大小排阻层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
放射性标记的寡核苷酸用于酶促反应如引物延伸反应时，需要完全除去未掺入的放射性标记物。本方案介绍的是利用大小排阻层析时寡核苷酸与单核苷酸移动速率差异，分离放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物的方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。试剂、试剂盒氯仿EDTA乙醇酚：氯仿乙酸钠TETris-ClTris-SDS层析缓冲液放射性标记的寡核苷酸纯化的原料仪器、耗材凝胶过滤树脂破璃棉巴斯德吸管实验步骤材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。氯仿任选，见步驟 7。EDTA(0.5mol/L,pH8.0)乙醇酚：氯仿任选，见步骤 7。乙酸钠（3mol/L,pH5.2）任选，见步驟 7。TE(pH7.6)Tris-Cl(1mol/L pH8.0)任选，见步骤 7。Tris-SDS 层析缓冲液10 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)0.1%(m/V)SDS核酸和寡核苷酸放射性标记的寡核苷酸纯化的原料为方案 2(步......阅读全文
大小排阻层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
放射性标记的寡核苷酸用于酶促反应如引物延伸反应时，需要完全除去未掺入的放射性标记物。本方案介绍的是利用大小排阻层析时寡核苷酸与单核苷酸移动速率差异，分离放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物的方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。试剂、试剂盒氯仿EDTA乙醇酚：氯仿乙酸
大小排阻层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 氯仿EDTA乙醇酚：氯仿乙酸钠TETris-ClTris-SDS 层析缓冲液放射性标记的寡核苷酸纯化的原料仪器、耗材 凝胶过滤树脂破璃棉巴斯德吸管实验步骤 材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。氯仿任选，见步驟 7。EDTA(0.5mol/L,pH8.0)乙醇酚：氯仿任选，见步骤 7。
大小排阻层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 氯仿 EDTA 乙醇 酚：氯仿 乙酸钠 TE Tris-Cl Tris-SDS
乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 乙酸铵 乙醇 TE 放射性标记的寡核苷酸 纯化的原料 实验步骤
乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
如果放射性标记的寡核苷酸只是用作杂交探针的话，一般不必完全除去未掺入的放射性标记物。然而，为了使本底降至最低，应该将未掺入的大部分放射性标记物与放射性标记的寡核苷酸分离。如果寡核苷酸长度超过 18 个核苷酸（本方案)，则绝大部分未反应的放射性前体物质可通过乙醇分级沉淀除去。本实验来源于分子克隆实验指
乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 乙酸铵乙醇TE放射性标记的寡核苷酸纯化的原料实验步骤 材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。乙酸铵（1mol/L)乙醇TE(pH7.6)核酸和寡核苷酸放射性标记的寡核苷酸纯化的原料是方案 2(步驟 3 或步骤 5) 的反应混合液，T4 噬菌体多核苷酸激酶巳在 68°C 加热后灭活。方法
CPB沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
本方案介绍用阳离子去污剂——十六烧基溴化吡啶（cetylpyridinium bromide,CPB) 定量差异沉淀分离放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物。此方法最初是用于回收磷酸缓冲液从羟磷灰石柱洗脱的 DNA(Geek and Nasz 1983), 也可用于沉淀放射性标记核酸包括寡核苷
CPB沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 十六烷基溴化吡啶 EDTA-Tris EDTA-Tris-DNA 溶液 乙醇-乙酸钠溶液 乙醇 乙酸钠 TE(
利用寡核苷酸延伸法进行纯化DNA片段的放射性标记
随机引物法：利用寡核苷酸延伸法进行纯化DNA片段的放射性标记1. 在一个0.5ml的微量离心管中加入溶于30μl水的模板DNA(25ng)及1μl随机脱氧核苷酸引物（约125ng）。盖紧微量离心管，置于沸水浴中2min。2. 将微量离心管移至冰上放置1min，4℃下离心10
用SepPak－C18柱层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
本方案介绍的是利用寡核苷酸对于硅胶反相亲和的特性，将放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物分离的方法，本方案的方法只可用于纯化 5'端放射性标记或非标记的含磷酸基团的寡核苷酸，而方案 1 所介绍的方法多用于 5'末端为游离羟基的寡核苷酸。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册
用SepPak－C18柱层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 乙腈碳酸氢铵TE 溶液放射性标记寡核苷酸仪器、耗材 离心干燥机微量离心管放于管架或收集器Sep-Pak 经典层析柱注射器实验步骤 材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。乙腈（5%、30% 和 100%)毎个 Sep-Pak C18 柱用 10 ml 髙效液相（HPLC) 级乙腈（100
用SepPak－C18柱层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 乙腈 碳酸氢铵 TE 溶液 放射性标记寡核苷酸 仪器、耗材 离心干
寡核苷酸5末端磷酸化实验
以下介绍的是标记 10pmol 高比活度的寡核苷酸的反应，标记不同量的寡核苷酸可以通过增加或减少反应体积而保持各组分的相应浓度来实现。也可用类似的反应条件，将非放射性的磷酸加到用于定点突变的合成寡核苷酸 5'末端。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。试剂、试剂盒T4噬菌
寡核苷酸5末端磷酸化实验
试剂、试剂盒 T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液Tris-ClT4噬菌体多核苷酸激酶寡核苷酸[γ-32P]ATP仪器、耗材 微量离心管水浴箱实验步骤 材料缓冲液与溶液稀释贮存液至适当浓度10XT4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液Tris-Cl(1mol/L,pH8.0)酶和缓冲液T4噬菌体多核苷酸激酶野生型T4噬
