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三氯乙酸沉淀实验

三氯乙酸沉淀实验主要用于(1)蛋白质的沉淀纯化;(2)试样化合物的提取。实验方法原理1. 三氯乙酸为酸性化合物,是阴离子型沉淀剂,在低于蛋白质等电点的PH值时,酸根与带正点荷的蛋白质形成不溶性盐而沉淀;2. 作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团, 使之聚集沉淀。3. 随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA 可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显。实验材料蛋白样品试剂、试剂盒丙酮分子量标准TCA+DOC加与不加2-巯基乙醇的样品缓冲液仪器、耗材聚丙烯微量离心管实验步骤材料与设备丙酮(Aldrich Chemical Co.Inc.)注:保存于室温。不能放入冰箱。聚丙烯微量离心管 (1.5-ml)注:1. 用前将离心管洗干净。2. 分析极少量蛋白质(<100ng)时,也许必需按下述方法将离心管硅......阅读全文

三氯乙酸沉淀实验

            实验方法原理 1. 三氯乙酸为酸性化合物,是阴离子型沉淀剂,在低于蛋白质等电点的PH值时,酸根与带正点荷的蛋白质形成不溶性盐而沉淀;2. 作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出

液质联用法对人血浆中冰毒 海洛因 K粉等9种毒品的检测

苯丙胺类兴奋剂包括苯丙胺、甲基苯丙胺冰毒、3,4-甲二氧基苯异丙胺、3,4-亚甲二氧基甲基安非他明等,具有兴奋中枢神经和周围神经、抑制食欲、致幻等作用,并存在与氯胺酮混合使用情况。吗啡类生物碱主要包括海洛因、吗啡、6-单乙酰吗啡和可待因止咳水等滥用药物。世界反兴奋剂机构明确规定这些都是运动员需要避免

高效液相色谱法测定强化食品中维生素C的含量

方案优势       该方法简单快速,其灵敏度、准确度和精密度均能满足强化食品中维生素C 的检测要求。               采用标准     &nb

4.4 原核细胞体外翻译系统

S30 提取物系列产品共分为三类:适用于对环状 DNA 进行体外翻译的大肠杆菌 S30 提取物系统、适用于对线状 DNA 进行体外翻译的大肠杆菌 S30 提取物系统和适用于对环状 DNA 进行休外翻译的大肠杆菌 T7S30 提取物系统。实验材料适用于杯状 DNA 的 S30 提取物适用于线状 DNA

原核细胞体外翻译系统

            实验材料 适用于杯状 DNA 的 S30 提取物 适用于线状 DNA 的 S30 提取物   适用于环状 DNA 的 T7S

有机沉淀法总蛋白提取

从植物叶片提取的植物总蛋白不但是家养类动物生长发育的重要营养物质,而且是具有潜力的新一代营养保健食品,因而掌握植物叶蛋白的提取方法至关重要,让我们一起了解这整个实验原理和过程吧。 一、实验目的 熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法,了解其意义及其应用价值。 二、实验原理 植

有机沉淀法总蛋白提取实用小教程

从植物叶片提取的植物总蛋白不但是家养类动物生长发育的重要营养物质,而且是具有潜力的新一代营养保健食品,因而掌握植物叶蛋白的提取方法至关重要,让我们一起了解这整个实验原理和过程吧。   一、实验目的   熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法,了解其意义及其应用价

包涵体的纯化和复性总结

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌?  细胞的破碎方法  1.高速组织捣碎

蛋白质检测法的缺陷导致牛奶造假

许多人喝牛奶是为了补钙,不过你如果留心一下国内鲜牛奶包装上的标注,一般没有列出钙的含量,标明的营养成分含量只有两种:脂肪和蛋白质。鲜牛奶有全脂、低脂、脱脂之分,其脂肪含量各不相同,而且在脂肪被视为健康杀手的今天,一般人不会在乎脂肪含量是否达标。蛋白质才是牛奶中的主要营养成分,鲜牛奶包装上都会注着蛋白

全自动定氮仪在牛奶蛋白质检测中的缺陷

    随着经济的快速发展,人们生活水平的不断提高,更多的人越来越重视在饮食方面的质量。牛奶是人体所需蛋白质的主要来源,而蛋白质含量则是评价乳制品营养价值高低和质量优劣的重要指标,一般情况下,牛奶中的蛋白质含量越高,其营养价值也就越高。全自动定氮仪正是用于检测物品蛋白质

水稻叶片和根蛋白质的纳升级二维液相色谱串联质谱实验

实验材料:反相装填材料      试剂、试剂盒:缓冲液                               &n

等电聚焦和二维凝胶电泳实验

对于复杂混合物,如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分,通过两步正交的分离 (orthogonalseperation),二维凝胶 (2D 胶)电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷,即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量,即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电

等电聚焦和二维凝胶电泳实验

等电聚焦和二维凝胶电泳实验             试剂、试剂盒 样品缓冲液

蛋白酶的测定实验——茚三酮测定法

实验方法原理茚三酮反应是一种灵敏度高的蛋白实验。游离的氨基酸可以被高敏感性检测出来。这个方法可以被用来继续蛋白质的酶降解。上述的酪蛋白降解在这个实验系统中用作蛋白酶反应。未水解的蛋白质被三氯乙酸沉淀下来,而茚三酮反应发生在上清液。实验材料蛋白酶溶液试剂、试剂盒Tris-HClNaOH乙酸三氯乙酸酪蛋

