细胞周期测定实验——BrdU渗入法
实验方法原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法,但它不能代表细胞群体的周期,故现多采用其他方法测群体周期。 BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后,可做为细胞DNA复制的原料,经过两个细胞周期后,细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2,反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期,则染色体中约一半为两条单体均浅染,另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期,则两条单体均深染。计分裂相中各期比例,就可算出细胞周期的值。实验材料细胞试剂、试剂盒BrdU甲醇冰醋酸Giemsa染液秋水仙素SSC柠檬酸三钠NaCl仪器、耗材冰箱玻片水浴锅锅盖紫外灯光学显微镜实验步骤一、试剂配制1. BrdU配制BrdU 10 mg加双蒸水10 ml ,4℃下避光保存。2. 2x......阅读全文
尿钠的测定实验_比浊法
尿钠(Na)是指测定24小时尿液中钠离子的浓度可以用于测定衡量个体每日钠摄入量。实验方法原理用无水乙醇沉淀尿中蛋白,获得无蛋白尿滤液,再将其与焦性锑酸钾作用生成焦性锑酸钠沉淀。最后与标准管比较求得尿钠的含量,其反应式如下:Nacl+K[Sb(OH)6]→Na[Sb(OH)6]+KCl实验材料尿液试剂
脲酶的测定实验——pH-稳定计法
实验材料脲酶试剂、试剂盒脲HCl仪器、耗材pH 稳定计实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」9 ml 0.2 mol/L 脲0.2 ml 脲酶自动滴定管充满 0.1 mol/L HCl,通过 pH 稳定计使得 pH 保持在 6.1,大约每 10 min 记录一次通过自动滴定管每次滴定的体积。注意事项
(HicN)法血红蛋白测定实验
实验方法原理 血液在血红蛋白转化液中溶血后,除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白(Hi),再与CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白HicN)。HicN最大吸收峰540nm,最小吸收波谷504nm,在特定的条件下,毫摩尔消光系数为44L·.mmol-1·cm-1,因此根据标本的
(HicN)法血红蛋白测定实验
实验方法原理Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白(Hi),再与氰离子(CN)结合,生成稳定的氰化高铁血红蛋白(HiCN)。HiCN最大吸收峰在540 nm处,在特定条件下毫摩尔吸光系数为44 000(mmol·cm),根据吸光度即可求出血红蛋白浓度(g/L)。实验材料血液样品试剂、试剂盒Prabkin
尿钠的测定实验——比浊法
尿钠(Na)是指测定24小时尿液中钠离子的浓度可以用于测定衡量个体每日钠摄入量。实验方法原理用无水乙醇沉淀尿中蛋白,获得无蛋白尿滤液,再将其与焦性锑酸钾作用生成焦性锑酸钠沉淀。最后与标准管比较求得尿钠的含量,其反应式如下:NaCl+K[Sb(OH)6]→Na[Sb(OH)6]+KCl实验材料尿液试剂
α-萘胺法植物根系活力测定实验
实验方法原理吸附在根表面的α-萘胺会被植物根所氧化,生成红色的2-羟基-1-萘胺沉淀于具有氧化力的根表,使这部分根染成红色。根对α-萘胺的氧化力与其呼吸强度,主要是与呼吸酶过氧化物酶活性有着密切关系,据认为α-萘胺氧化过程是在过氧化物酶的催化下进行的,该酶的活力愈强,对α-萘胺的氧化力就愈强,染色也
α-萘胺法植物根系活力测定实验
实验方法原理 吸附在根表面的α-萘胺会被植物根所氧化,生成红色的2-羟基-1-萘胺沉淀于具有氧化力的根表,使这部分根染成红色。根对α-萘胺的氧化力与其呼吸强度,主要是与呼吸酶过氧化物酶活性有着密切关系,据认为α-萘胺氧化过程是在过氧化物酶的催化下进行的,该酶的活力愈强,对α-萘胺的氧化力就愈强,染色
α-萘胺法植物根系活力测定实验
