细胞周期测定实验——BrdU渗入法
实验方法原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法,但它不能代表细胞群体的周期,故现多采用其他方法测群体周期。 BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后,可做为细胞DNA复制的原料,经过两个细胞周期后,细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2,反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期,则染色体中约一半为两条单体均浅染,另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期,则两条单体均深染。计分裂相中各期比例,就可算出细胞周期的值。实验材料细胞试剂、试剂盒BrdU甲醇冰醋酸Giemsa染液秋水仙素SSC柠檬酸三钠NaCl仪器、耗材冰箱玻片水浴锅锅盖紫外灯光学显微镜实验步骤一、试剂配制1. BrdU配制BrdU 10 mg加双蒸水10 ml ,4℃下避光保存。2. 2x......阅读全文
细胞增殖的检验方法:BrdU标记法
BrdU标记法1.细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4% FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0期。2.终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。3.弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。4.甲醇/醋
细胞生长的检查方法(一)
1.直接计数法是zui简单的检测细胞生长的方法。计数细胞一般利用台盼蓝(锥虫蓝染色,台盼蓝(锥虫蓝)不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高,可使染料进入细胞内而使细胞着色。因此,镜下未染色细胞认为是活细胞,而染色细胞认为是死亡细胞。经典的细胞计数常用到血细胞计数
实验室元素测定分析方法稀释法
这个方法实质上是标准加入法的另一种形式。设标准溶液的浓度为Cs,测得的吸收值为As。现往一份体积为Vs的标准溶液中加入浓度为Cx的样品溶液Vs,测得混合物的吸收信号为Am,则Cx可按下式求得:若两次测量都很准确,则这一方法是快速而易行的实用方法。这个方法需用的样品溶液的体积比标准加入法少,因为无需单
谷胱甘肽的测定实验——双抗夹心ELISA法
以及含量;(2)谷胱甘肽具有广谱解毒作用,不仅可用于药物,更可作为功能性食品的基料,在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用实验方法原理先将康体包被于反应板上,加入待测抗原,然后再加入酶标康体,显色后即可测得抗原含量。实验材料抗体试剂、试剂盒碳酸盐缓冲液Na2CO3磷酸盐缓冲液NaClKC
乙酸丙酮法血清甘油三酯测定实验
实验方法原理本法用异丙醇抽提血清TG,氧化铝吸附磷脂及游离甘油氢氧化钾皂化,过碘酸钠氧化生成甲醛,甲醛与乙酸丙酮在氨离子存在下加热生成黄色的 3,5二乙酰-1,4二甲基吡啶〔Hantgsch止反应)显色程度与标本中TG浓度成正比。实验步骤一、实验试剂:1. 异丙醇(分析试剂)2. 氧化铝(中性、层分
微生物大小的测定实验——显微法
实验方法原理镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片。一般将1 mm 等分为100格(或2 mm等分为200格),每格长度等于0.01 mm(即106 μm)。是专用于校正目镜测微尺每格长度的。目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片,其中央刻有精确的刻度,有等分50小格或100小格两种
实验室元素测定分析方法内标法
标准曲线法使用的标准溶液,底液通常是酸性水溶液,但是如果试样和标样在黏度、表面张力、密度等性质上有较大差别时,且有时候试样有复杂的基体组成或存在化学干扰,要求标样与试样有相似的组成,经常是难以达到的,这样标准曲线法就存在较大的误差。内标法是在标准溶液和被测样品中分别加入第三元素内标元素,测定分析线和
水中细菌总数的测定实验——平板计数法
实验方法原理本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多,它们对营养和其他生长条件的要求差别很大,不可能找到一种培养基在一种条件下,使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此,以一定的培养基平板上生长出来的菌落,计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。实
