免疫PCR(immunoPCR)技术的定义及特点介绍
1.定义:免疫-PCR(immuno-PCR) 它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原,尤其适用于极微量抗原的检测。是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统。主要步骤有三个:①抗原-抗体反应,②与嵌合连接分子结合,③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA)。 2.嵌合连接分子的制备原理:其基本原理与ELISA和免疫酶染色相似,在免疫-PCR中,嵌合连接分子起着桥梁作用,它有两个结合位点,一个与抗原抗体复合物中的抗体结合,一个与质粒DNA结合,在操作反应中形成抗原抗体-连接分子-DNA复合物,通过PCR扩增DNA 来判断是否存在特异性抗原.是免疫-PCR。与ELISA不同之处在于其中的标记物不是酶而是质粒DNA。 3. 优点为:①特异性较强,因为它建立在抗原抗体特异性反应的基础上。②敏感度高,PCR具有惊人的扩增......阅读全文
免疫PCR(immunoPCR)技术的定义及特点介绍
1.定义:免疫-PCR(immuno-PCR) 它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原,尤其适用于极微量抗原的检测。是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统。主要步骤有三个:①抗原-抗体反应,②与嵌合连接分子结合,③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA)。
免疫PCR技术(ImmunoPCR)
免疫PCR技术(Immuno-PCR) 免疫PCR方法(Immuno-PCR)是Takeshi等1992年将免疫学反应和PCR技术相结合而创建的一种新的检测技术,具有抗原、抗体反应的特异性和PCR技术的高效性。它运用PCR的高度敏感性来放大抗原抗体反应的特异性,使实验中只需数百个抗原分子即可检测,甚
什么是免疫PCR(immunoPCR)?
1.定义:免疫-PCR(immuno-PCR)它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原,尤其适用于极微量抗原的检测。是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统。主要步骤有三个:①抗原-抗体反应,②与嵌合连接分子结合,③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA)。 2
什么是免疫PCR(immunoPCR)?
1.定义:免疫-PCR(immuno-PCR)它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原,尤其适用于极微量抗原的检测。是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统。主要步骤有三个:①抗原-抗体反应,②与嵌合连接分子结合,③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA)。 2
免疫PCR(ImmunoPCR)概念和基础
(一) 免疫PCR技术的概念免疫PCR是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。免疫PCR集PCR的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体。其突出的特点是指数级的扩增效率带来了极高的敏感度,能检出浓度低至2ng
免疫PCR(ImmunoPCR)概念、组成和免疫PCR产物的检测
(一) 免疫PCR技术的概念免疫PCR是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。免疫PCR集PCR的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体。其突出的特点是指数级的扩增效率带来了极高的敏感度,能检出浓度低至2ng
标记PCR和彩色PCR技术的定义及特点介绍
标记PCR(Labelled Primers,LP-PCR) 是利同位素或荧光素对PCR引物的5‘端进行标记,用来检测靶基因是否存在。彩色PCR(Color Complementation assay PCR,CCAPCR),是LP-PCR的一种,它用不同颜色的荧光染料;标记引物的5'端,因
多重PCR技术的定义特点及用途介绍
1.概述:多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同。 2.特点: ①高效性,在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物,或
甲基化特异PCR技术的定义及特点介绍
甲基化特异PCR是用对苯二酚和亚硫酸氢钠处理氢氧化钠变性的基因组DNA,使得未甲基化的C转化为T。按照C转换T后的基因序列设计出来的引物扩出目的基因。由于甲基化CpG岛中的C不能被转化为T,用以上的引物将不会扩出目的基因。通过上述手段就能达到识别基因组DNA甲基化与否的目的。
反向PCR(Inverse-PCR)技术的定义和特点
1.概述:反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段,而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切,然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接,再用一对反向的引物进行PCR,其扩增产物
巢氏PCR(Nested-PCR)技术的定义和特点
1.定义:也称套式PCR是指利用两套PCR引物(巢式引物)进行两轮PCR扩增反应。在第一轮扩增中,外引物用以产生扩增产物,此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。在这种技术中,首先用一对外引物进行第1轮PCR,然后再使用第1对引物扩增的DNA 序列内部的一对引物再次扩增。2.优点:由于巢式PCR反应
PCR技术的特点介绍
1、有一定程度单核苷酸错误掺入 TaqDNA聚合酶缺少3’-5’核酸外切酶活性,因而不能纠正反应中发生的核苷酸错误掺人;与大肠杆菌聚合酶IKlenow片段相比较,用TaqDNA聚合酶的反应错误掺人相对多些。但在PCR扩增过程中,其错配率一般只有约1/万,足可以供特异性分析。2、操作简便、快速
重组PCR技术的定义和原理介绍
