蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验
分子生物学中最重要的环节之一是对微量蛋白质进行分析，使对编码待研究蛋白的 cDNA 序列的克隆成为可能。为有效地做到这一点，通常需要知道蛋白质的内序列。在这一方面，肽段的有效分离是极重要的。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒考马斯亮蓝 G乙酸甲醇Achromobacter 胰蛋白酶 I三氟乙酸乙腈2-丙醇仪器、耗材SpeedVac 型旋转浓缩器Tween-20UltrafreeTM MC 滤器C18 反相 HPLC 柱实验步骤材料与设备考马斯亮蓝 G(0.05% 的乙酸-20% 甲醇溶液）乙酸 (5% 的 10% 甲醇溶液）甲醇 (50% 的水溶液和 10% 的水溶液）SpeedVac 型旋转浓缩器（Savant Instruments,Inc.)Achromobacter 胰蛋白酶 I〔赖氨酰内肽酶;50ng/ul 的 0.1mol/LTri-HCl(pH9.0)〕Tween-20〔0.1% 的 ......阅读全文
蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G 乙酸 甲醇 Achromobacter 胰蛋白酶 I 三氟乙酸 乙腈 2-丙醇
蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G乙酸甲醇Achromobacter 胰蛋白酶 I 三氟乙酸乙腈2-丙醇仪器、耗材 SpeedVac 型旋转浓缩器Tween-20UltrafreeTM MC 滤器C18 反相 HPLC 柱实验步骤 材料与设备考马斯亮蓝 G(0.05% 的乙酸-20% 甲醇溶液）乙酸 (5
蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验
分子生物学中最重要的环节之一是对微量蛋白质进行分析，使对编码待研究蛋白的 cDNA 序列的克隆成为可能。为有效地做到这一点，通常需要知道蛋白质的内序列。在这一方面，肽段的有效分离是极重要的。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒考马斯亮蓝 G乙酸甲醇Achromobacte
PK120－的纯化及肽段氨基酸序列分析实验
实验方法原理 实验材料 PK-120试剂、试剂盒 Q-Sepharose 树脂S-Sepharose 树脂Hudroxyapatite 羟基磷灰石Sephacryl S－200 凝胶赖氨酸内切酶乙腈三氯醋酸仪器、耗材 Applied Biosystems model 477A 气相蛋白质测定仪A
PK120－的纯化及肽段氨基酸序列分析实验
实验材料PK-120试剂、试剂盒Q-Sepharose 树脂S-Sepharose 树脂Hudroxyapatite 羟基磷灰石Sephacryl S－200 凝胶赖氨酸内切酶乙腈三氯醋酸仪器、耗材Applied Biosystems model 477A 气相蛋白质测定仪Applied Biosy
PK120－的纯化及肽段氨基酸序列分析实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 PK-120
电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
方案1 蛋白质的过甲酸氧化实验 方案2 蛋白质还原和S-羧甲基化：大规模方法 方案3 蛋白质还原和S-羧甲基化：微量方法 方案4 用Ellman 试剂测定自由巯基和二硫键实验 方案5 蛋白质的胰酶消化实验 方案6 用溴化氰切割 M
电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
实验材料 冻干的纯化蛋白样品试剂、试剂盒 甲酸氢溴酸过氧化氢NaOH 固体仪器、耗材 旋转蒸发器小试管实验步骤 1.加入 100ul 过氧化氢到 900ul 甲酸中，在室温下放置让，将反应产生过甲酸 (HCOOOH)。2.在冰上冷冻过甲酸至 0°C。3.在预冷的小试管中，将蛋白质溶解于 50ul 过
方案13－胶内蛋白质的酶解和肽段提取实验
实验材料在二维凝胶电泳中分离的蛋白质试剂、试剂盒胶内胰酶消化缓冲液三氟乙酸（TFA)仪器、耗材冷冻干燥离心机小离心管水浴锅实验步骤1.切下凝胶上的蛋白质点，放人小离心管中。2.以 0.lmol/L NH4HCO3、50% 乙腈（用于胰酶）或 0.05mol/L Tris-HCl(PH9.3)、50%
内含肽的分离纯化
内含肽具自切割特性的这种特性而实现目标蛋白与亲和标签分离的目的。内含肽在蛋白质纯化中的应用修饰后(位点特异性突变)的内含肽经诱导能够介导N端或C端单侧肽键断裂。首先将编码亲和标签、内含肽及目标蛋白的基因序列连接在一起，在合适的宿主系统中表达出一个标签-内含肽-目标蛋白的三联体，利用修饰后的内含肽构建
RNA分离与分析实验_用丙烯酰胺尿素凝胶纯化RNA
实验材料RNA试剂、试剂盒TBE 缓冲液丙烯酰铵溶液过硫酸铵水溶液RNA 染色液仪器、耗材玻璃板实验步骤1. 准备下列溶液：TBE 缓冲液：Tris 碱 54 g，硼酸 27.5 g，0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 20 ml，溶解并加水至 1000 ml。当发现贮存液有白色沉淀
蛋白质的表达、分离、纯化实验
实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程
蛋白质的表达、分离、纯化实验
基因重组—层析法 实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转
用质谱数据对肽段从头测序实验
方案一 方案二 方案三 实验方法原理 单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列，即相邻肽段间相差一个氨基酸残基，用质谱分析肽阶梯，通常用 MALD
用质谱数据对肽段从头测序实验