细菌增殖曲线的测定实验——比浊法
实验方法原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中,在适宜的条件下进行培养,定时测定培养液中的菌量,以菌量的对数作纵坐标,生长时间作横坐标,绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同,一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、
乙酸丙酮法血清甘油三酯测定实验
实验方法原理 本法用异丙醇抽提血清TG,氧化铝吸附磷脂及游离甘油氢氧化钾皂化,过碘酸钠氧化生成甲醛,甲醛与乙酸丙酮在氨离子存在下加热生成黄色的 3,5二乙酰-1,4二甲基吡啶〔Hantgsch止反应)显色程度与标本中TG浓度成正比。实验步骤 一、实验试剂:1. 异丙醇(分析试剂)2. 氧化铝(中性、
双缩脲法血清总蛋白测定实验
实验方法原理 凡分子中含有两个甲酰胺基(-CONH2-)的化合物都能与碱性铜溶液作用,形成紫红色化合物这一反应称双缩脲反应蛋白质分子中有许多肽健(-CONH2-)都能起此反应,而且各种血浆蛋白显色程度基本相同.实验步骤 一、实验操作:按表进行混匀,置25℃30min。(37℃10min)在波长540
水中细菌总数测定实验——平板菌落计数法
实验方法原理水中细菌总数测定是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌的总数。水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志,细菌数量越多,则水中有机质含量越大。本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。以1 ml水样在营养琼脂培养基中,于37 ℃培养24 h后所生长的细菌菌落的总数,作为水体受细菌污
双缩脲法血清总蛋白测定实验
实验方法原理凡分子中含有两个甲酰胺基(-CONH2-)的化合物都能与碱性铜溶液作用,形成紫红色化合物这一反应称双缩脲反应蛋白质分子中有许多肽健(-CONH2-)都能起此反应,而且各种血浆蛋白显色程度基本相同.实验步骤一、实验操作:按表进行混匀,置25℃30min。(37℃10min)在波长540nm
补体测定实验——溶血试验(CH50)法
实验材料血清试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液生理盐水NaClNa2HPO4KH2PO4硫酸镁溶液仪器、耗材水平离心机水浴箱分光光度计实验步骤一、材料准备1. 浓度为1×10 g/ml 的绵羊红细胞配制(1)取经稀释洗涤后的绵羊红细胞配成较5%稍浓的细胞悬液。(2)取50%细胞悬液1ml,加于14ml蒸馏水
人类染色体姊妹染色单体差别染色
姊妹染色单体区分染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)是70年代中期发展起来的染色体处理技术。Latt(1973)在培养的细胞中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),当用Hoechst33258 荧光染料染色时,发现了姊妹染色单体的色差反映和它们
实验室水分测定方法烘箱干燥法的测定要点
⑴取样(称样)在采样时要特别注意防止水分的变化,对有些食品例如奶粉、咖啡等很容易吸水,在称量时要迅速,否则越称越重。⑵干燥条件的选择三个因素:①温度;②压力(常压、真空)干燥;③时间。一般是温度对热不稳定的食品可采用70~105℃;温度对热稳定的食品采用120~135℃。
细胞周期蛋白质的细胞周期
我们可以把细胞周期人为地划分为几个时期。开始人们按照细胞所处的形态学变化将细胞划分为间期和分裂期两相,霍华德学说划分细胞周期各期则是以细胞核的遗传物质DNA的复制和分裂作为主要标界——即按时间顺序将细胞周期确定为四个期:DNA合成前期(G1期),DNA合成期(S期),DNA合成后期(G2期)和分裂期
BrdU-检-测-丁-细-胞-和-B-细胞增殖
实验步骤基本方案材 料实验动物0.8m g / m l B r d U (Sigma) 水 溶 液(口 服用)或 4m g / m l B r d U P B S 溶 液(注射用)P B S , p H 7. 40.15mo l / L 冰冷的 NaCl冰 冷 的 9 5 % 乙醇多聚甲醛固定液D
手把手教你正确制备细胞周期实验样品
