PCR实用大全2
几种常用特殊PCR技术几种常用特殊pcr技术一、逆转录PCR（Reverse transcription－PCR,RT-PCR）RNA经逆转录后可作为PCR的模板。逆转录PCR（RT－PCR）常用于基因表达研究（定量pcr）和逆病毒检测。设计RT－PCR引物时，应使引物分别位于不同的外显子中，以便区别cDNA和gDNA扩增产物。二、多重PCR（Multiple PCR）在同一PCR反应体系中用多对引物（覆盖不同长度的靶序列）同时扩增。例如用多重PCR进行DNA缺失筛选三、套式PCR（nested PCR）用第一次PCR扩增区域内部的第二对（套式）引物对第一次PCR产物再次扩增，可以增加特异性和灵敏度。四、非对称PCR（asymmetric PCR）在PCR反应体系中，限制引物之一的浓度（50－100:1）进行扩增，可得到单链PCR产物，可用于制备单链测序模板或单链DNA杂交探针。PCR产物电泳结果分析一、PCR产物电泳产物检测时......阅读全文
PCR实用大全
PCR引物设计的11条黄金法则一、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。二、引物长度一般在15~30碱基之间。引
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几种常用特殊PCR技术几种常用特殊pcr技术一、逆转录PCR（Reverse transcription－PCR,RT-PCR）RNA经逆转录后可作为PCR的模板。逆转录PCR（RT－PCR）常用于基因表达研究（定量pcr）和逆病毒检测。设计RT－PCR引物时，应使引物分别位于不同的外显子中，以便区
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PCR经验总结（先声明，此文不如分子克隆第三版权威与分子克隆相背处，请信分子克隆)一、增加PCR的特异性1、primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件1）足够长，18-24bp,以保证特异性。当然不是说越长越好，太长的引
PCR实用小技巧
增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些条件1) 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的primer同样会降低特异性,并且降低产量2) GC% 40%~60%3
PCR实用技巧
PCR实用技巧增加PCR的特异性： 1. primers design 这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些条件 a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的primer同样会降低特异性,并且降低产量 b. G
PCR实用技巧
增加PCR的特异性： 1. primers design 这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些条件 a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的primer同样会降低特异性,并且降低产量 b. GC% 40%~
pcr实用技巧
增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5&
pcr实用技巧2
1．简介寡聚核苷酸引物的选择，通常是整个扩增反应成功的关键。所选的引物序列将决定PCR产物的大小、位置、以及扩增区域的Tm值这个和扩增物产量有关的重要物理参数。好的引物设计可以避免背景和非特异产物的产生，甚至在RNA-PCR中也能识别cDNA或基因组模板。引物设计也极大的影响扩增产量：若使用设计粗糙
PCR技术服务PCR的实用技巧
增加PCR的特异性：1. primers design这是zui重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些条件1) 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的primer同样会降低特异性,并且降低产量2) GC% 40%~60
PCR的几个实用小技巧
增加PCR的特异性：1. primers design这是zui重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些条件1) 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的primer同样会降低特异性,并且降低产量2) GC% 40%~60
RTPCR实验方法大全
RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2 浓度、退
RTPCR实验方法总结大全
生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2
RTPCR实验方法总结大全
生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)5
室温下充分混匀，离心10000g×2min。取上层液置另一0.5 ml离心管中，加入100μl氯仿，混匀，离心10000g×2min。将上层液转移至另一0.5ml 离心管中，再加入3M NaAc 10μl、预冷无水乙醇250μl，混匀后，-20OC静置30min。4OC离心13500g×10
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)2
关于平台期和线性期的问题，实际上线性期是指数期，只不过碰巧2的冥和2的倍数是相同的。看上去任何一个时期都可以，实际上是不对的，因为牵涉到酶促动力学的问题，这个我也不懂，有一些专门的文章，好像，涉及到很多化学的东西。我们学医的，也没必要知道那些，但是其中主要是因为模板引物酶原料和buffer之间的关系
