疏水作用层析法纯化蛋白质实验
疏水相互作用层析是以介质疏水基团和蛋白质疏水区域间的亲和作用为基础的。疏水力是浸在一种极性液体（如水）中的非极性物质的排斥力。胞膜蛋白都具有一个明显的疏水区域以锚定在膜上。可溶性蛋白质在外表面上可能存在疏水小区，它促进蛋白复合物的形成，也可能是疏水配基结合部位或活性部位。这些暴露的疏水区对疏水层析纯化而言足非常理想的。尽管疏水层析利用相对非持异的亲和力分离纯化蛋白质，而且不具有高分辨率，但是该法很有用。来源：《蛋白质技术手册》实验方法原理在疏水层析的主要支持介质上含有大小不等的疏水侧链，烷基或芳香基，可是绝大多数情况起作用的是苯基或辛基。当碳氢链长度增加，即变得更疏水时，疏水强的少量蛋白质被吸附。这时疏水相互作用太强，需用极端方法洗脱，可能会导致蛋白质变性。苯基琼脂糖比辛基琼脂糖疏水性低，是疏水纯化中效果不错的常用介质，尤其是试用于纯化开始时。疏水相互作用介质苯基琼脂糖-O-CH2-CHOH-CH2-O-C6H5辛基琼脂糖-O-......阅读全文
低压液相分离层析仪实际操作（蛋白质纯化分离实验）
蛋白质纯化分离实验层析柱：基本原理：层析柱起到分离的作用，并且还可以加样品。连接：在实验中，支架先将层析柱固定好，上面进口与恒流泵的左边管相连，下面出口与核酸蛋白的下管进口相连（连接部可加一塑料软管）核酸蛋白检测仪：基本原理：检测范围：10个毫谱；T为透光度，A为光敏度，样品浓度越高需求灵敏度就要调
离子交换柱层析法（层析实验简介）概略
一、 原理：有些高分子物质含有一些可以分离的基因，例如-SO3H，-COOH等，因此可以和溶液中的离子产生交换反应。如：R-SO3H＋M+ ———— R-S3M＋H+或R-NH3OH＋CL－ ————— R-NH3CL＋OH－这类高分子物质通称离子交换剂，其中使用最普遍的是离子交换树脂。由
疏水作用的特点和作用
疏水作用是指水介质中球状蛋白质的折叠总是倾向于把疏水残基埋藏在分子内部的现象。 疏水作用及疏水和亲水的平衡在蛋白质结构与功能的方方面面都起着重要的作用。
尿素在蛋白质纯化中的作用
高浓度(8—10mol/L)的尿素会使蛋白质变性溶解，对于包涵体形态的蛋白质（与发酵所采用的菌种有关，用大肠杆菌基因工程菌株作为生产菌种产生的蛋白一般都是以包涵体的形式存在，蛋白非正常折叠无生物活性；而用酵母菌表达体系产生的蛋白是有生物活性的，但是产量很低）来说，用高浓度的尿素或者盐酸胍溶解是进行纯
DEAE纤维素柱层析纯化酶蛋白实验
离子交换层析法 实验方法原理 利用DEAE纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。 实验材料
DEAE纤维素柱层析纯化酶蛋白实验
实验方法原理 利用DEAE纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。实验材料 酶蛋白试剂、试剂盒 DEAE纤维素NaOHHCLTris-HCl缓冲液NaCl仪器、耗材 层析柱收集器磁力搅拌器搅拌子烧杯玻璃砂漏斗水泵抽滤瓶pH试纸pH计三通管止水夹吸耳球紫外比色杯尿糖试纸点滴板电导率仪实验步骤 1.
