蛋白中放射性物质掺入率测定实验_三氯乙酸沉淀法
实验材料样品试剂、试剂盒预冷三氯乙酸乙醇乙醚仪器、耗材Whatman GF-C玻璃纤维膜多功能真空仪(Fisher)20 ml 闪烁瓶闪烁计数器实验步骤1. 加入 20 μl 预冷的 10% TCA 停止反应,充分混匀,冰浴 10 min 以沉淀蛋白质。2. 将样品点在真空仪中的 Whatman GF-C 玻璃纤维膜上,待样品通过膜后用 500 μl 预冷的 5% TCA 洗样品管,并将洗后的液体也点在膜上。3. 用 5 ml 5% 的预冷 TCA 溶液洗膜 4 次,用 10 ml 95% 的乙醇洗一次,再用 10 ml 乙醚洗 3 次,使膜干燥。4. 将干燥后的膜放入 20 ml 闪烁瓶,在闪烁计数器中用契仑科夫(Cerenkov)射线计数。展开 注意事项1. 乙醚是易燃品,因此带乙醚操作时必须在通风橱中进行,并远离火源和热源。乙醚洗液应被妥善处理。2. 如果需对每分钟蜕变次数(dpm)定量,将干燥后的膜放入10 m......阅读全文
蛋白中放射性物质掺入率测定实验_三氯乙酸沉淀法
实验材料样品试剂、试剂盒预冷三氯乙酸乙醇乙醚仪器、耗材Whatman GF-C玻璃纤维膜多功能真空仪(Fisher)20 ml 闪烁瓶闪烁计数器实验步骤1. 加入 20 μl 预冷的 10% TCA 停止反应,充分混匀,冰浴 10 min 以沉淀蛋白质。2. 将样品点在真空仪中的 Whatman G
蛋白中放射性物质掺入率测定实验
实验方法原理 实验材料 样品试剂、试剂盒 预冷三氯乙酸乙醇乙醚仪器、耗材 Whatman GF-C玻璃纤维膜多功能真空仪(Fisher)20 ml 闪烁瓶闪烁计数器实验步骤 1. 加入 20 μl 预冷的 10% TCA 停止反应,充分混匀,冰浴 10 min 以沉淀蛋白质。2. 将样品点在真空仪中
蛋白中放射性物质掺入率测定实验
三氯乙酸沉淀法 实验方法原理 实验材料 样品
三氯乙酸沉淀实验
试剂、试剂盒 丙酮分子量标准TCA+DOC加与不加2-巯基乙醇的样品缓冲液仪器、耗材 聚丙烯微量离心管实验步骤 材料与设备丙酮(Aldrich Chemical Co.Inc.)注:保存于室温。不能放入冰箱。聚丙烯微量离心管 (1.5-ml)注:1. 用前将离心管洗干净。2. 分析极少量蛋白质(
三氯乙酸沉淀实验
实验方法原理 1. 三氯乙酸为酸性化合物,是阴离子型沉淀剂,在低于蛋白质等电点的PH值时,酸根与带正点荷的蛋白质形成不溶性盐而沉淀;2. 作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团, 使之聚集沉淀。3. 随着蛋白质分子量的增
三氯乙酸沉淀实验
三氯乙酸沉淀实验主要用于(1)蛋白质的沉淀纯化;(2)试样化合物的提取。实验方法原理1. 三氯乙酸为酸性化合物,是阴离子型沉淀剂,在低于蛋白质等电点的PH值时,酸根与带正点荷的蛋白质形成不溶性盐而沉淀;2. 作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团, 使之聚集沉淀。3. 随着蛋白
三氯乙酸丙酮法提取植物全蛋白实验
实验材料植物试剂、试剂盒三氯乙酸β-巯基乙醇丙酮R2D2 蛋白质溶解缓冲液UKS 蛋白质溶解缓冲液IPG 胶条水化液仪器、耗材研钵和研槌实验步骤1. 蛋白质沉淀与变性( 1 ) 用研钵和研槌在液氮中将植物材料研磨成细小的粉末( 见注释 4) 。( 2 ) 将约 200 μl 粉末转移到 2 ml 的
三氯乙酸丙酮法提取植物全蛋白实验
实验材料 植物试剂、试剂盒 三氯乙酸β-巯基乙醇丙酮R2D2 蛋白质溶解缓冲液UKS 蛋白质溶解缓冲液IPG 胶条水化液仪器、耗材 研钵和研槌实验步骤 1. 蛋白质沉淀与变性( 1 ) 用研钵和研槌在液氮中将植物材料研磨成细小的粉末( 见注释 4) 。( 2 ) 将约 200 μl 粉末转移到 2
三氯乙酸丙酮法提取植物全蛋白实验
实验材料植物 试剂、试剂盒三氯乙酸 β-巯基乙醇
用酸沉淀法浓缩蛋白质实验——三氯醋酸沉淀法
实验材料含蛋白质的样品试剂、试剂盒100%三氯醋酸(TCA)0.1N NaOH(400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸馏水)实验步骤1. 在 1ml 样品中至少要含有 5mg 蛋白质。加 100 ul 100% 的三氯醋酸(TCA),混匀;2. 将蛋白质在冰浴中沉淀 30 min (或在冷冻