实验方法原理吸附在根表面的α-萘胺会被植物根所氧化,生成红色的2-羟基-1-萘胺沉淀于具有氧化力的根表,使这部分根染成红色。根对α-萘胺的氧化力与其呼吸强度,主要是与呼吸酶过氧化物酶活性有着密切关系,据认为α-萘胺氧化过程是在过氧化物酶的催化下进行的,该酶的活力愈强,对α-萘胺的氧化力就愈强,染色也
植物组织小液流法水势测定实验
实验材料小麦玉米甘蓝棉花叶片马铃薯块茎甜菜块根试剂、试剂盒CaCl2溶液亚甲蓝粉末仪器、耗材试管架解剖针指形试管具塞刻度试管移液管毛细滴管实验步骤一、材料与设备材料:小麦、玉米、甘蓝、棉花叶片或马铃薯块茎、甜菜块根每组:10 ml 指形试管7支、10ml具塞刻度试管7支、5 ml 移液管1支、10
蛋白质含量测定实验——Bradford法
蛋白质含量测定实验可以用于:(1)测定蛋白质浓度;(2)检测所提取的蛋白质含量。实验材料蛋白质试剂、试剂盒牛血清NaCl考马斯亮蓝仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 分别在两组微量离心管中各加入0.5 mg/ml 牛血清白蛋白,以 0.15 mmol/l NaCl补足至100 ul,同时以两管
植物组织小液流法水势测定实验
实验材料小麦 玉米 甘蓝
植物组织小液流法水势测定实验
实验材料 小麦玉米甘蓝棉花叶片马铃薯块茎甜菜块根试剂、试剂盒 CaCl2溶液亚甲蓝粉末仪器、耗材 试管架解剖针指形试管具塞刻度试管移液管毛细滴管实验步骤 一、材料与设备材料:小麦、玉米、甘蓝、棉花叶片或马铃薯块茎、甜菜块根每组:10 ml 指形试管7支、10ml具塞刻度试管7支、5 ml 移液管1
核酸的定量测定实验——二苯胺法
实验方法原理DNA 分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解, 产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊醛, 后者与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物, 其反应为: 蓝色化合物在595 nm 处有最大吸收峰, 且DNA 在40~400 μg 范围内时, 光密度与DNA 浓度呈正比。在反应液中加入少量乙
流式细胞周期结果怎么分析
细胞周期至少有两种做法,最常见的如下图分析:这个是BrdU和7-AAD方法检测细胞周期。红色的gate就是G1期,绿色的就是S期,橙色的就是G2/M期。BrdU, PI, 或者EdU方法和这个一样分析如果单用PI等DNA染料染色,需要专业软件来分析计算了。比如这个图,是DNA染料单染,其中粉色部分是
细胞周期蛋白在细胞周期分析实验中的作用是什么?
细胞周期蛋白在细胞周期分析实验中具有以下重要作用:作为细胞周期阶段的标志物:不同的细胞周期蛋白在细胞周期的特定阶段表达,其表达水平的变化可以指示细胞所处的周期阶段。例如,Cyclin D 在 G1 早期开始表达,Cyclin E 在 G1 晚期升高,Cyclin A 在 S 期和 G2 期表达增加,
10大化学污染渗入生活
事实上,我们每天的吃穿住用行都可能在与有毒物质、化学污染“亲密接触”,长期忽视将威胁健康。那么,我们到底该如何将这些生活必需品安全地利用起来呢? 1.家居装饰材料。北京化工大学理学院教授许家喜指出,家居装饰材料中的人工板材多采用锯末刨花板,含大量酚醛树脂,易挥发苯酚和甲醛等致癌物。一些涂料中会
如何利用酶标仪进行细胞增殖与活力测定
酶标仪在细胞生物学与药物筛选方面有着非常高的使用频率,而在各种细胞检测实验中,细胞增殖能力的检测是最为常见也是最基础的检测之一。 ●为什么要检测细胞状态呢? 细胞状态是直接反应细胞生理状态的重要指标,通过监测细胞在各种化合物刺激作用下的反应状态,从而确定测试分子是否对细胞增殖有影
细胞动力学参数检测
细胞增殖活性的检测 用增殖的细胞核抗原(PCNA)检测细胞增殖活性 用Ki-67检测细胞增殖活性 用CD71检测细胞增殖活性 用BrdU单克隆抗体检测细胞增殖活性 细胞周期素的检测
细胞动力学参数检测
细胞增殖活性的检测 用增殖的细胞核抗原(PCNA)检测细胞增殖活性 用Ki-67检测细胞增殖活性 用CD71检测细胞增殖活性 用BrdU单克隆抗体检测细胞增殖活性 细胞周期素的检测