蛋白质的表达、分离、纯化实验
基因重组—层析法 实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转
蛋白质的表达、分离、纯化实验
实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程
mRNA的提取及纯化（磁珠法和亲和柱层析法）
真核细胞的mRAN是单顺反子，其最显著的特征是具有５'端帽子结构和3'端的poly A的结构，此poly A结构为mRNA的提取提供了有效的途径，人们利用碱基配对原理，采用寡聚Ｔ结构作为亲和柱材料，当含mRNA的总RNA样品流经寡聚Ｔ柱时，mRAN即被特异性的结合到柱上，从而可与
疏水色谱的原理和应用
疏水色谱是利用样品分子与固定相的疏水力作用的不同，用流动相洗脱时，各组分迁移速度不同而达到分离的目的。流动相一般为pH 6-8的盐水溶液，具有对蛋白质的回收率高，蛋白质变性可能性小等优势。由于流动相中不使用有机溶剂，也有利于蛋白质保持固有的活性。 疏水作用色谱是在高离子强度的条件下，蛋白质
DNA纯化实验——PCR清洁试剂盒纯化法
实验方法原理硅胶膜可在高盐条件下结合DNA，又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性，所以被分离开来。 实验材料PCR产物试剂、试剂盒PCR清洁试剂盒仪器、耗材96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板实验步骤一
免疫球蛋白的分离提纯
免疫球蛋白的分离提纯： Δ 目的 有利标记；减少非特异反应；有利Ig定量 Δ 分离提纯方法（原理）：一般选用2~3种，或同一方法反复进行2~3次 盐析法：在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，亲水性变为疏水性，分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。不同蛋白质盐析所需中性盐的浓度不同
免疫球蛋白的分离提纯
免疫球蛋白的分离提纯： Δ 目的 有利标记；减少非特异反应；有利Ig定量 Δ 分离提纯方法（原理）：一般选用2~3种，或同一方法反复进行2~3次 盐析法：在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，亲水性变为疏水性，分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。不同蛋白质盐析所需中性盐的浓度不同
大小排阻层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
放射性标记的寡核苷酸用于酶促反应如引物延伸反应时，需要完全除去未掺入的放射性标记物。本方案介绍的是利用大小排阻层析时寡核苷酸与单核苷酸移动速率差异，分离放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物的方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。 试剂、试剂盒
大小排阻层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 氯仿 EDTA 乙醇 酚：氯仿 乙酸钠 TE Tris-Cl Tris-SDS
大小排阻层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 氯仿EDTA乙醇酚：氯仿乙酸钠TETris-ClTris-SDS 层析缓冲液放射性标记的寡核苷酸纯化的原料仪器、耗材 凝胶过滤树脂破璃棉巴斯德吸管实验步骤 材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。氯仿任选，见步驟 7。EDTA(0.5mol/L,pH8.0)乙醇酚：氯仿任选，见步骤 7。
纯化非肌肉肌球蛋白实验——非肌肉肌球蛋白的层析纯化
实验材料非肌肉肌球蛋白试剂、试剂盒匀浆缓冲液肌动蛋白聚合缓冲液凝胶过滤 羟基磷灰石缓冲液GF HT 缓冲液仪器、耗材大容量转头实验步骤高速离心和 DEAE 层析1. 用不含除了 PMSF 以外的蛋白水解抑制剂的匀浆缓冲液平衡 DEAE 纤维素，取 50 ml 装到 2.5cm x 35cm 有合适管
凝胶层析法分离蛋白质操作方法
