基因转染(磷酸钙DNA共沉淀法)
基因转染技术可以应用于：基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。实验方法原理核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使DNA 附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA 仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA 可以与细胞DNA 整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA 导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法。实验材料细胞样品试剂、试剂盒HBSCaCl2TEG418(新霉素G418)液G418选择培养基仪器、耗材培养瓶实验步骤1、供体DNA 制备：方法按前介绍的DNA 提取法提取，溶于TE中，40mg/L。2、受体细胞的培养：研究癌基因转移应选择不含人类Alu序列的动物细胞系作为受体细胞。如小鼠NIH3T3胚成纤维细胞系等，该细......阅读全文
脂质体载体用于直接体内基因转染实验
试剂、试剂盒 氯仿 DC-Chol 储存液DOPEDOTAP胆固醇储存液葡萄糖仪器、耗材 透紫外灯玻璃离心管氮气桶真空干燥器水浴超声破碎仪水浴锅挤压机聚碳酸酯膜滤器实验步骤 1.用氯仿将 30.0ml 的透紫外灯玻璃管漂洗 3 次。2.混匀用于准备脂质体的在透紫外灯玻璃管中的适当的脂质。（1）对于
基因转染(磷酸钙DNA共沉淀法)
实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 HBSCaCl2TEG418(新霉素G418)液G418选择培养基仪器、耗材 培养瓶
脂质体载体用于直接体内基因转染实验
试剂、试剂盒氯仿DC-Chol 储存液DOPEDOTAP胆固醇储存液葡萄糖仪器、耗材透紫外灯玻璃离心管氮气桶真空干燥器水浴超声破碎仪水浴锅挤压机聚碳酸酯膜滤器实验步骤1.用氯仿将 30.0ml 的透紫外灯玻璃管漂洗 3 次。2.混匀用于准备脂质体的在透紫外灯玻璃管中的适当的脂质。（1）对于 DC-C
哺乳动物细胞基因稳定转染的实验
基本方案 实验材料 哺乳动物细胞 试剂、试剂盒
基因转染(磷酸钙DNA共沉淀法)
基因转染技术可以应用于：基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。实验方法原理核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使DNA 附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA 仅有1%～5%可以进入细胞核中，其
关于基因转移转染细胞的处理方法介绍
①如果不进行其它处理（如用氯喹、甘油或丁酸钠等试剂处理，见后），可在细胞培养16～24h后，吸出培养液和沉淀物，用PBS将单层细胞再洗一次。然后按下述③d操作。 ②在许多情况下，同时用氯喹处理细胞，可提高DNA摄入率。氯喹可能是通过抑制溶酶体水解酶类对DNA的降解而起作用的。氯喹浓度及其处理时
腺病毒介导EGFP基因转染神经干细胞
摘要： 本实验从新生SD大鼠海马组织中分离神经干细胞，并通过观察携带EGFP基因的腺病毒（Ad/ EGFP）转染NSCS后EGFP表达规律及转染对NSCS的活力、增殖、分化等的影响，探讨EGFP作为NSCS的示踪标志物的可行性，为进一步的NSCS移植研究提供体外研究
基因转染(磷酸钙DNA共沉淀法)
实验方法原理 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使DNA 附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA 仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA 可以与细胞D
各种转染试剂的中文转染方法
FuGENE6（Roche）转染步骤： 转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。 将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。 1. 在PCR管中加入不含血
DNA转染
DNA转染· Transfection of Mammalian Cells Using Lipofectamine (LTI)· Guide to Eukaryotic Transfections with Cationic Lipid Reagents (PDF)
细胞转染
脂质体介导法 磷酸钙沉淀法 实验方法原理 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的
转染的概念和常规转染技术分类
转染(transfection)是细胞在一定条件下主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染（永久转染）两大类。
细胞转染实验的实验步骤细胞转染
1）转染试剂的准备A.将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。B.震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。2）选择合适的混合比例（1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡
我国专家发现羟基磷灰石可作纳米基因转染载体
