蛋白质在哺乳动物细胞中表达实验
实验材料载体（如 CDM 8）实验步骤1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组 DNA 。用小量法（5 ml 培养液）或用 CsCl／溴化乙锭离心法纯化重组 DNA。2. 在转染的前一天，将 COS-7 细胞以约 20% 汇片的数量种入含 DMEM-2 CS 培养基的 100 mm 培养皿（这样在第二天细胞可长至约 50% 汇片）。让细胞生长过夜至约50% 汇片。3. 使用前（对每一个待转染的 100 mm 培养皿中的 COS 细胞），将 5 ml 37℃ 的 DMEM-2 NS 培养液与 0.2 ml DEAE-葡聚糖/氯喹溶液彻底混匀，再加入 5~10 重组 DNA 混匀。4. 吸出 COS 细胞的培养液，向每一个 100 mm 培养皿加入步骤 3 制备的 DMEM-2 CS／DEAE-葡聚糖／DNA。温育细胞 3~4 h。用差相显微镜观察细胞。DEAE-葡聚糖将引起细胞收缩并变得空泡化。长时间的孵育可提高转染效率......阅读全文
蛋白质在哺乳动物细胞中表达实验
实验材料载体（如 CDM 8）实验步骤1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组 DNA 。用小量法（5 ml 培养液）或用 CsCl／溴化乙锭离心法纯化重组 DNA。2. 在转染的前一天，将 COS-7 细胞以约 20% 汇片的数量种入含 DMEM-2 CS 培养基的 100 mm 培养皿
蛋白质在哺乳动物细胞中表达实验
实验方法原理 实验材料 载体（如 CDM 8）实验步骤 1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组 DNA 。用小量法（5 ml 培养液）或用 CsCl／溴化乙锭离心法纯化重组 DNA。2. 在转染的前一天，将 COS-7 细胞以约 20% 汇片的数量种入含 DMEM-2 CS 培养基的 1
蛋白质在哺乳动物细胞中表达实验
基本方案 用COS细胞瞬时表达 实验方法原理 实验材料 载体（如 CD
哺乳动物细胞真核表达产物接近天然高等生物蛋白质分子
哺乳动物细胞真核表达系统在表达过程中有翻译后修饰和折叠的功能，这一特点使其蛋白更接近天然蛋白，具备天然蛋白必须的空间结构和修饰，与天然蛋白有相同的生物活性，哺乳动物细胞表达系统在功能蛋白、抗体生产、临床疫苗的研发和生产中应用较为广泛。 原核表达系统具有表达水平高、操作简单、周期短、易于大规模高密
实用哺乳动物细胞培养手册（中）
细胞培养环境1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响， 要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌 操作区设在室内较少走动的内侧，常规
实用哺乳动物细胞培养手册（中）
细胞培养环境 1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响， 要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌 操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作
实用哺乳动物细胞培养手册（中）
细胞培养环境1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响， 要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌 操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于
蛋白质在原核生物中的表达
实验概要将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择
哺乳动物细胞基因稳定转染的实验
分析基因的功能常需要形成含有稳定整合了该基因的哺乳动物细胞系。在转染中大约有1/104细胞将稳定整合外源因而可用一显性（正向）选择标记来分离稳定的转化细胞。用可高效转染的细胞系来确保转染成功。另外，应包括合适的对照以确定目的基因无细胞毒性。实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒完全培养液仪器、耗材培养箱离
哺乳动物细胞基因稳定转染的实验
基本方案 实验材料 哺乳动物细胞 试剂、试剂盒
哺乳动物细胞基因稳定转染的实验
实验材料 哺乳动物细胞试剂、试剂盒 完全培养液仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 确定所要转染的细抱系能呈独立集落生长。对于贴壁细胞，在10 cm 组织培养培养皿中接种约100个细胞，培养10~12天，毎4天换液1次。亚甲蓝染色后对成活的细胞集落进行计数。 2. 确定母代细胞的选择条件：将一
哺乳动物细胞体外剪接分析实验
实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。
哺乳动物细胞体外剪接分析实验
剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S10
哺乳动物细胞体外剪接分析实验
实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。实验材料 前体 mRNA 底物试剂、试剂盒 ATP CP 混合物HEPES-KOH聚乙烯醇
哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定实验
实验材料 用感兴趣的 DNA 转染的哺乳动物培养细胞试剂、试剂盒 细胞裂解缓冲液荧光素酶测定缓冲液荧光素溶液不含钙盐和镁盐的磷酸盐缓冲液仪器、耗材 荧光光度计和光度计测置管橡胶棒实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液稀释到适当浓度。细胞裂解缓冲液25 mmol/L 双甘氨肽（pH7.8)15 mmol/L
哺乳动物细胞真核表达系统为科学研究提供助力
哺乳动物细胞真核表达系统是哺乳动物细胞经过翻译和再加工后产生的外源蛋白，在活性上远优于原核表达系统和酵母、昆虫细胞等真核表达系统，更接近天然蛋白。哺乳动物细胞表达系统可以提供较接近自然状态的重组人蛋白的翻译后修饰。在蛋白质表达过程中，会形成接近天然蛋白质的蛋白质折叠和聚合，具有活性蛋白质所必需的
哺乳动物细胞实验室的构建方案
一、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，为10万
哺乳动物细胞实验室的构建方案
一、实验室设计细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，为10万级洁净
哺乳动物细胞真核表达系统的优势有人想知道吗
哺乳动物细胞真核表达系统则是通过脂质体或者是PEI的等转染试剂在体外通过和质粒形成复合体， 将质粒导入细胞后进行瞬时表达。称为瞬时表达的原因是因为质粒在真核细胞中不能扩增。并且不断被细胞所降解，这种表达在一定的时间后就会消失。除非质粒被整合进入细胞的基因组，通过质粒上带的筛选标记，通过筛选得到
哺乳动物细胞的实验室的培养器皿
常用细胞培养器皿有培养瓶、培养板、培养皿等。常准备量是使用量的三倍。器 皿应选择透明度好、无毒、利于细胞粘附和生长的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品 或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面几种。 （1）液体储存瓶：用于储存各种配制好的培养液、血清等液体，常用规格有500ml、250ml、
蛋白质的短暂表达实验
实验材料 载体试剂、试剂盒 牛血清DMEM葡聚糖PBSDMSOEDTA仪器、耗材 培养皿培养箱相差显微镜离心机实验步骤1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组DNA，用小量法（5 ml 培养物）或用CsCl/溴化乙锭离心法纯化重组DNA。2. 将在DMEM-10 CS中生长汇片的COS
蛋白质的短暂表达实验
基本方案 实验材料 载体 试剂、试剂盒
蛋白质的短暂表达实验
实验材料载体试剂、试剂盒牛血清DMEM葡聚糖PBSDMSOEDTA仪器、耗材培养皿培养箱相差显微镜离心机实验步骤1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组DNA，用小量法（5 ml 培养物）或用CsCl/溴化乙锭离心法纯化重组DNA。2. 将在DMEM-10 CS中生长汇片的COS-7细
蛋白质的短暂表达实验
基本方案 实验材料 载体 试剂、试剂盒
纯化DNA实验_从哺乳动物细胞或组织分离DNA
基因纯化，可以用于（1）对大量提取的质粒DNA进行纯化；（2）常用的方法有柱层析法和氯化铯梯度离心法。实验材料细胞试剂、试剂盒TBS抽提缓冲液仪器、耗材离心管实验步骤1. 根据样品类型，从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤
哺乳动物细胞的实验室设计和常用设施
实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒
哺乳动物细胞的生物特征
哺乳动物是全身被毛,运动快速,恒温,胎生和哺乳的脊椎动物.它是脊椎动物中躯体结构,功能和行为最复杂的一个高等动物类群.鸟类和哺乳类都是从爬行动物起源的,它们分别以不同的方式适应陆栖生活所遇到的许多基本矛盾(陆地上快速运动,防止体内水分蒸发,完善的神经系统和繁殖方式),并在新陈代谢水平全面提高的基
哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定
哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定实验 实验方法原理 萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶，
哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定
单细胞凝胶电泳实验可应用于： （1）快速检测单细胞DNA损伤； (2)遗传毒性生物监测; (3)确定精子细胞中DNA片段化的程度。实验方法原理萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶，同时在所有的化学发光反应中，它的光产物具有最高的量子效
哺乳动物细胞瞬时基因转移法制备重组蛋白实验
一、转染方法对于脂质体转染 (Upofection), 可以从商业途径获得许多配方，这些配方都具有单一的ZL化组分，而且毫无疑问，它们中的大部分都能非常有效地将质粒 D N A 转 人 细 胞 。其缺点是价格不菲—- 在使用这些试剂时，对于超出数百毫升规模的瞬时转染，经济上是不可行的。大