cDNA合成实验
试剂、试剂盒二硫苏糖醇dNTP随机引物来自方案 4 的 RNA 样品RNasin反转录缓冲液仪器、耗材PCR 管子热循环仪实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂0.1mol/L 二硫苏糖醇dNTP(每种 2.5 mmol/L)随机引物（20~40U/ml)(1034731，RocheAppliedScience，Indianapolis，IN)来自方案 4 的 RNA 样品RNasin(Promega)5X 反转录缓冲液主要反应组分混合物（X 样品管数）5X 反转录缓冲液 10uldNTP(2.5 mmol) &......阅读全文
cDNA第二链的合成方法
cDNA第二链的合成方法有以下几种：（1）自身引导法。合成的单链eDNA3’端能够形成一短的发夹结构，这就为第二链的合成提供了现成的引物。当第一链合成反应产物的DNA—RNA杂交链变性后利用大肠杆菌DNA聚合酶I Klenow片段或反转录酶合成eDNA第二链，最后用对单链特异性的S1核酸酶消化该环，
cDNA第一链的合成的方法
所有合成cDNA第一条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应，主要有两个关键因素，一个是mRNA模板，另一个是反转录酶 。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒（AMV）逆转录酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒反转录酶基因的大肠杆菌中分离到的鼠
锚定酶消化cDNA实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液引物仪器、耗材 试剂盒MPC-EPCR仪Gene PulserII 型系统实验步骤 实验方案 A1.通过加入下列物质来消化双链 cDNA2.在 37°C 下消化 lh。3.65°C 孵育 20 min 热失活限制性酶。4.等体积 PCI 抽提后乙醇沉淀（实验方案 A, 第
cDNA－扩增和影印实验
实验方法原理 实验材料 保存于细菌中的克隆纯的、已测序确证的人 EST 序列试剂、试剂盒 LB 培养基超级肉汤培养基乙醇裂解液RNA 酶溶液缓冲液乙醇 乙酸溶液丁二酸酐1－甲基－2－吡咯烷酮硼酸钠仪器、耗材 离心机96 孔热循环仪水浴锅微量滴定板清洗仪实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具
锚定酶消化cDNA实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 引物 仪器、耗材 试剂盒 MPC-E PCR仪
cDNA－扩增和影印实验
实验材料保存于细菌中的克隆纯的、已测序确证的人 EST 序列试剂、试剂盒LB 培养基超级肉汤培养基乙醇裂解液RNA 酶溶液缓冲液乙醇 乙酸溶液丁二酸酐1－甲基－2－吡咯烷酮硼酸钠仪器、耗材离心机96 孔热循环仪水浴锅微量滴定板清洗仪实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 将密
cDNA－扩增和影印实验
实验方法原理 实验材料 保存于细菌中的克隆纯的、已测序确证的人 EST 序列 试剂、试剂盒
锚定酶消化cDNA实验
试剂、试剂盒溶液与缓冲液引物仪器、耗材试剂盒MPC-EPCR仪Gene PulserII 型系统实验步骤实验方案 A1.通过加入下列物质来消化双链 cDNA2.在 37°C 下消化 lh。3.65°C 孵育 20 min 热失活限制性酶。4.等体积 PCI 抽提后乙醇沉淀（实验方案 A, 第 2 步
RNA的提取和cDNA合成（酸苯酚法）
内 容 提 要利用酸-苯酚法提取植物叶片中的RNA，并对其进行纯化，最后利用反转录酶得到相应的cDNA，可用于以后的分子生物学操作。本实验要求：1、掌握酸-苯酚法提取RNA的方法。2、了解RNA操作中的重要性。原 理从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA 的第一链和第二
PK120－cDNA－克隆实验
实验方法原理 实验材料 cDNA试剂、试剂盒 Ready-To-Go DNA 标记试剂盒人肝脏 λgt11 cDNA 文库人肝脏 λgt10 cDNA 文库杂交溶液SSC 溶液pBluescript II SK 载体仪器、耗材 PCR 扩增仪实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」1. 杂交反应抽提
PK120－cDNA－克隆实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 cDNA
PK120－cDNA－克隆实验
实验材料cDNA试剂、试剂盒Ready-To-Go DNA 标记试剂盒人肝脏 λgt11 cDNA 文库人肝脏 λgt10 cDNA 文库杂交溶液SSC 溶液pBluescript II SK 载体仪器、耗材PCR 扩增仪实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」1. 杂交反应抽提出的 50bp 的 P
关于cDNA第二链的合成方法介绍
（1）自身引导法。合成的单链eDNA3’端能够形成一短的发夹结构,这就为第二链的合成提供了现成的引物。当第一链合成反应产物的DNA—RNA杂交链变性后利用大肠杆菌DNA聚合酶I Klenow片段或反转录酶合成eDNA第二链,最后用对单链特异性的S1核酸酶消化该环,即可进一步克隆。但自身引导合成法
BioRad推出强劲的cDNA合成试剂盒
Bio-Rad公司近日推出了一款“高级”的cDNA合成试剂盒，适用于定量PCR前的cDNA合成。此款名为iScript Advanced cDNA synthesis kit的试剂盒能帮助研究人员生成更多的定量PCR数据，用于基因表达分析。 一般的逆转录试剂盒只能对1 µg总RNA进行
差减－cDNA－文库的建立实验
