6等)3)48小时以后鉴定目的基因的表达情况。前期准备:l构建好的外源基因载体,或目的基因基本信息。l待转染的细胞系(1×106个细胞,可传代,倍增时间小于48小时)以及细胞培养条件的说明。l若需要检测靶基因的表达,请提供相应抗体。收起 注意事项1. 转染48——72......阅读全文

知识分享:细胞转染原理及常见转染方法的比较

  实验原理:   转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。   常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝

阳离子脂质材料DOTMA和DOPE在脂质体转染实验的应用

本期AVT小编给大家分享一下DOTMA和DOPE在脂质体转染实验中的应用,在前段时间,AVT产品库新添了几款新型注射级阳离子脂质材料,包括DLin-MC3-DMA、DMG-PEG2000,DOTMA等,感兴趣的小伙伴可以去我们的产品图一睹究竟,让我们接着往下看脂质体转染的那些事!脂质体转染实验步骤脂

如何提高转染实验的效率

在本章节我们解释了转染体系的关键组分对细胞转染  实验的效率有何影响,并且合理的给予您一些关于如何使它们更有利于您研究方面的提示。 【组织培养试剂】 一般提示:优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各

细胞核转染技术原理、步骤及应用

全球公认的最高效转染技术,针对免疫细胞、神经细胞、干细胞等几乎所有的难转染细胞系或原代细胞,以及悬浮细胞。    ——Amaxa品牌Nucleofector细胞核转染技术 Amaxa®Nucleofector®技术是Lonza(原Amaxa)公司的专利创新技术,它综合应用传统的电穿孔技术及细胞特异性

各种转染试剂的中文转染方法

FuGENE6(Roche)转染步骤: 转染前一天将细胞分至培养板,转染当天细胞应50-80%融合。将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。 将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。 1. 在PCR管中加入不含血

转染和转染效率测定步骤

LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤此实验步骤设计用来进行24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染,其为设计用来在生长培养基中直接加入复合物。1. 转染前一天,胰酶消化细胞并计数,细胞铺板,使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清,不含抗生素的正常生长的培养基中。2. 对于每孔细

影响细胞转染转染效率的因素和注意事项

  转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分为物理介导方法:电穿孔法、显微注射和基因枪;化学介导方法:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法:有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒

影响细胞转染效率的6大因素

  转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分为物理介导方法:电穿孔法、显微注射和基因枪;化学介导方法:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法:有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒

细胞转染无血清培养基

  转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。  物理介导方法:电穿孔法、显微注射和基因枪;  化学介导方法:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;  生物介导方法:有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。  理想细胞转染方法,应该具有转染效

影响细胞转染转染效率的因素和注意事项

转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分为物理介导方法:电穿孔法、显微注射和基因枪;化学介导方法:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法:有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小

影响细胞转染效率的6大因素

转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分为物理介导方法:电穿孔法、显微注射和基因枪;化学介导方法:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法:有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小

细胞转染技术原理及应用

常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染).前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析.一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同

影响转染实验的因素

影响转染的因素很多,主要因素有以下几个。一、细胞状态在开始转染细胞之前,先制定一个适当的种板方案,使细胞密度从转染开始到结束都保持最佳状态。一般低的细胞代数(<50)能确保基因型不变。最适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞,细胞生长旺盛,最容易转染。二、DNA质量DNA质量对转染

细胞转染(Cell Transfection)技术综述

一、细胞转染途径转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于物理介导技术;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。1、物理介导(1)电穿

MaxCyte流式电转染平台在新一代疫苗快速研发生产中的...

MaxCyte流式电转染平台在新一代疫苗快速研发生产中的优势分析日前,新型冠状病毒(COVID-19)疫情仍在持续发展,截至目前,累计确诊病例数已超过70000。尽管统计数据在不断增加,但全国乃至全球抗击疫情的决心和信心越来越强。对于疫情防控,其中最重要的研究工作是要尽早研发出针对2019-nCoV

RFect原代细胞小核酸siRNA转染试剂/miRNA转染试剂使用说明

RFectPM原代细胞小核酸转染试剂(RFect原代细胞小核酸siRNA转染试剂/miRNA转染试剂)                &nb

细胞转染快准狠-GeneCopoeia转染试剂的适用细胞

细胞转染是指将外源基因如DNA,RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程,细胞培养完成后需进行细胞转染,根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前,常用的细胞转染方法主要分为三类途径:物理介导(电穿孔法,基因枪法、显微注射法)、化学介导(脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物

细胞转染原理及常见转染方法的比较(一)

实验原理:转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的

贴壁/悬浮细胞瞬时转染-RFect质粒DNA转染操作步骤和注意..

