融合蛋白化学降解实验——用溴化氰
实验材料1 mg ml 融合蛋白试剂、试剂盒50 mg ml CNBr70%（V V）甲酸1 × SDS 样品缓冲液实验步骤1. 进行预试验以确定最短温育反应时间。冻干两小份各 50 μl 的融合蛋白溶液，将其中一份重悬于 50 μl 50 mg/ml CNBr / 70% 甲酸中，另一份重悬于 50 μl 不含 CNBr 的 70% 甲酸中，室温下反应。2. 在 0、8、24 及 48 h 的时刻，各取 5 μl 并冻干。3. 往所有冻干样本加 20 μl 1 × SDS 样品缓冲液，煮沸 10 min，加样于 SDS-聚丙烯酰胺凝胶。4. 分析凝胶电泳结果以确定完全裂解蛋白质所需的最短温育反应时间。展开 注意事项1. CNBr 有剧毒，须在通风橱中操作，使用及弃置均应小心谨慎。2. 当蛋白质对 CNBr 的裂解有抗性时或当待裂解的为不溶性融合蛋白时，可在反应中加入盐酸胍至终浓度为 6 mol/L。......阅读全文
融合蛋白化学降解实验——－用溴化氰
实验材料1 mg ml 融合蛋白试剂、试剂盒50 mg ml CNBr70%（V V）甲酸1 × SDS 样品缓冲液实验步骤1. 进行预试验以确定最短温育反应时间。冻干两小份各 50 μl 的融合蛋白溶液，将其中一份重悬于 50 μl 50 mg/ml CNBr / 70% 甲酸中，另一份重悬于 5
融合蛋白化学降解实验
基本方案 备选方案1 备选方案2 实验材料 融合蛋白
融合蛋白化学降解实验
实验材料 融合蛋白试剂、试剂盒 CNBr甲酸SDS仪器、耗材 离心机分光光度计水浴锅实验步骤 1. 进行预试验以确定最短温育反应时间。冻干两小份50 μl 的融合蛋白溶液，将其中一份重悬于5050 μl 50 mg/ml CNBr/甲酸中，另一份重悬于50 μl 含CNBr 的70%甲酸中，室温下
融合蛋白化学降解实验
基本方案 用溴化氰 实验方法原理 实验材料 1 mg ml 融合蛋白
融合蛋白化学降解实验3
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒天冬氨酸脯氨酸甲酸乙酸盐酸胍仪器、耗材电泳仪离心机水浴锅实验步骤1. 进行预实验确定最佳的水解条件。准备四个反应混合物：（1）反应1：20 μg 溶解在70%甲酸中的融合蛋白。（2）反应2：20 μg 溶解在70%甲酸/6 mol/l 盐酸胍中的融合蛋白。（3）反应3：
融合蛋白化学降解实验1
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒CNBr甲酸SDS仪器、耗材离心机分光光度计水浴锅实验步骤1. 进行预试验以确定最短温育反应时间。冻干两小份50 μl 的融合蛋白溶液，将其中一份重悬于5050 μl 50 mg/ml CNBr/甲酸中，另一份重悬于50 μl 含CNBr 的70%甲酸中，室温下反应。2
融合蛋白化学降解实验2
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒Tris·ClNaCl盐酸胍羟胺裂解缓冲液SDS仪器、耗材离心机水浴锅培养箱实验步骤1. 进行预试验以确定最短保温反应时间。将50 μl 1 mg/ml 融合蛋白与50 μl 2×羟胺裂解缓冲液混合在1.5 ml 微量离心管中，45℃温育反应。 2. 在0、2、4、
钙调蛋白的溴化氰裂解实验
试剂、试剂盒甲酸纯的钙调蛋白溴化氰乙腈实验步骤材料甲酸（市售最髙级（如AldrichChemicalCo.，Inc.)纯的钙调蛋白（干粉；无盐（0.1~1 mg)溴化氰（CNBr)(晶体）（如AldrichChemicalCo.，Inc.)乙腈（如Burdick&Jackson或J,T.Baker)
钙调蛋白的溴化氰裂解实验
钙调蛋白的溴化氰裂解实验 试剂、试剂盒 甲酸 纯的钙调蛋白 溴化氰
钙调蛋白的溴化氰裂解实验
试剂、试剂盒 甲酸纯的钙调蛋白 溴化氰乙腈实验步骤 材料甲酸（市售最髙级（如AldrichChemicalCo.，Inc.)纯的钙调蛋白（干粉；无盐（0.1~1 mg)溴化氰（CNBr)(晶体）（如AldrichChemicalCo.，Inc.)乙腈（如Burdick&Jackson或J,T.Bak
方案6－用溴化氰切割－MetX－键实验
实验材料冻干的蛋白质试剂、试剂盒溴化氢甲酸β-巯基乙醇NH4HCO3次氯酸钠溶液仪器、耗材通风厨浓缩器小离心管氮气实验步骤一、还原1.将蛋白质溶解在 0.2mol/L 碳酸氢铵中，终浓度为 10~20mg/mL。2.加人β-巯基乙醇，其浓度在 1%~5% 之间（体积分数）。3.在溶液上方吹扫氮气以置
蛋白共沉淀检测实验_备择－用GST融合蛋白
实验材料全细胞抽提物试剂、试剂盒谷胱甘肽-琼脂糖或者谷胱甘肽-琼脂糖浆抗体免疫共沉淀缓冲液氯化钠蛋白 A G-琼脂糖浆2 × 样品缓冲液（用于 SDS-PAGE 胶）仪器、耗材20 ml 注射器和 18-G 针头汉密尔顿注射器实验步骤1. 按照蛋白 A/G-琼脂糖浆所述的方式准备两份样本（见「用蛋白
融合蛋白酶解实验_－用－Xa－因子
使用基因融合表达系统在大肠杆菌中表达外源基因已越来越受欢迎。其原因在很大程度上归因于融合系统能够产生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽转移酶以及硫氧还蛋白均被证实能非常成功地生产正确折叠、有生物活性的蛋白质。其中每一种都备有方便的纯化方法，可将融合蛋白与细胞污染物分开。所产生的蛋白质适用于进行其生物学
用－GST－融合蛋白检测蛋白质蛋白质相互作用实验
GST 融合蛋白作为在细菌中表达的重组蛋白，从它们被介绍以来，已用于成千上万个研究项目中（Smith and johnson 1988)。它们常常被用于制备抗体，这些抗体可用于研究蛋白质-蛋白质相互作用以及分析生化反应。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W
用－GST－融合蛋白检测蛋白质蛋白质相互作用实验
实验材料 结合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 试剂、试剂盒 碱性缓冲液 封闭缓冲液 相
用－GST－融合蛋白检测蛋白质蛋白质相互作用实验