三氯乙酸双缩脲比色法测定真蛋白的方法介绍
该方法的基本原理为:采用150g/L的三氯乙酸溶液(在混合物中的最终浓度约为120g/L )沉淀乳中的蛋白质,用过滤法分离沉淀和溶液,沉淀部分含蛋白态氮,非沉淀部分(溶液)含非蛋白态氮。将滤渣收集起来,再用双缩脲法进行定氮。即可得出样品中的真蛋白含量。三氯乙酸-双缩脲比色法可以较好地检测出乳中的真蛋
以3HTdR-掺入测定DNA合成实验
实验方法原理用3H -TdR 标记细胞,提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平实验步骤 材料 无菌 处于合适时期的细胞(若使用热的 2mol/L PCA 方法需要细胞生长于玻璃器皿或试管中,若用其他方法,细胞可培养于常规的塑料皿中) 3H-TdR ,0.4 MBq /ml (约 10uC i/ml)
以3HTdR-掺入测定DNA合成实验
实验方法原理 用3H -TdR 标记细胞,提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平 实验步骤 材料 无菌 处于合适时期的细胞(若使用热的 2mol/L PCA
以3HTdR-掺入测定DNA合成实验
实验方法原理 用3H -TdR 标记细胞,提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平实验步骤 材料无菌处于合适时期的细胞(若使用热的 2mol/L PCA 方法需要细胞生长于玻璃器皿或试管中,若用其他方法,细胞可培养于常规的塑料皿中)3H-TdR ,0.4 MBq /ml (约 10uC i/ml),每毫升
以3HTdR-掺入测定DNA合成实验
实验方法原理用3H -TdR 标记细胞,提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平实验步骤材料无菌处于合适时期的细胞(若使用热的 2mol/L PCA 方法需要细胞生长于玻璃器皿或试管中,若用其他方法,细胞可培养于常规的塑料皿中)3H-TdR ,0.4 MBq /ml (约 10uC i/ml),每毫升培养
用酸沉淀法浓缩蛋白质实验——丙酮沉淀法
实验材料含蛋白质的样品试剂、试剂盒丙酮(或其他有机溶剂如乙醇或甲醇)仪器、耗材Eppendorf 管(小塑料离心管)Eppendorf 管离心机(小型台式离心机)混旋器实验步骤1. 加 1 ml冷丙酮(-20℃)至 200 ul 样品溶液,混匀。2. -20℃: 放置 10 min。3. 小型台式离
豆芽中掺入有毒、有害物质,涉事人员被追究刑事责任
5月16日,宁国市法院公开开庭审理一起生产、销售有毒、有害食品刑事附带民事公益诉讼案。这是宁国市法院审理的首例食品安全领域刑事附带民事公益诉讼案件。宁国市人大常委会党组副书记、副主任马文清率部分人大代表到场旁听,宁国市法院党组书记、院长袁风影陪同旁听。宁国市市场监督管理局、宁国市人民检察院工作人
表达蛋白检测实验_免疫沉淀法
实验方法原理使用强大的晚期基因启动子表达的重组蛋白可以用放射性氨基酸标记,再用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。当使用早期或晚期基因启动子时,利用标记蛋白免疫沉淀能提高灵敏性和特异性。试剂、试剂盒磷酸缓冲液(PBS)细胞裂解液[35S]蛋氨酸或[35S]半胱氨酸仪器、耗材完全 MEM-5 培养基(含和不含蛋氨
分子生物学常用实验技术(六)
一、材料 提纯TMV 病毒液(10mg/ml)。二、设备 冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。三、试剂 TE-饱和酚:氯仿(1:1),氯仿,3M NaAc(pH5.2),乙醇(100%和70%),TE 缓冲液,无RNA 酶的双菌水。四、操作步骤1、取一eppendorf 管加入提纯
有用三氯乙酸沉淀分离蛋白的吗?需要多大的浓度?
简单的就是用纯化水或去离子水多洗涤几次,会影响蛋白的收率也可以使用膜渗透的办法,使用选择性膜将小分子的三氯乙酸与大分子蛋白质分离,不过此方法使用后需要物理浓缩过程,会增加能耗,而且如果蛋白质对热敏感不太适合使用