BrdU检测丁细胞和B细胞增殖
基本方案材 料实验动物0.8m g / m l B r d U (Sigma) 水 溶 液(口 服用)或 4m g / m l B r d U P B S 溶 液(注射用)P B S , p H 7. 40.15mo l / L 冰冷的 NaCl冰 冷 的 9 5 % 乙醇多聚甲醛固定液D N A
Protocol-for-Dual-Pulse-Labeling-Using-EdU-and-BrdU-Incorporation
实验概要The measurement of cell proliferation is fundamental to the assessment of cell health, genotoxicity, and drug efficacy. Proliferation is traditi
BrdU标记法检测细胞增殖的原理
细胞增殖能力是测定物质毒性、评估药物安全、评价细胞活力的重要指标之一,被广泛应用于分子生物学、肿瘤生物学、免疫学和大规模药物筛选等研究领域。目前检测细胞增殖能力的方法主要分为两类:一类是直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞增殖能力,如Ki67、BrdU以及EdU细胞增殖检测等;一类是通过测定活性细胞数
考马斯亮兰法(Bradford法)测定蛋白浓度实验原理
双缩脲法(Biuret法)和Folin―酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到
细胞活性检测的多种方法应用
做细胞实验的亲们,经常需要对细胞的活性进行验证,如何知道自己研究的细胞是否还活着,活性怎么样? PCR、抗体IHC染色等细胞分析方法进行活性检测,由于只能反映某个时间点的细胞行为而具有局限性。当传统细胞分析方法无法获得预期结果时,使用实时细胞分析方法通常会得到很多新的生物学发现,因此活细胞分析技
细胞增殖新的工具以确定细胞分裂
细胞增殖,可能会发生许多刺激如细胞因子的曝光或多种其他进程。BD有一个新的产品,以帮助研究人员研究细胞增殖。空?紫扩散染料450,用于检测细胞的增殖与紫色激光,这有利于使用较大的面板。这使得更多的数据从有限样本使用多色流式细胞仪测定。 VPD450是一个非荧光酯化染料。酯基使染料进入细胞。一旦染
人淋巴细胞姐妹染色体区分染色
实验概要人淋巴细胞姐妹染色体区分染色实验原理姐妹染色体在正常情况下化学组成及结构都是一致的,因此不能用单纯染色方法将之区别开来。 1973年Latt发现让细胞在含Brdu的培养基中培养了2个细胞周期,再以Hoechst33258染色后,两条姐妹染色单体就出现了色差,这就是姐妹染色但提到区分
细胞培养的基本方法(二)
第四节 细胞计数及活力测定一、原理 培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞一般也要检查活力,以了解分
细胞周期检测方法即PI法的操作步骤
1. 细胞培养:取对数生长期的细胞,按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内,进行所需的处理(比如加入药物),特定时间后终止培养,进行下一步的实验。2. 细胞固定: 800rpm离心5min,收集细胞沉淀,弃上清,用预冷PBS洗涤两次,加入预冷75%乙醇,于4℃固定4
乙酸丙酮法血清甘油三酯测定实验
实验方法原理本法用异丙醇抽提血清TG,氧化铝吸附磷脂及游离甘油氢氧化钾皂化,过碘酸钠氧化生成甲醛,甲醛与乙酸丙酮在氨离子存在下加热生成黄色的 3,5二乙酰-1,4二甲基吡啶〔Hantgsch止反应)显色程度与标本中TG浓度成正比。实验步骤一、实验试剂:1. 异丙醇(分析试剂)2. 氧化铝(中性、层分
谷胱甘肽的测定实验——双抗夹心ELISA法
以及含量;(2)谷胱甘肽具有广谱解毒作用,不仅可用于药物,更可作为功能性食品的基料,在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用实验方法原理先将康体包被于反应板上,加入待测抗原,然后再加入酶标康体,显色后即可测得抗原含量。实验材料抗体试剂、试剂盒碳酸盐缓冲液Na2CO3磷酸盐缓冲液NaClKC