实验材料 结合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白试剂、试剂盒 碱性缓冲液 封闭缓冲液 相互作用缓冲液PK 缓冲液还原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中洗涤缓冲液 1 洗涤缓冲液 2蛋白酶蛋白激酶 A[y-32P]ATP仪器、耗材 与待筛选蛋白结合的膜或滤膜Sephadex G-50 转柱实验步骤 材
GST－融合蛋白沉降实验
实验材料 细胞裂解液其中蛋白质 35S 用标记试剂、试剂盒 裂解缓冲液SDS 聚丙烯酰胺凝胶探针GST 蛋白仪器、耗材 沸水浴翻转祥品旋转仪谷胱甘肽琼脂糖球珠实验步骤 材料缓冲液和溶液将缓冲液稀释到适当浓度。裂解缓冲液20 mmol/LTris-Cl(pH8.0)200 mml/L NaCl1 mm
GST－融合蛋白沉降实验
GST 沉降实验与 far western(方案 2) 相比有—个优点：探针蛋白是在更自然的环境下与可能的搭档蛋白孵育，因而增强了相互作用的有效性。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料细胞裂解液其中蛋白质 35S 用标记试剂、试剂盒裂解
GST－融合蛋白沉降实验
实验材料 细胞裂解液 其中蛋白质 35S 用标记 试剂、试剂盒 裂解缓冲液 SDS 聚丙烯酰胺凝胶
蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒琼脂糖 4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸钠-乙酸磷酸二氢钾仪器、耗材天平烧瓶螺旋搅拌器布氏漏斗实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」1. 制备 CNBr-活化的琼脂糖 4B以下步骤必须在通风橱中小心进行。用 3 mol/L NaOH 将琼脂糖 4B 悬液调整为 p
蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 蛋白质
蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合实验
实验方法原理 实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 琼脂糖 4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸钠-乙酸磷酸二氢钾仪器、耗材 天平烧瓶螺旋搅拌器布氏漏斗实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」1. 制备 CNBr-活化的琼脂糖 4B以下步骤必须在通风橱中小心进行。用 3 mol/L NaOH 将琼
融合蛋白的酶解实验
基本方案 辅助方案 备选方案1 辅助方案 备选方案2 备选方案3 实验材料 融合蛋白
融合蛋白的酶解实验
实验材料 融合蛋白试剂、试剂盒 SDS仪器、耗材 水浴锅培养箱离心机实验步骤 1. 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间： （1）反应1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室温下反应（2）反应2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（
基因置换实验——构建融合蛋白
实验材料菌株BY4741质粒PDB118试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液仪器、耗材YPD 平板YPD 液体培养基血球计数板SC-his平板实验步骤YPD 平板 第 1 天将菌株 7-3 在 YPD 平板上划单克隆，30°C 下培养两天。第 3 天挑取单克隆，在 5 mlYPD 液体培养基中培养，30°C 过
融合蛋白的酶解实验1
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒SDS仪器、耗材水浴锅培养箱离心机实验步骤1. 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间： （1）反应1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室温下反应（2）反应2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（模拟消化
融合蛋白的免疫筛选实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 LB顶层琼脂糖叠氮钠第一抗体仪器、耗材 硝酸纤维素滤膜实验步骤 1. 在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文库的滴度，宿主菌为大肠杆菌LE392菌株，每个平板使用7 ml 1%LB顶层琼脂。2. 选择适当的滴度铺平板，于37℃温育8 h。 3.
融合蛋白的酶解实验6
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒SDSCaCl2重组牛肠激酶仪器、耗材水浴锅培养箱离心机实验步骤1. 做预试验监测肠激酶与融合蛋白按不同比例混合后的裂解效率，准备5个反应体系： （1）反应1至4：20 μl 融合蛋白；0.2 U、0.5 U、1 U和2 U的rEK，加50 mmol/l Tris·Cl
GST融合蛋白的亲和纯化实验
实验方法原理 琼脂糖颗粒和诱饵蛋白复合体在洗涤时并不会损失而且所有反应都含有等量的诱饵蛋白。为了证明在洗涤期间没有任何材料损失，应使用 1/10 的 GST 融合体加样做平行 SDS-PAGE 凝胶电泳并染色以便更确切地比较 GST 融合体蛋白带。另外，融合蛋白的降解可能导致诱饵蛋白的量减少
GST融合蛋白的亲和纯化实验
GST 共结合纯化法 实验方法原理 琼脂糖颗粒和诱饵蛋白复合体在洗涤时并不会损失而且所有反应都含有等量的诱饵蛋白。为了证明在洗涤期间没有任何材料损失，应使用