谷胱甘肽的测定实验——双抗夹心ELISA法
以及含量;(2)谷胱甘肽具有广谱解毒作用,不仅可用于药物,更可作为功能性食品的基料,在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用实验方法原理先将康体包被于反应板上,加入待测抗原,然后再加入酶标康体,显色后即可测得抗原含量。实验材料抗体试剂、试剂盒碳酸盐缓冲液Na2CO3磷酸盐缓冲液NaClKClTMB二甲基亚砜牛血清蛋白仪器、耗材酶标仪培养箱实验步骤一、材料准备1. 包被液:0.05 mol/l(pH9.6)碳酸盐缓冲液:Na2CO3 0.159 g,NaHCO3 0.294 g,用蒸馏水溶解后,定容至100 ml。2. PBS-T洗涤液:0.01mol/ pH7.4磷酸盐-氯化钠缓冲液:NaCl 8.0 g,KH2PO4 0.2 g,Na2HPO4·12H2O 2.9 g,KCl 0.2 g,吐温-20 0.5 ml,用蒸馏水溶解后,定容至1000 ml。3. &nb......阅读全文
谷胱甘肽的测定实验——双抗夹心ELISA法
以及含量;(2)谷胱甘肽具有广谱解毒作用,不仅可用于药物,更可作为功能性食品的基料,在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用实验方法原理先将康体包被于反应板上,加入待测抗原,然后再加入酶标康体,显色后即可测得抗原含量。实验材料抗体试剂、试剂盒碳酸盐缓冲液Na2CO3磷酸盐缓冲液NaClKC
双抗夹心-ELISA
实验概要夹心 ELISA 法是应用两种抗体协同测定抗原含量的方法(即:捕获抗体和检测抗体)。因此抗原必须包含至少 2 个能被抗体识别的抗原位点。在夹心 ELISA 中,单克隆抗体和多克隆抗体都可以被用作捕获抗体和检测抗体。单抗识别单一的抗原表位,可以区别抗原的微小差别,使抗原得到更精确地检测和
双抗夹心-ELISA
实验概要夹心 ELISA 法是应用两种抗体协同测定抗原含量的方法(即:捕获抗体和检测抗体)。因此抗原必须包含至少 2 个能被抗体识别的抗原位点。在夹心 ELISA 中,单克隆抗体和多克隆抗体都可以被用作捕获抗体和检测抗体。单抗识别单一的抗原表位,可以区别抗原的微小差别,使抗原得到更精确地检测和
双夹心ELISA法的操作程序
此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于:它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原,它不仅不必标记每一种抗体,还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为:① 加抗体(Ab-1)包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检抗原(Ag) → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特异性抗体(A
双夹心ELISA法的操作程序
此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于:它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原,它不仅不必标记每一种抗体,还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为:① 加抗体(Ab-1)包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检抗原(Ag) → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特异性抗体(A
双抗体夹心ELISA法的操作程序
本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的双夹心抗体ELISA为例介绍本法的操作程序。① 加抗体包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 15分钟,加
双夹心ELISA基本程序
① 加抗体(Ab-1)包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检抗原(Ag) → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特异性抗体(Ab-2)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干④ 加入酶标抗Ab-2抗体(AB-3)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干⑤ 加底物液 → 37℃ 2
ELISA双抗体夹心法
操作步骤 1.包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵
ELISA双抗体夹心法原理
原理LISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。加入酶标记的抗原或抗体,
双抗夹心-ELISA试剂盒的反应时间
在保证 ELISA 有效检测病原菌的前提下,快速、方便也是双抗夹心 ELISA 的必要条件。双抗夹心 ELISA 从 加入待测抗原到得出结果,检测大肠杆菌 O157:H7 共需要5h 左右,而间接 ELISA 则需要 7h(包被 37℃,2h)或 者 17h(包被 4℃guo夜)。本论文筛选
ELISA测定的常用模式——双抗体夹心法测抗原
对于含多个抗原决定簇的大分子蛋白,使用双抗体夹心ELISA模式测定相当简便,现有的商品试剂盒基本上都采用此种测定模式。具体测定方法如下:1.首先以双抗体之一于碳酸盐缓冲液中4℃下过夜包被聚苯乙烯等固相,形成固相抗体,洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭,洗涤去除未结
ELISA测定的常用模式双抗原夹心法测抗体
间接法测抗体实际上测定的只有IgG类,而双抗原夹心法所测定的抗体则为所有各类,且不受非特异IgG的干扰,因此,双抗原夹心法测抗体的灵敏度和特异性要高于间接法。目前,为提高抗体测定的灵敏度,国内的间接法ELISA试剂盒正逐步地向双抗原夹心法转变。双抗原夹心法测抗体的模式类似于双抗体夹心法测抗原(图2—
双抗体夹心ELISA法检测待测样品sT...