1.定义:使两个不相邻的DNA片段重组在一起的PCR称为重组PCR(recombinant PCR)。Mullis等于1986年报道了由PCR扩增的两个DNA片段通过重组合后再经延伸而制备出新的DNA分子。2. 其基本原理:将突变碱基,插入或缺失片段,或一种物质的几个基因片段均设计在引物中,先分段对
原位PCR技术的定义和方法介绍
1.概述:原位PCR就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR是Hasse等于1990年建立的,实验用的标本是新鲜组织、石蜡包埋组织、脱落细胞、血细胞等.2.其基本方法为
PCR技术的反应特点介绍
特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDN
多重PCR的定义和特点
1.概述:多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合 ,它是在同一 反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的 反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般 相同。2.特点:①高效性,在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物,或对有多个型别的目的基因进行分型,特别是
免疫PCR技术
(一)材料与方法1. 生物素标记特异性抗体的制备 免疫球蛋白(如IgG、IgM)的Fc片段上有糖基存在,因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。(1) 将纯化的抗体(IgM或IgG, 0.1~1.0ml)在标记缓冲液(0.1Mol/L NaAc,pH值5.5, 0.1M
免疫PCR技术
(一)材料与方法1. 生物素标记特异性抗体的制备免疫球蛋白(如IgG、IgM)的Fc片段上有糖基存在,因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。(1) 将纯化的抗体(IgM或IgG, 0.1~1.0ml)在标记缓冲液(0.1Mol/L NaAc,pH值5.5, 0.1Mol
兼并引物PCR技术的定义
1.概述:兼并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。兼并度越低,产物特异性越强。2.设计引物原则:尽量选择兼并性小的氨基酸,并避免引物3’末端兼并,因为3'端最后3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR;次黄嘌呤可以同所有的碱基配对,降低引物的退火温度。
RTPCR技术的定义
RT-PCR,反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是将RNA的反转录(reverse transcription )和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。
不对称PCR技术的定义和方法介绍
不对称PCR(asymmetric PCR)是用不等量的一对引物,PCR扩增后产生大量的单链DNA(SSDNA)。这对引物分别称为非限制引物与限制性引物,其比例一般为50——100:1。在PCR反应的最初10——15个循环中,其 扩增产物主要是双链DNA,但当限制性引物(低浓度引物)消耗完后,非限制
免疫PCR技术进展
摘要免疫-PCR技术结合了抗原抗体反应的特异性和PCR的高敏感性,是一种极为敏感的抗原检测技术,并适合于各种微量抗原的检测。 荧光标记、酶标记和放射性同位素标记这三大抗体标记技术是目前免疫化学、免疫学以及分子生物学中应用最广的常规抗原检测手段,具有很高的灵敏度。但在早期癌抗原及某些神经肽等极微
X射线定义及特点介绍
X射线是一种具有较短波长的高能电子波,由于内层轨道电子跃迁或高能电子减速产生,X射线的波长范围为0.01-10nm。介于紫外线和γ射线之间,并具有部分重叠峰。 X射线与可见光相比,除了具有波粒二象性的共同性质之外,还因其波长短、能量大而显示其特性: 1、穿透能力强; 2、折射率几乎等于1;
PCR反应技术的特点
1、特异性强决定 PCR 反应特异性的因素有:①引物与模板 DNA 特异分子的正确结合;②碱基配对原则;③ Taq DNA 聚合酶合成反应的忠实性;④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键,它取决于所设计引物的特异性及退火温度。在引物确定的条件下,PCR 退火温度越高,扩增的特异性越
免疫放射测定的技术定义
中文名称免疫放射测定英文名称immunoradiometric assay;IRMA定 义一种放射免疫分析技术。即将待测抗原与过量的标记抗体直接反应,然后加入固相的抗原免疫吸附剂与游离的标记抗体结合,经过离心去除沉淀物,测定上清液的反射性强度,从而推算出检品中待测抗原的含量。应用学科免疫学(一级学
免疫PCR法检测有哪些特点
免疫PCR法检测有哪些特点?:免疫PCR综合了固相免疫反应和PCR两者的特点。因而在保证免疫测定特异性的同时,又具有极高的检测灵敏度。免疫PCR的基本原理与执业护士网常规标记免疫技术相似,只不过在免疫PCR中所用的抗原或抗体标记物为DNA,在固相免疫结合反应完成后,再采用PCR技术对标记DNA进行扩
RTPCR技术的定义和检测方法
1.定义:是以RNA为模板,联合逆转录反应(reverse transcription,RT)与PCR,可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA 模板。 RNA扩增包括两个步骤:在单引物的介导下和逆转录酶的催化下,合成RNA的互补cDNA;加热后cDNA与RNA链解离,然后与另一引
自身免疫性肝病实验室诊断的定义及特点
定义 自身免疫性肝病是一组由于机体自身抗体存在而引起肝组织持续损伤为特征的慢性肝病。临床以高γ球蛋白败血症,波动性黄疸,特征性循环自身抗体及内分泌失常为特点。 特点 自身免疫性肝病作为一种发病机理不明的疾病与许多疾病有关联(表1),且由于最初的临床症状与病毒性肝炎症状相似,临床上诊断比较困
单细胞培养技术的定义及介绍
单细胞培养(single cell culture)是指从植物器官、愈伤组织或悬浮培养物中游离出单个细胞,在无菌条件下,进行体外生长、发育的技术。人们分离和培养植物单细胞的设想和实践都比较早,但成功地进行单细胞培养是随着更有效的培养基的发展以及从愈伤组织悬浮培养物分离单细胞的专门技术的建立才实现的。
药物片剂的定义及特点
片剂,系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂。片剂作为最常用的口服剂型,其种类较多,发展较快,各国药典收载的制剂中以片剂为最多。具有剂量准确,应用方便;生产机械化,能适应治疗、医疗预防用药的多种要求;质量稳定,携带、运输和贮存方便;片面可以压上主药名称和药量的标记,也可用不同颜