RNA干涉实验
实验方法原理 当确定了靶基因上的 siRNA 分子作用位点以后，根据靶位点的序列可以很方便地推导得到相应的 siRNA 分子的正义与反义 RNA 链序列。它们包含 19 bp 的互补双链区和两侧的不配对区（每侧为 2 个 U 成 2 个 T )，在合成时用 T 替代 U 可以降低成本并可以提高 siRNA 分子的稳定性，利用 DNA/RNA 合成仪首先分别合成长为 21 nt 的 siRNA 分子的正义链和反义链，然后在体外将它们退火形成双链 siRNA 分子。实验材料 RNA 单链分子试剂、试剂盒 退火缓冲液核酸转染试剂DEPC处理水仪器、耗材 NuSieve GTG 琼脂糖凝胶实验步骤 一、材料与设备1. 化学合成的正义与反义 RNA 单链分子。2. 2X 退火缓冲液（200 nmol/L KAc，4 mmol/L MgAc2，60 mmoI/L Hepes-KOH pH 7.4)。3. NuSieve GT......阅读全文
RNA干涉实验
化学合成siRNA分子实验 体外转录合成siRNA分子实验 采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子 采用RNaseⅢ制备siRNA分子实验 实验方法
RNA干涉实验
RNA 干涉（RNA1） 是指在真核细胞中引入双链 RNA ( doubt-stranded RNA，dsRNA ) 分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异件基内沉默（gene silencing ) 的现象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理当确定了靶基因上的 siRN
RNA干涉实验
实验方法原理 当确定了靶基因上的 siRNA 分子作用位点以后，根据靶位点的序列可以很方便地推导得到相应的 siRNA 分子的正义与反义 RNA 链序列。它们包含 19 bp 的互补双链区和两侧的不配对区（每侧为 2 个 U 成 2 个 T )，在合成时用 T 替代 U 可以降低成本并可以提
RNA干涉(RNA－Interference，RNAi)（2）
早期的 RNAi 技术可用在研究与胚胎发育相关基因的功能上，但是由于细胞分裂造成 dsRNA 的稀释，使得这种方法在研究成体的基因功能时有一定的局限性。为弥补早期 RNAi 技术的不足，Tavernarakis 等将 RNAi 技术做了一些改进及更动，将目的基因之标的序列以反向重复的方式，由
RNA干涉(RNA－Interference，RNAi)（1）
基因沉默（gene silencing）是生物体内特定基因由于种种原因不表达的遗传现象。一方面，基因沉默是生物遗传操作创造新的遗传修饰生物（genetically modified organisms）的障碍，另一方面，它又是植物抵抗外来核酸入侵（如病毒）的一种反应，为植物抗病毒的遗传育
RNA干涉实验——采用RNaseⅢ制备siRNA分子实验
实验方法原理首先在体外以长为 200~1000 bp 的 cDNA 为模板转录合成正义与反义的单链 RNA 分子，然后通过退火形成长的 dsRNA 分子，再用Diccr 核酸酶进行切割得到 siRNA 分子的混合物，通过纯化去除没有被切割的双链 RNA 分子和 DNA 模板以后，siRNA 分子就可
RNA干涉实验——体外转录合成siRNA分子实验
实验方法原理采用噬菌体 RNA 聚合酶（T7、T3 或 SP6 RNA 聚合酶）可以很方便地在体外合成 siRNA 分子的正义与反义 RNA 链，然后再通过退火形成双链的 siRNA 分子。体外转录合成 siRNA 分子与化学合成双链 RNA 分子相比，其成本相对要低得多，而且有研究报道前者对靶基因
RNA干涉实验——采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子
实验方法原理因为哺乳动物细胞不具备低等真核生物细胞所具有的扩增 RNAi 信号的机制，因此人工合成或体外转录的 siRNA 分子在细胞内的作用是瞬时性的，不适合用于进行靶基因的表达受到抑制后细胞表型的长期变化观察，也不适于进行文库的筛选。此外，体外制备 siRNA 分子的成本比较高，而且 siRNA
Nature子刊：增强RNA干涉的效力
人们可以通过纳米颗粒将短链RNA运输到目标细胞，关闭功能发生异常的基因，从而治疗癌症和其他疾病。不过迄今为止，科学家们还不完全了解，纳米颗粒进入细胞后发生的情况。 现在，麻省理工MIT的一项新研究展现了这些纳米颗粒的命运，这一发现能帮助人们大大提高siRNA的运输效率。文章于六月二十三日发
RNA干涉杀虫剂需要特别的安全测试
用于开发杀虫剂和抗虫害作物的一种新技术可能对有益物种产生影响，而当前的毒性测试可能测不出这种影响。 发表在8月号的《生物科学》(BioScience)杂志的一篇论坛文章说，标准的毒性测试不足以评估有潜力制造杀虫剂和基因修饰农作物的一种新技术的安全性。该文章的作者、美国农业部农业研究局的Jo
罗氏制药公司宣布退出RNA干涉研究领域
新药研发陷入困境罗氏退出RNA干涉研究领域 罗氏公司总部位于瑞士巴塞尔，是全球最大的医药公司之一。据最新出版的《科学》杂志报道，11月下旬，罗氏宣布退出RNA干涉（RNAi）研究领域，这一决定是该公司计划裁减6%的人力即4800人的计划的一部分。 RNA干涉是一种分子生物学上由双
纯化RNA实验
从培养的细胞中纯化总RNA 从组织中纯化总RNA 实验材料 细胞
RNA分离与分析实验_分离RNA
