逆转录PCR的实验
一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）；1个125ml的白色试剂瓶（放无水乙醇）7、量筒：50ml、250ml、500ml8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml9、试管架：5ml、1.5ml、20μl10、盐水瓶：250ml、500ml各2个备用，一个装无水乙醇，另一个装DEPC水11、铝制饭盒：4个12、塑料小饭盒：1个13、大瓷缸：2个14、锡泊纸：一卷15、卷纸：2卷16、三角烧瓶：带盖，稍大二、实验器具的处理与准备1、塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等）先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，......阅读全文
BioDev－Faster－Taq——由普通PCR向快速PCR的革命
一个PCR反应的总耗时取决于变性、退火、延伸中每一个步骤所需的时间和从一个步骤到下一个步骤的温度变化幅度。现有的快速PCR仪和特殊PCR管等，通过特殊的加温和降温技术，提高温度升降幅度和减少热传导时间，从而缩短PCR过程中PCR变化所需的时间。也有采用特殊试剂促进引物和模板的结合或通过减少反应体积缩
荧光PCR法与PCR荧光探针法有何不同
荧光定量PCR法检测的是SYBR Green掺入到双链DNA中的量。SYBR Green掺入到双链DNA中后会发出荧光。但是只要是双链，它都掺。而探针法是当探针结合到目标序列上以后，聚合酶降解探针后，探针上自带的荧光基团离开淬灭基团，从而发出荧光。从两者的原理上来看，不难判断，荧光PCR法更加简单方
实时荧光定量pcr与基本pcr相比有什么优点
荧光定量PCR与普通PCR相比具有以下优点：1、高灵敏性 可检测单个细胞基因；2、高特异性和精确性 将DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精准性融合，应用荧光探针和光电传导，直接探测基因扩增过程中荧光信号的变化，以获得定量结果，相当于在PCR反应过程中自动完成了Northern杂交；3、操作简便、速度
PCR新手指南系列：PCR产物电泳条带分析
PCR扩增后一般进行琼脂糖凝胶电泳分析，电泳后一般有以下几种条带：1、引物带。引物浓度过高或是扩增效率不是特别高时都会有，一般不呈现为细带，为发散状；如果目的扩增产物带和引物带都很亮，可以考虑适当降低引物量。2、引物二聚体带。比引物跑得慢一点，条带清晰，但如果扩增产物小于100bp时，产物与引物二聚
PCR技术（十一）：PCR片段拼接的SOE和SDL方法
PCR技术（多聚酶链式反应）是现代分子生物学的一个巨大突破，它能在体外迅速、 大量、灵敏地扩增基因片段。可是，经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效 拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点，这不但操 作繁杂，而有时为了构建限性位点还会影响解读三联密码的正确性。本介绍两
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（二）
1.3.2 PCR-SSCP方法分析按照我室常规进行。 1.3.3 Taqman荧光探针 以发现的ALAS2基因第五外显子点突变为中心设计，序列如下： 5’ （荧光集团）FAM-CAAGATCATAGAGAAGAAAC- TAMRA（淬灭集团） 3’，设计Taqman荧光PCR反应的上下
逆转录PCR(RTPCR)扩增基因特异片段
逆转录PCR(RT-PCR)扩增基因特异片段 一、实验原理RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中R
荧光PCR法与PCR荧光探针法有何不同
荧光定量PCR法检测的是SYBR Green掺入到双链DNA中的量。SYBR Green掺入到双链DNA中后会发出荧光。但是只要是双链，它都掺。而探针法是当探针结合到目标序列上以后，聚合酶降解探针后，探针上自带的荧光基团离开淬灭基团，从而发出荧光。从两者的原理上来看，不难判断，荧光PCR法更加简单方
PCR技术（九）：PCR扩增产物的电泳分析
凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种.一、琼脂糖凝胶电泳: 琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和 鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度， 把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在 37℃下维持液体
PCR新手指南系列：PCR产物电泳条带分析
PCR扩增后一般进行琼脂糖凝胶电泳分析，电泳后一般有以下几种条带：1、引物带。引物浓度过高或是扩增效率不是特别高时都会有，一般不呈现为细带，为发散状；如果目的扩增产物带和引物带都很亮，可以考虑适当降低引物量。2、引物二聚体带。比引物跑得慢一点，条带清晰，但如果扩增产物小于100bp时，产物与引物二聚
PCR仪PCR结果出现假阳性是什么原因？
假阳性假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。产生的原因有：①引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行 PCR 扩增时，扩增出的 PCR 产物为非目的序列；②靶序列太短或引物太短；③靶序列或扩增产物的交叉污染。解决方法有：操作轻柔
标记PCR和彩色PCR技术的定义及特点介绍