寡核苷酸5末端磷酸化实验
试剂、试剂盒 T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液 Tris-Cl T4噬菌体多核苷酸激酶 寡核苷酸 [γ-32P]ATP
用随机寡核苷酸延伸法进行扣除cDNA探针的放射性标记
实验方法原理 此方案中 cDNA 的合成是在 4 种饱和浓度的 dNTP 及一种痕量的放射性标记的 dNTP 中进行的。扣除杂交后，在大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ的 Klenow 片段作用下，富集的单链 cDNA 通过随机寡核苷酸引物延伸的二次合成反应，标记成高比活性的探针。由 于第一轮反应中
用随机寡核苷酸延伸法进行扣除cDNA探针的放射性标记
此方案中 cDNA 的合成是在 4 种饱和浓度的 dNTP 及一种痕量的放射性标记的 dNTP 中进行的。扣除杂交后，在大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ的 Klenow 片段作用下，富集的单链 cDNA 通过随机寡核苷酸引物延伸的二次合成反应，标记成高比活性的探针。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培
用随机寡核苷酸延伸法进行扣除cDNA探针的放射性标记
实验方法原理 此方案中 cDNA 的合成是在 4 种饱和浓度的 dNTP 及一种痕量的放射性标记的 dNTP 中进行的。扣除杂交后，在大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ的 Klenow 片段作用下，富集的单链 cDNA 通过随机寡核苷酸引物延伸的
用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验
试剂、试剂盒丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵NNN'N'-四甲基乙二胺合成的互补寡核苷酸仲丁醇（2-丁醇)二乙醚NaOAcMgCl2乙醇TBE甲酰胺加样缓冲液TE仪器、耗材SpeedVac 旋转浓缩仪实验步骤材料与设备丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵（10%;w/v)N,N,N'
用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验
用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验 试剂、试剂盒 丙烯酰胺 双丙烯酰胺 尿素
用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵 NNN'N'-四甲基乙二胺合成的互补寡核苷酸仲丁醇（2-丁醇)二乙醚 NaOAcMgCl2 乙醇TBE 甲酰胺加样缓冲液 TE仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩仪实验步骤 材料与设备丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵（10%;w/v)N,
吸附法纯化病毒实验
实验方法原理 实验材料 待纯化的病毒试剂、试剂盒 凝胶材料仪器、耗材 烧杯实验步骤 磷酸钙凝胶：这是病毒凝胶吸附法中较为常用的凝胶，由 0. 5 mol/L CaCl2 和 0. 5mol/L Na2HPO4 溶液混合制备凝胶状沉淀物，用 0. 001mol/L 磷酸盐缓冲液悬浮，置千 4℃ 4~5
蔗糖梯度纯化法实验
实验材料：染色质粗品试剂、试剂盒：聚碳酸酯离心管仪器、耗材：Dounce 匀浆器实验步骤：准备两种 18ml，浓度分别为 20% 和 60% 的蔗糖分离缓冲液（聚胺，水相或己二醇法的缓冲液），然后以线性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯离心管中，用梯度生成器形成沿离心管的密度梯度。2. 将染色质粗品
吸附法纯化病毒实验_凝胶吸附法
实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒凝胶材料仪器、耗材烧杯实验步骤磷酸钙凝胶：这是病毒凝胶吸附法中较为常用的凝胶，由 0. 5 mol/L CaCl2 和 0. 5mol/L Na2HPO4 溶液混合制备凝胶状沉淀物，用 0. 001mol/L 磷酸盐缓冲液悬浮，置千 4℃ 4~5小时使之充分沉淀后应用
微生物大小的测定实验——显微法
实验方法原理镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片。一般将1 mm 等分为100格（或2 mm等分为200格），每格长度等于0.01 mm（即106 μm）。是专用于校正目镜测微尺每格长度的。目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，有等分50小格或100小格两种
用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验
实验方法原理 试剂、试剂盒 甲酸铵寡核苷酸杂交溶液寡核苷酸预杂交液TE噬菌体T4多核苷酸激酶限制性内切核酸酶琼脂糖凝胶诱变寡核苷酸[γ-32P]ATP2XYT 顶层琼脂和 2xYT 琼脂平皿仪器、耗材 钝端镊子皮下注射用针头（18 号）和印度墨水孵箱硝酸纤维素膜或尼龙膜真空烤箱68°C 水浴What
用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验
实验方法原理 试剂、试剂盒 甲酸铵 寡核苷酸杂交溶液 寡核苷酸预杂交液 TE 噬菌体T4多核
用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验
本方案主要描述了筛选噬菌体 M13 重组克隆，而一种选择方案是筛选含噬菌粒的细菌克隆。最后也介绍了用 PCR 检测突变体的方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验方法原理试剂、试剂盒甲酸铵寡核苷酸杂交溶液寡核苷酸预杂交液TE噬菌体T4多核
DNA纯化实验——PCR清洁试剂盒纯化法
实验方法原理硅胶膜可在高盐条件下结合DNA，又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性，所以被分离开来。 实验材料PCR产物试剂、试剂盒PCR清洁试剂盒仪器、耗材96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板实验步骤一
吸附法纯化病毒实验——红细胞吸附法
实验方法原理用于某些可与红细胞吸附的病毒的浓缩，如正粘病毒和副粘病毒，由于红细胞吸附法是特异的，故可达到浓缩并纯化的目的。实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液鸡红细胞悬液仪器、耗材烧杯水浴锅实验步骤用作吸附病毒的红细胞一般选择适宜动物的红细胞，常用的是鸡红细胞。基本步骤为：① 1%~3% 鸡