本文以RFect Plasmid DNA Transfection Reagent(RFect质粒DNA转染试剂盒),作为携带质粒穿膜的载体物质,具体介绍DNA转染方法。图. 用本产品4ul转染1ug pEGFP-C2质粒到293T细胞后,绿色荧光蛋白的表达情况。贴壁/悬浮细胞瞬时转染-RFect质

VGF(质粒转染试剂)Fection使用说明书

  一、性能参数   产品名称:VigeneFection 简称“VGF” 产品货号: FH880806   浓度:1μg/μl 推荐使用浓度:1μg-10μg/ml   规格:50μl (赠送) 保存条件:2-8℃ ,切勿放-20℃   有效期至: 18个月 运输条件:常温运输   

转染,so easy! 再也不用担心!

  转染可谓是做生物学实验的大家经常会考虑的一项实验技术,大致原理也都是明白的。实验室的师妹也一直在进行这个实验,最近她却一直愁眉苦脸,问了才知道,原来她转染完的细胞,去跑qpcr验证的结果一直不行,转染效率太低以至于无法进行后续的实验。到底转染是什么呢,为什么转染效率不高呢,今天我们就来一起讨论一

脂质体2000使用说明书及特点

注意事项 推荐在混合前使用Opti-MEM I低血清培养基(Cat. No. 31985-062)稀释 Lipofectamine 2000和核酸。 转染过程中勿向培养基中添加抗生素,以免造成细胞死亡。 不同批实验请保持细胞接种条件相同。 请检测无血清培养基与Lipofectamine 20

细胞转染的途径与方法

细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具。细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后,存在于游离的载体上,不整合到细胞的染色体上。稳定转染是指DNA整合到宿主细胞的染色体中。细胞转染途径(一) 物理介导:

原代细胞转染小核酸siRNA等操作步骤和注意事项

原代细胞相对普通传代细胞要难转染,但用对了试剂一样可以拥有很高的转染效率和实验结果,下面以RFect为例,简单介绍下原代细胞转染的操作步骤和注意事项。原代细胞转染操作步骤(以24孔培养板为例):A. 细胞接种:转染前一天接种细胞,每孔500 μl培养基(不可加抗生素),使细胞在转染时密度在30-50

四环素作为可诱导基因表达的调控物实验

下面的方案分成 3 个阶段:用 pTet-tTAk 稳定转染成纤维细胞,稳定转染可诱导表达 tTA 的 NIH-3T3 细胞,分析转染细胞中的蛋白表达。稳定转染细胞系表达反式激活因子和靶基因分为两个阶段。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验

转染试剂:Roche

     转染试剂:Roche[选购宝典]现转染市场多个新产品涌现而出,一些旧产品更弦易主。一提起罗氏的转染试剂,大家肯定立马想到Fugene 6/HD。即使Fugene 6/HD不在手,罗氏也毫不畏惧,因为它集合二十年的转染经验,推出了X-tremeGENE

四环素作为可诱导基因表达的调控物实验

            实验材料 pSV2-His 带有靶基因开放阅读框的 pTet-Splice 带有报道基因的 pTet-Spliqe N

VGF(质粒转染试剂)Fection使用说明

一、性能参数产品名称:VigeneFection 简称“VGF”     产品货号: FH880806浓度:1μg/μl           &nbs

基因转染和实验设计原则

磷酸钙-DNA共沉淀法核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时,可使DNA附在细胞表面,利于细胞吞入摄取,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内,进入细胞的DNA仅有1%~5%可以进入细胞核中,其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合,在细胞中进行稳定表达,基因转导的频率大约为10-4,这项

干货∣细胞转染效率低下的八个大坑

  细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验狗们经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,更是因为难度大,号称谁碰谁死,而令人谈虎色变。不,应该是谈原代细胞色变。  细胞转染的protocol教科书和实验手册上面都有,毛博不想再重复了。这里,毛博根据自己做细胞转染近10