实验方法原理 单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列，即相邻肽段间相差一个氨基酸残基，用质谱分析肽阶梯，通常用 MALDI-TOF,MS 分析。 MS/MS 测序用的是上文所述用于数据库检索的 CID 谱，但碎片离子由人工完全解析。用于MS 序列分析的肽阶梯是由化学或酶法降解肽段产生，由 C 未端或N未端
蛋白质分离纯化设备的蛋白质的分离纯化方法介绍
一、沉淀法 沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质，进而导致有效成分的溶解度发生变化。 1、盐析法 盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷
蛋白质分离纯化
蛋白质分离纯化是用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质的方法。
蛋白质的表达、分离、纯化实验——层析法
蛋白质表达、分离、纯化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理；（2）供作结构与功能的研究；（3）作为催化剂、营养剂等。实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共
随机序列库的纯化实验
实验方法原理 实验材料 DNA 库试剂、试剂盒 氢氧化铵正丁醇TE 缓冲液 尿素上样缓冲液NaCl 乙醇仪器、耗材 荧光薄层层析板（VWR）紫外灯剃刀刀片小孔注射器能耐受极端温度的 13 ml 离心管（Sarstedt） 90℃水浴旋转混合器实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他
随机序列库的纯化实验
实验方法原理 实验材料 DNA 库 试剂、试剂盒 氢氧化铵
随机序列库的纯化实验
实验方法原理实验材料DNA 库试剂、试剂盒氢氧化铵正丁醇TE 缓冲液尿素上样缓冲液NaCl乙醇仪器、耗材荧光薄层层析板（VWR）紫外灯剃刀刀片小孔注射器能耐受极端温度的 13 ml 离心管（Sarstedt）90℃水浴旋转混合器实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 寡核苷酸
蛋白质特性与分离纯化技术的选择
摘要：蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质，综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异，利用一种同时多种性质差异，在兼顾收率和纯度的情况下，选择蛋白质提纯的方法。关键词：蛋白质 分离纯化前言 蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂
蛋白质特性与分离纯化技术的选择
摘要：蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质，综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异，利用一种同时多种性质差异，在兼顾收率和纯度的情况下，选择蛋白质提纯的方法。 关键词：蛋白质 分离纯化 前言 蛋白质
蛋白质特性与分离纯化技术的选择
摘要：蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质，综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异，利用一种同时多种性质差异，在兼顾收率和纯度的情况下，选择蛋白质提纯的方法。关键词：蛋白质 分离纯化前言 蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂
蛋白质的分离纯化
蛋白质的分离纯化方法如下：一、根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析法：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。2、等电点沉淀法：蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电
蛋白质的分离纯化
一，蛋白质（包括酶）的提取 大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。（一）水溶液提取法 稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1
概述内含肽的分离纯化的介绍
内含肽具自切割特性的这种特性而实现目标蛋白与亲和标签分离的目的。内含肽在蛋白质纯化中的应用修饰后(位点特异性突变)的内含肽经诱导能够介导N端或C端单侧肽键断裂。首先将编码亲和标签、内含肽及目标蛋白的基因序列连接在一起，在合适的宿主系统中表达出一个标签-内含肽-目标蛋白的三联体，利用修饰后的内含肽
用质谱数据对肽段从头测序实验（一）
实验方法原理单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列，即相邻肽段间相差一个氨基酸残基，用质谱分析肽阶梯，通常用 MALDI-TOF,MS 分析。 MS/MS 测序用的是上文所述用于数据库检索的 CID 谱，但碎片离子由人工完全解析。用于MS 序列分析的肽阶梯是由化学或酶法降解肽段产生，由 C 未端或N未端断
用质谱数据对肽段从头测序实验（三）
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤另外一种便于人工解析 CID 谱及从头测序的化学方法是对肽段的羧基实行甲酯化。这个反应使肽段每一个羧基质量增加 14u, 包括未修饰的（末端、 Asp 和 Glu上的羧基。如果肽段中没有酸性残基，同时C未端没有被修饰，那么只有 y 系列离子及其中性丢失离子会表
用质谱数据对肽段从头测序实验（二）
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤第二种方法，也称为"nested peptide secquendng", 是在一个 Edman 降解循环中多次加入多肽/蛋白质底物心在此法中加入过量易挥发的 Edman 试剂以使反应完全，每一循环中的过显试剂可通过蒸发被除去。经 MALDI-MS 分析得到肽