细胞周期分析是分子生物学常用的实验方法,尤其在抗肿瘤药物研究上使用普遍。但细节处理不好,做得再多也做不出正确的、好看的分布图。今天来策下如何准确制备细胞周期测试的样品,真的是百试百灵哦!简单介绍下实验原理碘化丙啶(PI)是一种核酸染料,可以与 DNA 和 RNA 结合,但其不能透过正常的细胞膜,
cck8实验原理是什么
在电子耦合试剂(也就是细胞是活的,有呼吸,有能量代谢)存在的情况下,可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。活细胞越多,产生的Formazan就越多,颜色也会越深。Cell Counting Kit简称CCK试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基
揭开细胞复制的秘密
在发育和干细胞生物学、癌症研究和药物开发中,测定细胞的增殖能力是一种基本方法。Life Technologies推出了一系列产品,可高效准确地测定细胞在整个细胞周期中的进程。Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor为单个细胞或细胞群体中的细胞周期进程提供了准确、灵敏的
种子生活力的剥皮法快速测定实验
实验方法原理 此法适于测定休眠状态的种子的生活力。种子深休眠的原因很多,有些是因为果皮或种皮的束缚(如不透水、不透气)造成的,也有的在果皮、种皮、胚乳中存在着萌发抑制剂,这类障碍可以用除去果皮、种皮、胚乳或切去一部分子叶的办法克服。当阻碍萌发的物理或化学因素被排除以后,胚就很快萌发。实验材料 苹果柑
种子生活力的剥皮法快速测定实验
实验方法原理:此法适于测定休眠状态的种子的生活力。种子深休眠的原因很多,有些是因为果皮或种皮的束缚(如不透水、不透气)造成的,也有的在果皮、种皮、胚乳中存在着萌发抑制剂,这类障碍可以用除去果皮、种皮、胚乳或切去一部分子叶的办法克服。当阻碍萌发的物理或化学因素被排除以后,胚就很快萌发。实验材料:苹果
蛋白质含量的测定实验——OLIN酚法
实验方法原理FOLIN 酚法所用的试剂有两部分组成。试剂甲可与蛋白质中的肽键起显色反应, 试剂乙在碱性条件下极不稳定, 易被酚类化合物还原成蓝色(蛋白质中的酚基将磷钼酸-磷钨酸还原成蓝色复合物)。在一定条件下, 蓝色强度与蛋白质的量成正比, 范围约在25~250 μg/ ml 蛋白质浓度。实验材料蛋
种子生活力的剥皮法快速测定实验
实验方法原理此法适于测定休眠状态的种子的生活力。种子深休眠的原因很多,有些是因为果皮或种皮的束缚(如不透水、不透气)造成的,也有的在果皮、种皮、胚乳中存在着萌发抑制剂,这类障碍可以用除去果皮、种皮、胚乳或切去一部分子叶的办法克服。当阻碍萌发的物理或化学因素被排除以后,胚就很快萌发。实验材料苹果柑桔玉
实验室元素测定分析方法内插法
此法可以提高对高含量元素测定的准确度。这种方法只需两个标准点即可,这两个标准点的浓度与试样溶液的浓度应该十分接近,其中一个高于试样溶液浓度,另一个低于试样溶液的浓度,以使试样的测量值位于两个标准点测量值之间。采用紧密内插法可按下式计算分析结果。式中,C1,C2,Cx分别为标准溶液1、标准溶液2和试样
脂肪酶的测定实验——荧光分析法
实验方法原理此实验同样适用于胰凝乳蛋白、胆碱酯酶和酰基转移酶。可以用作底物的并非只是联丁酰荧光素,乙酰胆碱酯酶荧光素亦可。联丁酰荧光素 → 荧光素(无荧光性) (有荧光性)实验材料酶样品试剂、试剂盒Tris-HCl联丁酰荧光素仪器、耗材荧光光度计实验步骤0.1 mol/L Tris-HCl,pH 8
测定微生物数量实验_平板菌落计数法
实验方法原理平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的,也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时,先将待测样品作一系列稀释,再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中,使其均匀分布于平皿中的培养基内,经培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数目,即可换算
总糖含量的测定实验——苯酚硫酸法v
实验方法原理苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸(或甲苯衍生物)起显色反应,己糖在490 nm处(戊糖及糖醛酸在480 nm)有最大吸收,吸收值与糖含量呈线性关系。实验材料葡萄糖试剂、试剂盒浓硫酸 苯酚仪器、耗材试管 试管架 移液管 量筒 烧杯 离心管 玻璃碾磨器 离心机 分光光度计
NK细胞活性测定:LDH法原理和实验步骤
一、原理 活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