实验概要本实验利用双抗体夹心ELISA法检测了待测样品sTNF-α的含量。选用两株针对TNF-α分子不同位点的单克隆抗体,即McAb1(包被抗体)与McAb2(酶标抗体)。先用McAb1包被固相载体,使待测sTNF-α与之特异性结合,然后再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的McAb2,则形成McAb
酶联免疫吸附实验—双抗体夹心ELISA法检测特异性抗体
实验步骤双 抗 体 夹 心 ELISA 法检测特异性抗体在有少量酶标特异抗体但无法获得纯化抗原时,用该检测方法筛选特异性抗体最为有 效(图 1.1. 4)。另外,这种方法也可利用那些结合同一抗原的不同单克隆抗体来绘制抗原表位图。附 加 材 料(其他材料见基本方案)包 被 抗 体 溶 液(特异性针对待
ELISA(双抗体夹心法)—检测HBsAg
以已知抗体(抗HBs)包被载体,然后将含有抗原的待检标本加入,共同孵育后,抗原结合于包被抗体上,再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs),酶标抗体连接到抗原上,最后加入底物溶液,根据颜色反应来判定抗原含量。 【材料】HBsAg试剂盒,本试剂盒含: 1、包被抗-HBs反应条 1瓶
ELISA(双抗体夹心法)—检测HBsAg
以已知抗体(抗HBs)包被载体,然后将含有抗原的待检标本加入,共同孵育后,抗原结合于包被抗体上,再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs),酶标抗体连接到抗原上,最后加入底物溶液,根据颜色反应来判定抗原含量。 【材料】HBsAg试剂盒,本试剂盒含: 1、包被抗-HBs反应条 1瓶
ELISA(双抗体夹心法)—检测HBsAg
以已知抗体(抗HBs)包被载体,然后将含有抗原的待检标本加入,共同孵育后,抗原结合于包被抗体上,再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs),酶标抗体连接到抗原上,最后加入底物溶液,根据颜色反应来判定抗原含量。【材料】HBsAg试剂盒,本试剂盒含: 1、包被抗-HBs反应条1瓶2、酶结合物1瓶3、HBsA
ELISA检测方法之双抗体夹心法测抗原-|-实验
对于含多个抗原决定簇的大分子蛋白,使用双抗体夹心ELISA模式测定相当简便,现有的商品试剂盒基本上都采用此种测定模式。具体测定方法如下:1.首先以双抗体之一于碳酸盐缓冲液中4℃下过夜包被聚苯乙烯等固相,形成固相抗体,洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭,洗涤去除未结
夹心法ELISA实验结果定性判断测定方法
定性测定的效果判别是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简略答复,ELISA试剂盒分别用"阳性"、"阴性"标明。"阳性"标明该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判别法也可得到半定量效果,即用滴度来标明反应的强度,其实质仍是一个定性实验。在这种半定量测定中,将标本作
夹心-ELISA-实验方案
实验概要夹心 ELISA 的一般程序。实验原理夹心 ELISA 测定两层抗体(即捕获抗体和检测抗体)间的抗原数。要测定的抗原必须包含至少两个能够结合到抗体的抗原位点,因为至少两个抗体在夹心中起作用。单克隆或多克隆抗体均可在夹心 ELISA 系统中用作捕获抗体和检测抗体。单克隆抗体识别单一表位,可对抗
夹心ELISA实验方案
实验概要夹心 ELISA 的一般程序。实验原理夹心 ELISA 测定两层抗体(即捕获抗体和检测抗体)间的抗原数。要测定的抗原必须包含至少两个能够结合到抗体的抗原位点,因为至少两个抗体在夹心中起作用。单克隆或多克隆抗体均可在夹心 ELISA 系统中用作捕获抗体和检测抗体。单克隆抗体识别单一表位,可对抗
双抗体夹心ELISA法检测待测样品sTNFα含量
【基本原理】 选用两株针对TNF-α分子不同位点的单克隆抗体,即McAb1(包被抗体)与McAb2(酶标抗体)。先用McAb1包被固相载体,使待测sTNF-α与之特异性结合,然后再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的McAb2,则形成McAb1-sTNF-α -HRP标记McAb2复合物,
双抗体夹心ELISA法检测待测样品sTNFα的含量
实验概要本实验利用双抗体夹心ELISA法检测了待测样品sTNF-α的含量。选用两株针对TNF-α分子不同位点的单克隆抗体,即McAb1(包被抗体)与McAb2(酶标抗体)。先用McAb1包被固相载体,使待测sTNF-α与之特异性结合,然后再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的McAb2,则形成McAb
ELISA双抗体夹心法:检测未知抗原
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原
大鼠谷胱甘肽-(GSH)ELISA检测法
大鼠谷胱甘肽 (GSH)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 GSH 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 GSH与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠GSH,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptav
酶联免疫吸附(ELISA)实验——双抗体夹心法(测抗原)
酶联免疫吸附(ELISA)可以:(1)免疫酶染色各种细胞内成份的定位。(2)研究抗酶抗体的合成。(3)显现微量的免疫沉淀反应。(4)定量检测体液中抗原或抗体成份。实验方法原理图1. 双抗体夹心法测抗原示意图 本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体,经洗涤后加入含有抗原之待测样品,如待检样品中有相应抗
谷胱甘肽的测定实验
双抗夹心ELISA法 免疫组织法 实验方法原理 先将康体包被于反应板上,加入待测抗原,然后再加入酶标康体,显色后即可测得抗原含量。
谷胱甘肽的测定实验
实验方法原理 先将康体包被于反应板上,加入待测抗原,然后再加入酶标康体,显色后即可测得抗原含量。实验材料 抗体试剂、试剂盒 碳酸盐缓冲液Na2CO3磷酸盐缓冲液NaClKClTMB二甲基亚砜牛血清蛋白仪器、耗材 酶标仪培养箱实验步骤 一、材料准备1. 包被液:0.05 mol/l(pH9.6)碳酸
谷胱甘肽的测定实验
谷胱甘肽(glutathiose,r-glutamyl cysteingl +glycine,GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽,由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成。存在于几乎身体的每一个细胞。实验方法双抗夹心ELISA法 免疫组织法 实验方法原理 先将康体包被于反应板上,加入待测抗原,然后再加入酶
SPA夹心ELISA实验检测CIC
金黄色葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,SPA)可与IC中IgG的Fc段结合。将待测血清用低浓度PEG沉淀后加至SPA包被的固相载体上,再以酶标记的SPA与之反应,即可检测样本中有无IC。1、试剂(1)5%与2.5%PEG用0.02mol/LpH7.4PBS配制;(2