我国耳鼻咽喉科专家、中南大学湘雅三医院院长孙虹教授和他的科研团队经过十年研究发现，运用羟基磷灰石作为无机纳米基因转染载体，用以治疗内耳感觉神经性耳聋疾病，并在白豚鼠试验中获得良好效果。这一研究成果获得国际业内专家的广泛认可。 国内外多家实验室研究证明，利用基因治疗原理，向内耳
关于基因转染技术的过程靶细胞的准备介绍
被用于作靶基因转染的细胞，其生长状态如何，将直接决定了基因转染效率。如为贴壁生长的细胞，一般要求在转染前一日，必需应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，细胞密度以铺满培养器皿的60%为宜，转染当日，在转染前4小时换一将近新鲜培养液。对于悬浮细胞，也需在转染前4小时换一次新鲜培养液。
Nat－Biomed－Eng：新型基因疗法（组织纳米转染（TNT））策略
近日，科学家开发了一种新的基因疗法，可以利用人类细胞大量生产携带遗传物质的纳米颗粒，并用于治疗疾病。在该研究中，实验性疗法减缓了神经胶质瘤小鼠的肿瘤生长并延长了其存活时间。 外泌体作为治疗材料具有很多优势，其中包括数量庞大以及不会引起免疫学反应等。在这项研究中，作者通过特定的手段使得人类细胞分
Nat－Commun：氟化修饰方法实现高效安全的基因转染
华东师范大学生命科学学院、上海市调控生物学重点实验室程义云教授课题组的最新成果近期在线发表于Nature子刊《Nature Communications》 ，该成果提出的氟化修饰方法为高分子基因载体的设计提供了一个全新的思路。 程义云教授(右)与该成果第一作者博士生王铭明在实验室 基
新的非病毒基因载体提高5倍转染率
聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）是一种阳离子聚合物，已经被广泛地进行研究，显示出作为一种有效的基因传递工具的前景。同样地，HIV-1 Tat肽，是一种可透过细胞膜的肽，已经被成功应用于细胞内的基因传递。为了提高这两种载体的良好性能，纽约大学理工学院（NYU-Ploly）和纽
siRNA的转染
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至
LSCM细胞转染
细胞转染对于活细胞实验，需要实验设备能够维持细胞的生长。显微镜上需要配备合适的热台，可控制一定的 CO2 浓度、合适的湿度和温度等。此外，是否是倒置显微镜? 能否使用高倍镜、油镜或水镜观察细胞? 为了便于成像，一般使用底部为玻璃片的细胞培养皿。由于显微镜并不是无菌的环境，因此对于一般的活细胞实验并不
细胞瞬时转染
摘要： 通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。 原理： 通过 脂质 体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细
细胞瞬时转染
1. 1细胞瞬时转染 原理：通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。应用： 观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（短时间即可进行观察，但效应会很快丢失）一
siRNA－转染程序
A．siRNA转染的方法 哺乳动物转染的常见方法有：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法（例如,显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。应用脂质体型转染试剂进行转染需要注重的几个方面：1. 转染试剂的用
真核转染
一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉，然而许多在细菌中合成的真核蛋白或因折叠方式不正确，或因折叠效率低下，结果使得蛋白活性低或无活性。不仅如此，真核生物蛋白的活性往往需要翻译后加工，例如二硫键的精确形成、糖基化、磷酸化、寡聚体的形成或者由特异性蛋白酶进行的裂解等等，而
miRcroRNA转染流程
细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染（永久转染）两大类。本实验室主要是质粒转染、miRcroRNA转染、慢病毒转染、药物转染、多肽转染等。 一. 实验材料及试剂 六孔板、CO2培养箱、EP管、酒精灯等；无血清培养基、MEM-α或DM
什么是转染－？
转染 （transfection）采用与质粒DNA转化受体细胞相似的方法，即宿主菌先经过CaCl2，电穿孔等处理成感受态细菌，再将重组噬菌体DNA直接导入受体细胞，进入感受态细菌的噬菌体DNA可以同样复制和繁殖，这种方式称为转染。转染是转化的一种特殊形式。
siRNA的转染
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙，RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转
细胞瞬时转染
细胞瞬时转染 实验方法原理 通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的
PEI－转染法
材料： 质粒DNA 指数生长的真核细胞 PEI （聚乙烯亚胺） 1×HBS （pH7.4） 配方： PEI 储存液（100 μM）：称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS （pH7.4）中， 0.2 μm 滤膜过滤，储存于4℃备用。 1×HBS （pH7.4）： 将8.76 g
转染的分类
包括：1.DEAE-葡聚糖法DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。2.磷酸钙法磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法，因为试剂易取得，价格便宜