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)1
RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)4
3． 由于与反义RNA探针杂交的样品RNA仅为该RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA样品仍可进行分析。4． 步骤较少，耗时短。与Northern杂交相比，省去了转膜和洗膜的过程。5． RNA-RNA杂交体稳定性高，无探针自身复性问题，无须封闭。6． 一个杂交体系中可同时进行多个探针杂交，无竞
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)3
4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经 0.22μm滤膜过滤除菌。5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。6. 设置RNA操作专用实验室，所有器
RTPCR实验方法大全(抽提RNA，RT，PCR)6
可能问题出在标本的保存：一般四小时之内就应处理，分离出细胞说的是套式PCR,可以在你的第一次PCR两个引物内,再设计一对引物进行第二次PCR就行了如果你的第一次PCR刚好包括目的片段,那只好设计个更长的了第二次的引物设计要求可以低一点以50μl体系为例引物各1μl第一次PCR产物5μl二次PCR和巢
产前诊断技术大全——唐筛、羊水穿刺、NIPT、PCR
唐氏筛查：通过抽取孕妇血清，检测母体血清中甲型胎儿蛋白、绒毛促性腺激素和游离雌三醇的浓度，并结合孕妇的预产期、体重、年龄和采血时的孕周等，计算生出先天缺陷胎儿的危险系数的检测方法。最为我们熟知的可能就是唐氏筛查了而且，唐氏筛查中显示为低危的孕妇，依然有可能怀有染色体异常胎儿，然而这部分群体在当前却被
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达最灵敏，最可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和同时分析内
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达zui灵敏，zui可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法（四）
RT2ProfilerTM PCR芯片特点灵敏度 研究者总是希望能检测到表达量相当低的基因，有时候，研究者得到的起始总RNA量也很少，但仍希望能进行实时定量PCR检测。为了满足研究者的这些需要，Superarray严格检测了PCR芯片系统的灵敏度。例如，Superarray使用PCR芯片检测了一系列
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法（五）
重复性 实时定量PCR的定量特性使得PCR芯片的重复性强。为检测重复性，2位研究者采用了同样的总RNA样品，分别进行了4次重复试验。两个人使用同种PCR芯片，但批号不同，并且每个人都分两天进行试验。比较两位研究者分别做的4张芯片的原始Ct值。图5显示了比较结果的图示和相关系数。每一组比较结果均获得理
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法（三）
PCR 芯片实验体系 完整的PCR芯片实验体系包括RT2ProfilerTM PCR芯片，RT2 Real-TimeTM SYBR Green PCR反应体系和cDNA合成试剂盒。所有这些组分均为基于SYBR Green的实时定量PCR反应优化。精心设计的引物和优化的PCR反应体系一起，为
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法（一）
简介：什么是PCR芯片？ 实时定量PCR是检测基因表达最灵敏，最可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和同时分析
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法（二）
PCR芯片的设计和所包含的基因 96孔模式的每种RT2Profiler PCR芯片，含有基因特异性引物，可用于研究84个与某种信号通路或者疾病相关的基因。此外，芯片中还有设置了3个检测实验质量的对照。图2为PCR芯片模式图。由于每种芯片都是根据特别的信号通路或者特定的应用范围设计的，研究者可以用它来
PCR－实用技巧：七大方法消除引物二聚体
相信很多人一听到引物二聚体的时候都会很愤怒，因为几乎我们每个人都受到过它的折磨。它作为 PCR 的副产物，甚至有时候是主要产物充斥着我们的整个 PCR 实验过程。你在被它折磨的不行不行的时候，你有想过它为什么总是出现在你的实验结果中吗接下来就让我带大家走进它的世界，了解它，认识它，最后战胜它。一、引
PCR－实用技巧：七大方法消除引物二聚体
相信很多人一听到引物二聚体的时候都会很愤怒，因为几乎我们每个人都受到过它的折磨。它作为 PCR 的副产物，甚至有时候是主要产物充斥着我们的整个 PCR 实验过程。你在被它折磨的不行不行的时候，你有想过它为什么总是出现在你的实验结果中吗接下来就让我带大家走进它的世界，了解它，认识它，最后战胜它。引物二
硬度知识大全
生活中，大家经常接触到2B铅笔，时而互相调侃。铅笔其实除了2B，还有HB等等。学工科以后就会去猜想：这个2B到底是什么意思？ 作为一个理论力学刚好及格出头的小编，直观的思维就是：硬度。想当年物理老师还告诉我们，zui软的是滑石、石墨，比较硬的有铂金啊，钢铁，zui硬的那些就是很贵很贵各种高大上的宝