RNA分离与分析实验_分离RNA
实验材料标记细胞试剂、试剂盒乙酸缓冲液仪器、耗材漩涡器实验步骤1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀，每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚，充分混匀，于 60℃ 加热 5 分钟。5. 再次用旋涡器振荡混匀，冰浴 15 分钟。6. 于 4℃ 以 5000 g 离心 10 分钟，此时溶液很清楚地分成 4 相：底部一小块不溶的沉淀，往上是酚相，再上是连接处的白色 SDS 相及上层含 RNA 的水相。7. 吸出上层水相至新离心管，加 2.5 倍体积含 2% 乙酸钠的乙醇沉淀 RNA，将离心管于 -20℃ 或 -70℃ 放置几小时以充分沉淀 RNA。8. 离心回收 RNA，抽干，将沉淀溶于少量 TE 缓冲液。 展开 ......阅读全文
从革兰氏阴性菌中分离高质量RNA
实验材料 大肠杆菌培养物或 蓝细菌培养物 试剂、试剂盒 DEPC 处理的水 终止缓冲液 ST
环形RNA与线性RNA定量比较分析新系统CLEAR发布
1月15日，国际学术期刊Genomics,Proteomics & Bioinformatics在线发表了中国科学院－德国马普计算生物学伙伴研究所杨力研究组关于环形RNA研究的最新进展“CIRCexplorer3: A CLEAR Pipeline for Direct Comparison o
分离核仁实验——分离核仁
实验材料肝脏试剂、试剂盒NKM仪器、耗材粗孔滤纸Teflon-玻璃匀浆器实验步骤1. 制备溶液：NKM：0.13 mol/L NaCl，5 mmol/L KCl，8 mmol/L MgCl20.34 mol/L 蔗糖，3 mmol/L MgCl22.3 mol/L 蔗糖，10 mmol/L MgCl
2.7.1－从革兰氏阴性菌中分离高质量RNA
从大胗杆菌或蓝细菌屮制备的高质量RNA适 于 Northern印迹法、S1 核酸酶作图和引物延伸试验。实验材料大肠杆菌培养物或 蓝细菌培养物试剂、试剂盒DEPC 处理的水终止缓冲液STET 裂解液酚氯仿3mol L 乙酸钠缓冲液0.2mol L 和 l0 mmol L 氧钒核苷复合物氯化铯CsCl
哺乳动物细胞(mammalian－cell)总RNA的分离2
3）于0℃以5000g离心10分钟沉淀RNA，弃上清，用含0.1mol/L 乙酸钠（pH5.2）的70％乙酸洗涤沉淀，用自动微量移液器尽可能将乙醇吸尽， 随后于室温放置几分钟，晾干沉淀。切勿抽干沉淀，因为干的核酸沉淀很难溶解。4）每个直径为90mm的培养皿或每107细胞加 200μl 50mmol/
研究揭示环形RNA促进相分离调控肿瘤发展分子机制
环形RNA是由pre-mRNA通过反向剪接形成的闭合环状RNA分子，在生物体内可发挥miRNA海绵、结合蛋白以及翻译成短肽等分子功能来调控各种生理和病理过程。与线性mRNA相比，环形RNA独特的环状结构使其具有更高的稳定性，在细胞内可更稳定地存在。因此，环形RNA更适合作为肿瘤的分子标志物及治疗
哺乳动物细胞(mammalian－cell)总RNA的分离1
哺乳动物细胞总ＲＮＡ的分离细胞的裂解提取步骤注意事项这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等（1980）所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离 RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这
RNA干涉实验
化学合成siRNA分子实验 体外转录合成siRNA分子实验 采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子 采用RNaseⅢ制备siRNA分子实验 实验方法
RNA干涉实验
实验方法原理 当确定了靶基因上的 siRNA 分子作用位点以后，根据靶位点的序列可以很方便地推导得到相应的 siRNA 分子的正义与反义 RNA 链序列。它们包含 19 bp 的互补双链区和两侧的不配对区（每侧为 2 个 U 成 2 个 T )，在合成时用 T 替代 U 可以降低成本并可以提
纯化RNA实验
从培养的细胞中纯化总RNA 从组织中纯化总RNA 实验材料 细胞
RNA干涉实验
RNA 干涉（RNA1） 是指在真核细胞中引入双链 RNA ( doubt-stranded RNA，dsRNA ) 分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异件基内沉默（gene silencing ) 的现象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理当确定了靶基因上的 siRN
IgG的分离与提纯实验
实验方法原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液
RNA足迹和修饰干扰分析实验
RNA 足迹和修饰干扰分析（RNA footprinting and modification interference analysis）是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA 足迹试验的理论基础，它们都是建立在变性、半变性或自然条件下采用碱基特异性
RNA足迹和修饰干扰分析实验
实验方法原理 RNA 足迹和修饰干扰分析（RNA footprinting and modification interference analysis）是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA 足迹试验的理论基础，它们都是建立在变性、半变性或
RNA足迹和修饰干扰分析实验