半自动定氮仪在食品蛋白质含量测定的优势

凯氏定氮法是我国各类食品蛋白质含量测定的标准方法,但是,在实际工作中也存在着一些不尽如人意的地方,最突出的表现在样品消化处理上,消化的温度不仅高而且时间很长,这也就导致了整个测定分析实验的时间长。因此能够快速测定食品蛋白质含量的方法,有着十分重要的意义。  我们根据工作实际及积累的工作经验对这方面的

水稻叶片和根蛋白质的纳升级二维液相色谱串联质谱实验

实验材料反相装填材料试剂、试剂盒缓冲液HPLC 级乙腈HPLC 级甲醇氯化钙溶液碳酸氢铵溶液仪器、耗材离子讲串联质谱仪实验步骤3.1 叶片和根组织的取材以及蛋白质沉淀( 1 ) 从植物的中部切取未衰老的绿色叶片,立即放入自封塑料袋中冷冻。如果没有冷冻设备,可先放在冰上,然后再放到 -20°C 保存。

连缀转录分析实验

            实验方法原理 离心机和转头,沸腾的水浴锅, Dounce 匀浆器,晶型塑料或超明亮型吊桶式离心管,聚丙烯管,刀片,预设到 30°C 的振荡水浴,预设到 4°C 和 65°C 的水浴

连缀转录分析实验

核连缀分析用于确定某个克隆的基因是否受转录调控。理论上,核连缀分析应该在检测稳定状态 mRNA 水平变化的杂交实验之后,而在启动子分析之前进行。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验方法原理离心机和转头,沸腾的水浴锅, Dounce 匀浆器,

cDNA 文库的构建

此经典方案建立在 Gubler-Hoffman 法(Gulber-Hoffman 1983) 之上,分为六个阶段。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。实验材料λ噬菌体臂大肠杆菌菌株用于λ噬菌体的包装抽提物试剂、试剂盒放线菌素 D二硫苏糖醇EDTATris-ClMgCl2反转录酶

cDNA 文库的构建

            实验材料 λ噬菌体臂 大肠杆菌菌株 用于λ噬菌体的包装抽提物 试剂、试剂

植物蛋白质组学和糖基化实验

实验材料链霉亲和素-过氧化物酶                                       &

植物蛋白质组学和糖基化实验2

3. 糖基释放后的蛋白质分析1 ) 糖基释放的化学处理方法还原性氨化反可应选择性的解离糖蛋白上的 O-糖苷(见注释 10) 。去糖基化的蛋白用 1D SDS-PAGE 分析,将其迁移情况与其糖基化形式的蛋白进行比较,电泳迁移率的增加是 O-连糖苷出现在蛋白上的证据(见注释 11)。( 1 ) 将 1

包涵体的纯化-3

做完裂解之后加Triton X-100轻摇30min,蛋白溶解的会多些! 四、包涵体的复性 1、包涵体如何复性 包涵体的复性主要有两种方式: 1,稀释溶液,但是操作的液体量大,蛋白稀释 2,透析,超滤或电渗透析去除变性剂 其中透析很适合实验

cDNA文库构建

cDNA文库[原理]:cDNA文库不同于基因组文库,被克隆DNA是从mRNA反转录来源的DNA。CDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。从而做cDNA克隆时应是先从获得mRNA开始,在此基础上,通过反转录酶作用产生一条与mRNA相互补的DNA链,然后除掉mRNA,以第一条DNA链为模板复制

急性瘦肉精中毒检材的QuEChERS净化-液质联用快速确证方法

文章图片β2型受体激动剂(又称瘦肉精)是一类人工合成药物,主要用于人、兽支气管哮喘的防治,同时对动物能起到降低脂肪含量提高瘦肉率的作用[1]。 人摄入瘦肉精后可能引起血压升高、心率加快、头晕、心悸等心血管系统中毒反应,严重的甚至导致死亡[2,3]。 鉴于其对人体健康危害的严重性,2002年我国就已将

植物组织中总氮、蛋白质氮含量的测定(微量凯氏法)

氮素代谢在植物  的新陈代谢中占主导地位。植物组织中有机氮化物的含量随着植物的生理状况及环境条件的不同而发生变化。所以测定其含量,对研究植物的氮素吸收、运输和代谢规律,以及确定农产品的品质、营养价值等具有一定意义。 一、原理 植物组织中的有机氮化物包括蛋白氮和非蛋白氮。非蛋白氮

三氯乙酸-丙酮法提取植物全蛋白实验

实验材料植物                                         &nb

蛋白质组学的样品制备

想要研究蛋白质,首先要得到高度纯化且具有生物活性的目的物质,因此,蛋白样品的制备是重要前提。蛋白提取的质量和效果对后续的研究分析有重要影响。不同种类的样本在制备过程中,存在一些差异,要根据样本特征调整实验方案和操作细节。基本原则样品处理尽量简单,减少蛋白损失;尽量避免蛋白的降解;尽可能提高样品蛋白的

哺乳动物细胞体外剪接分析实验

剪接反应的典型做法是使用核提取物,即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分,最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理剪接反应的典型做法是使用核提取物,即 S10

哺乳动物细胞体外剪接分析实验

            实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物,即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分,最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体