本实验通过SephadexG50层析柱，以蒸馏水为洗脱剂，分离血红蛋白(红色，分子量约64500)与硫酸铜(蓝色，分子量249.5)的混合物，从颜色的不同可观察到血红蛋白洗脱快，硫酸铜洗脱较慢。 三．材料 1．仪器 层析柱(直径0.8-1.5cm，长10-20cm)；吸管；玻璃棒；小烧杯；2
东曹HPLC分析分离及中低压层析纯化技术应用研讨会举办
分析测试百科网讯 2017年12月1日，由东曹（上海）生物科技有限公司（TOSOH）、默隆（上海）实业有限公司主办的液相色谱分离分析及中低压层析纯化技术应用研讨会在上海博雅酒店举行。会议特邀国外专家以及TOSOH资深技术人员前来，围绕生物医药（单克隆抗体、ADC药物等）在研发或生产中所涉及的HP
蛋白质技术专题：凝胶过滤层析实验
凝胶过滤层析（gel filtration chromatography）法又称排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。实验方法蛋白质的凝胶过滤
吸附法纯化病毒实验——红细胞吸附法
实验方法原理用于某些可与红细胞吸附的病毒的浓缩，如正粘病毒和副粘病毒，由于红细胞吸附法是特异的，故可达到浓缩并纯化的目的。实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液鸡红细胞悬液仪器、耗材烧杯水浴锅实验步骤用作吸附病毒的红细胞一般选择适宜动物的红细胞，常用的是鸡红细胞。基本步骤为：① 1%~3% 鸡
蛋白质的亲疏水性
可以从氨基酸组成上分析，比如用软件分析有多少个氨基酸组成，其中疏水性氨基酸有多少，亲水性氨基酸有多少，然后软件会综合分析出整个序列的亲疏水性。不过这个方法只是预测，未必准确。然后就是通过盐析实验来分析，具体就是通过加入不同浓度的中性盐比如硫酸铵，分级沉淀蛋白质，根据蛋白质沉淀时的盐浓度来判断亲疏水性
疏水键的作用
蛋白质分子中许多氨基酸的疏水侧链有形成疏水键的倾向，由于疏水效应，这些疏水残基常被水驱入蛋白质分子内总聚集成簇，带动肽链盘曲折叠，对蛋白质三、四级结构的形成和稳定起重要作用。
疏水键的作用
蛋白质分子中许多氨基酸的疏水侧链有形成疏水键的倾向，由于疏水效应，这些疏水残基常被水驱入蛋白质分子内总聚集成簇，带动肽链盘曲折叠，对蛋白质三、四级结构的形成和稳定起重要作用。
疏水作用色谱概述
疏水作用色谱始于1972年SHaltiel及其工作者，他们利用带有碳氢化合物配基的琼脂糖凝胶以“疏水亲和色谱”分离蛋白 质。在其他实验室内也进行了类似研究和探索，1976年Hofstee将这种类型的色谱命名为疏水作用色谱。1980 年前后，不少学者就疏水作用的机理、分离规律等进行了大量研究
亲和层析法(affinity－chromatography)纯化胰蛋白酶2
本实验采用猪胰蛋白酶的天然抑制剂—鸡卵类粘蛋白作为配基．从猪胰脏的粗提液中分离纯化胰蛋白酶。鸡卵类粘蛋白是一种专一性很强的胰蛋白酶的抑制剂，对猪和牛的胶蛋白酶有很强的抑制作用。而对胰凝乳蛋白酶无抑制作用。在pH7.6~8.0的范围内，猪或牛胰蛋白酶能牢固地吸附在鸡卵类粘蛋白上，在 PH2.5
亲和层析法(affinity－chromatography)纯化胰蛋白酶1
一、实验目的 1.熟悉亲和层析纯化蛋白质的的原理。 2.初步掌握亲和层析法纯化胰蛋白酶的方法步骤。 二、实验原理 亲和层析已经广泛应用于生物分子的分离和纯化，如结合蛋白、酶、抑制剂、抗原、抗体、激素、激素受体、糖蛋白、核酸及多糖类等，也可用于分离细胞
血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定（凝胶层析法）2
（5）20%磺基水杨酸溶液（6）奈氏(Nessler)试剂应用液贮存液；称取碘化钾(KI)7.58g于250ml三角烧瓶中，用蒸馏水5ml溶解，再加入碘（I2） 5.5g溶解，加7～7.5gHg用力振摇10min(此时产生高热，须冷却)，直至棕红色的碘转变成带绿色的碘化汞钾液为止，过滤上清液倾入
血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定（凝胶层析法）1
目的要求1．了解蛋白质分离提纯的总体思路。2．掌握盐析法、分子筛层析法、离子交换层析等实验原理及操作技术。 实验原理 血清中蛋白质按电泳法一般可分为五类：清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白，其中γ-球蛋白含量约占16％，100ml血清中约含1.2g左右。
蛋白质纯化的方法选择
随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说，分子克隆的下