标记PCR(Labelled Primers，LP-PCR) 是利同位素或荧光素对PCR引物的5‘端进行标记，用来检测靶基因是否存在。彩色PCR(Color Complementation assay PCR，CCAPCR)，是LP-PCR的一种，它用不同颜色的荧光染料；标记引物的5'端，因
PCR技术（八）：扩增较大片段DNA的PCR方法
一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性： 通常所用的PCR方法都在两个方面有局限，即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furiosus)DNA聚合酶，具有完整的3'外切酶校读活性（3'-editing-exonuclease），可以将每个循环中碱基
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（五）
3．讨论 随着近年基因芯片技术的发展，研究者逐渐认识到基于核酸杂交原理的传统基因芯片缺陷与应用的局限性。随着PCR技术的进展，特别是荧光定量PCR技术的出现PCR技术已成为生物医学领域中应用最广泛的技术。如果一种基因芯片能直接进行PCR反应,而且能够同时扩增大批可能发生变异的基因显然会有广泛
免疫PCR(immunoPCR)技术的定义及特点介绍
1.定义：免疫-PCR(immuno-PCR) 它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原，尤其适用于极微量抗原的检测。是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统。主要步骤有三个:①抗原-抗体反应，②与嵌合连接分子结合，③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA)。
PCR仪是什么？
基因扩增仪主要用于用于科研及临床的基因扩增、定性PCR基因扩增、荧光/酶免终点定量DNA基因扩增、基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增等。
PCR问题的总结
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些zui好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有
PCR实验技术（一）
PCR（聚合酶链式反应）【原理】PCR（polymerase chain reaction）用于在体外将微量的目标DNA大量扩增，以便进行分析。反应体系：①样品DNA；②引物（primer），是人工合成的一对寡核苷酸链（约15-20个核苷酸），用于扩增夹在双引物与模板DNA互补区之间的区域；③4种d
多元实时－PCR－实验
试剂、试剂盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸馏水反向引物正向引物仪器、耗材 ABIPrism7700型号系列检测系统实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂以50ul反应体系为例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitrogen
多元实时－PCR－实验
试剂、试剂盒 PCR Super Mix-UDG ROX 染料 蒸馏水 反向引物 正向引物 仪器
PCR－Trouble－shooting－guide
1．假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或
入门：PCR技术概论
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一
PCR添加物
PCR Additives (Robert H. Cruickshank)A usr/localiety of PCR additives and enhancing agents have been used to increase the yield, specificty and consi
mirna－pcr电泳多久
一般是根据PCR产物大小和所用电压来决定时间的吧一般溴酚蓝跑到胶的1/3处就可以了。电压大，就时间短，第一次跑，还是在边上观察着点吧，分子小，时间不长的。
PCR技术的原理
PCR原理：DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基
PCR实用大全2
几种常用特殊PCR技术几种常用特殊pcr技术一、逆转录PCR（Reverse transcription－PCR,RT-PCR）RNA经逆转录后可作为PCR的模板。逆转录PCR（RT－PCR）常用于基因表达研究（定量pcr）和逆病毒检测。设计RT－PCR引物时，应使引物分别位于不同的外显子中，以便区
PCR常见问题
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
PCR的Ct值
Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍
PCR产物的克隆
PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR 产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR 产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求
PCR技术操作步骤
PCR即聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction）的缩写，它是体外酶促合成特异DNA片段的方法。这一方法的要点是合成两个分别互补于待扩增DNA片段两端的小片段引物，在含有引物、待扩增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反应体系中DNA复制反复进行，在短时间内可以取得大量扩增