实验方法原理 RNA 足迹和修饰干扰分析（RNA footprinting and modification interference analysis）是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA
RNA－光谱分析与定量
试剂、试剂盒 DEPC 无核酸酶的水 仪器、耗材 紫外分光光度计 石英比色杯
RNA－光谱分析与定量
试剂、试剂盒 DEPC 无核酸酶的水仪器、耗材 紫外分光光度计 石英比色杯实验步骤 一、材料与设备1）紫外分光光度计。2) 石英比色杯。3)DEPC4) 无核酸酶的水。二、操作方法(一）准备分光光度计用 0.1%DEPC 水浸泡比色皿至少 15 min。2) 用水或无 UV 吸收的缓冲掖设置基线。
RNA免疫沉淀rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体实验
实验方法原理 RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。 实验材料 载体酵母 tRNA R
RNA免疫沉淀rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体实验
RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。实验材料载体酵母 tRNARQ1 DNA 酶糖原小牛肠碱性磷酸酶
天然RNA文库筛选与蛋白特异性结合的RNA序列实验
实验方法原理 细胞中，蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽，多聚腺苷酸化，剪切，核外运，翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段，RNA 结合蛋白可以通过与 mRNA 的相互作用调控基因的表达。实验材料 mRNA寡核苷酸试剂、
天然RNA文库筛选与蛋白特异性结合的RNA序列实验
实验方法原理 细胞中，蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽，多聚腺苷酸化，剪切，核外运，翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段，RNA 结合蛋白可以通过与 m
天然RNA文库筛选与蛋白特异性结合的RNA序列实验
细胞中，蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽，多聚腺苷酸化，剪切，核外运，翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段，RNA 结合蛋白可以通过与 mRNA 的相互作用调控基因的表达。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞
RNA实验技巧与操作注意事项
操作注意事项：由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功，请仔细阅读下列注意事项，相信它能帮助您解决常见的问题。归根究底，RNA工作的主要问题是防止RNA酶的污染。RNA酶无处不在，在实验操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不当操
RNA－操作注意事项与实验技巧
操作注意事项： 由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功，请仔细阅读下列注意事项，相信它能帮助您解决常见的问题。 归根究底，RNA工作的主要问题是防止RNA酶的污染。RNA酶无处不在，在实验操作的任何一步，任何偶然的疏
RNA干扰（RNAi）实验原理与方法（1）
近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、R
RNA干扰（RNAi）实验原理与方法（3）
3.DEAE-葡聚糖和polybrene带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。两种试剂都已成功用于转染。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染。4.机械法转染技术也包括使用机械的方法，
RNA干扰（RNAi）实验原理与方法（2）
dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，为研究人员节省时间和金钱（注意：通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜）。不过这种方法的缺点也很明显，就是有可能引发非特异的基因沉默，特别是同源或者是密切相关的基因。现在多数的研究显示这种情况通常不会造成影响。最
纯化RNA实验——从组织中纯化总RNA
实验材料组织试剂、试剂盒RNA 抽提缓冲液氯仿实验步骤1. 从动物取下组织，直接进行第 2 步或在液氮中快速冷冻新鲜解剖的组织。冷冻后的组织可以贮存在 -70℃。2. 组织（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提缓冲液中匀浆。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均匀，冰浴 15 分钟
植物RNA提取实验
直接研磨法 液氮研磨法 实验方法原理 通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离
真菌RNA提取实验
实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 实验材料 菌丝体试剂、试剂盒 NaCl蒸馏水SDSTr