实验材料标记细胞试剂、试剂盒乙酸缓冲液仪器、耗材漩涡器实验步骤1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀，每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚，充分混匀，于 60
水稻金属耐受蛋白及编码基因、RNA干涉片段获发明ZL
6月17日，由中科院华南植物园张美博士等科研人员完成的“水稻金属耐受蛋白OsMPT1及其编码基因和其RNA干涉片段”获得国家发明ZL授权(ZL号：ZL 201110249200.7)。 水稻是世界上最重要的粮食作物之一，是我国第一大粮食作物。工业“三废”的排放造成巨大的环境污染，特别是
干涉实验条纹间距公式的推导方法
因为等厚干涉现象的两任意相邻条纹之间的厚度差等于λ／2，即薄膜层介质中光的波长的一半，而条纹间距△X*sinΘ=λ／2因为角度小的时候可以认为sinΘ=Θ，所以推出：△X＝λ／2Θ
细菌RNA制备实验
革兰氏阴性细菌中提取 革兰氏阳性细菌中提取 实验材料 RNA 试
RNA干扰主体实验
siRNA表达载体构建好后，即可进行RNA干扰主体实验。RNA干扰主体实验的重点在于：成功将siRNA表达载体导入目的细胞如果目的细胞的质粒转染效率较低（低于70%），则应采用腺病毒或慢病毒载体，利用病毒载体的高感染率、高表达特性，更好地开展RNA干扰主体实验。设置好分组和对照按照nature的标准
病毒RNA提取实验
病毒RNA提取可以：（1）用于RNA病毒复制机制研究；（2）用于反向遗传学研究；（3）用于分子病毒学其他研究。实验方法原理大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料TMV病毒液试剂、试剂盒TE-饱和酚:氯
病毒RNA提取实验
TE-饱和酚/氯仿提取法 实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获
总RNA提取实验
实验方法原理 一些公司推出的总RNA 提取试剂盒，可以用来制备高质量的可用于建库的RNA 。该总RNA 纯化系统采用两种著名的RNA 酶抑制剂，异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇，加上整个操作都在冰浴下进行，这样就能显著降低RNA 的
RNA干扰主体实验
siRNA表达载体构建好后，即可进行RNA干扰主体实验。RNA干扰主体实验的重点在于：成功将siRNA表达载体导入目的细胞如果目的细胞的质粒转染效率较低（低于70%），则应采用腺病毒或慢病毒载体，利用病毒载体的高感染率、高表达特性，更好地开展RNA干扰主体实验。设置好分组和对照按照nature的标准
动物RNA提取实验
SV总RNA试剂盒提取法 Trizol试剂提取法 实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA
RNA实验方法
Solublization of RNA in Formamidecontributed by James McCaughern-Carucci, Yale UniversityResuspending RNA in Formamide (as reported by Chomczynski et
动物RNA提取实验
实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA 纯化系统)可在1小时内从组织、培养细胞和白细胞中提取纯化完整总RNA，方法简单、快速。该系统以膜为基础，根据组织类型的不同，每次最多可纯化60 mg 组织。系统包含DNase 处理步骤，直接在小离
RNA干扰回复实验
RNA干扰回复实验，主要是为了说明Off-target效应。Off-target效应Off-target effects（脱靶效应）最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
RNA干扰实验技术
实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法，包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法，及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因
真菌RNA提取实验
实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 实验材料 菌丝体试剂、试剂盒 NaCl蒸馏水SDSTr
植物RNA提取实验
直接研磨法 液氮研磨法 实验方法原理 通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离
RNA干扰回复实验
RNA干扰回复实验，主要是为了说明Off-target效应。Off-target效应Off-target effects（脱靶效应）最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
细菌RNA制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 STET氯仿乙酸钠氯化铯无水乙醇EDTA仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 培养100 ml 大肠杆菌或500 ml 蓝细菌至对数生长期，加入1/20体积终止缓冲液，置于冰上。2. 于4℃用JA-10转子17 700 g 离心5 min 收集细胞。3.