差减文库包含了存在于一种细胞或组织而不存在于另一种细胞或组织的 mRNA cDNA 克隆。这个 cDNA 文库被用来分离相应于一类 mRNA 的一组 cDNA 克隆，或用 于分离一个特定mRNA 的 cDNA 克隆。这中间筛选 cDNA 克隆的过程是很费劳力的。来源：《精编分子生物学实验指南（第五版
差减－cDNA－文库的建立实验
实验方法原理 实验材料 ［＋］ 和 ［-］cDNA 文库（ATCC 或 Stratagene）试剂、试剂盒 TE 缓冲液EcoRI EDTA蔗糖溶液琼脂糖凝胶TBE 缓冲液乙醇S1 核酸酶S1 核酸酶缓冲液苯酚 氯仿 异丙醇乙酸钠AluIRsaI去离子甲醜胺SDS酵母 tRNA氯仿 异丙醇磷
差减－cDNA－文库的建立实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 ［＋］ 和 ［-］cDNA 文库（ATCC 或 Stra
用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针
本方案以 poly(A) + RNA 作为模板，通过随机引物反应合成 cDNA 探针，这类探针可用于 cDNA 文库的差异筛选。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案以 poly(A) + RNA 作为模板，通过随机引物反应合成 cDNA 探针，这类探针可用于 cDNA
用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针
实验方法原理 本方案以 poly(A) + RNA 作为模板，通过随机引物反应合成 cDNA 探针，这类探针可用于 cDNA 文库的差异筛选。 实验材料
用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针
实验方法原理 本方案以 poly(A) + RNA 作为模板，通过随机引物反应合成 cDNA 探针，这类探针可用于 cDNA 文库的差异筛选。实验材料 反转录酶反转录酶缓冲液随机脱氧核苷酸引物模板 mRNA试剂、试剂盒 乙酸铵DTTEDTA乙醇HClNaOH酚氯仿胰 RNA 酶抑制剂SDS Tris
CDNA第一条链的合成－（20微升体系）
CDNA第一条链的合成 （20微升体系）一、 按以下顺序加样于500微升EP管中1. RNA 5 UL2. Oligo Dt 1 UL3. dNTP 1 UL (浓度10mM)4. DEPC水 5UL (为试剂盒中配套的水)共12UL混匀离心——70℃水浴5分钟——冰浴2分钟（片刻）二、 继续按
cDNA
· cDNA Synthesis (Crawford Lab)mRNA can be converted into DNA (copy DNA, cDNA) by annealing oligo-dT to the 3' poly-A tail that occurs on
基于－PCR－的差减－cDNA－克隆实验
实验方法原理 实验材料 A 和 B 类细胞的双链 cDNA （ds cDNA） 试剂、试剂盒
基于－PCR－的差减－cDNA－克隆实验
实验方法原理 实验材料 A 和 B 类细胞的双链 cDNA （ds cDNA）试剂、试剂盒 ALuIRsaIATPT4 多聚核苷酸激酶及其缓冲液DNA连接酶和及其缓冲液Taq DNA聚合酶及其缓冲液寡核苷酸引物4dNTP 混合物驱动 dNTP 混合物转化感受态菌株HEPES缓冲液链霉亲和素溶
大规模－PCR－制作－cDNA－微阵列实验
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂 生物分子 酶和酶缓冲液 核酸和寡核苷酸 凝胶 仪器、耗材
大规模－PCR－制作－cDNA－微阵列实验
本方案描述了通过 PCR 扩增产物，来制作 cDNA 微阵列的实验步骤。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒缓冲液、溶液和试剂生物分子酶和酶缓冲液核酸和寡核苷酸凝胶仪器、耗材专用设备实验步骤第 1 阶段：影印铺板与工作库的制备一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂羧苄
基于－PCR－的差减－cDNA－克隆实验
差减克隆是分离和鉴定两个细胞群中差异表达的 mRNA 的有效技术。相比较的细胞类型是［＋］（或 测 试）细胞和［-］（或驱动）细胞，在测试细胞中表达而不在驱动细胞中表达的 mRNA 将被分离出来。必需的差减次数主要取决于 cDNA 的多样性。多样性是指每一个细胞类型中不同的cDNA 或 cDNA 片
大规模－PCR－制作－cDNA－微阵列实验（一）
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂生物分子 酶和酶缓冲液核酸和寡核苷酸凝胶仪器、耗材 专用设备实验步骤 第 1 阶段：影印铺板与工作库的制备一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂羧苄西林（100ug/ml 储存溶液）乙醇（100%)甘油，45%(体积分数）LB 液体培养基。（1L LB 液体培养基含有 10
用经典－RACE－扩增－cDNA－的5’末端实验
试剂、试剂盒 GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或总 RNA反转录缓冲液 RNA 酶 HRNasinSuperScriptII 逆转录酶dNTP 溶液DTTTECoCl2dATP 溶液脱氧核苷酸末端转移酶加尾缓冲液 HerculesHot-Start 聚合酶HerculesHot
大规模－PCR－制作－cDNA－微阵列实验（二）
第 3 阶段：克隆的扩增与 PCR 产物的评估一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂DEPC 处理过的 H20TAE 缓冲液，1×（40 mmol/L Tris-乙酸盐，1 mmol/L EDTA，pH 约 8.5)DNA 点样缓冲液（200 g/LFicoll400，0.1mol/LNa2EDTA，pH