简述三氯乙酸的应急处理
1、泄漏应急处理 隔离泄漏污染区,周围设警告标志,建议应急处理人员戴好防毒面具,穿化学防护服。不要直接接触泄漏物,将地面洒上苏打灰,然后用大量水冲洗,经稀释的洗水放入废水系统。如大量泄漏,收集回收或无害处理后废弃。 2、防护措施 呼吸系统防护:空气中浓度超标时,应该佩带防毒口罩。必要时佩带
100%三氯乙酸(TCA)配制方法
在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)
关于三氯乙酸的基本介绍
三氯乙酸,又名三氯醋酸,是一种有机化合物,化学式为C2HCl3O2,有刺激性气味,易潮解,溶于水、乙醇、乙醚 。主要用于有机合成和制备医药、也可用作化学试剂、杀虫剂。 2017年10月27日,世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考,三氯乙酸在2B类致癌物清单中。 化学式:C
RNA的提取和cDNA合成原理和实验方法(3)
第三节 植物病毒RNA 提取大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。一、材料提纯TMV病毒液(10mg/ml)。二、设备冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。三、试剂TE-饱和酚:氯仿(1:1),氯仿
用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针
实验方法原理 本方案以 poly(A) + RNA 作为模板,通过随机引物反应合成 cDNA 探针,这类探针可用于 cDNA 文库的差异筛选。实验材料 反转录酶反转录酶缓冲液随机脱氧核苷酸引物模板 mRNA试剂、试剂盒 乙酸铵DTTEDTA乙醇HClNaOH酚氯仿胰 RNA 酶抑制剂SDS Tris
用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针
实验方法原理 本方案以 poly(A) + RNA 作为模板,通过随机引物反应合成 cDNA 探针,这类探针可用于 cDNA 文库的差异筛选。 实验材料
用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针
本方案以 poly(A) + RNA 作为模板,通过随机引物反应合成 cDNA 探针,这类探针可用于 cDNA 文库的差异筛选。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案以 poly(A) + RNA 作为模板,通过随机引物反应合成 cDNA 探针,这类探针可用于 cDNA
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 通过免疫沉淀,用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物,第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌,以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物,蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说,纯化的蛋
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理通过免疫沉淀,用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物,第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌,以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物,蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说,纯化的蛋白质
用酸沉淀法浓缩蛋白质实验
三氯醋酸沉淀法 丙酮沉淀法 实验方法原理 实验材料 含蛋白质的样品