用肽底物检测蛋白质激酶的活性和特异性实验
利用肽底物分析CaMKⅠ和Ⅱ试剂、试剂盒反应缓冲液仪器、耗材磷酸纤维素滤纸离心管实验步骤1. 准备 P81 磷酸纤维素滤纸。(1) P81 磷酸纤维素滤纸切成 2cmX2cm 的方块,折起一个角,用铅笔在这里做个记号。(2) 将膜块放在一大张非吸收性材料上,如有机玻璃或者盖着铝箔的纤维板。2. 设置和标记进行分析反应的离心管。反应体积可以是 25~100 μl。对于 50 μl 反应,加入下列溶液:10X 反应缓冲液 5 μl10X 底物溶液 ......阅读全文
用Ki67检测细胞增殖活性
实验步骤展开
微量热技术(Microcalorimetry)
微量热法(包括等温滴定量热和差示扫描量热)是近年来发展起来的一种研究生物热力学与生物动力学的重要结构生物学方法,它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续和准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线,原位(in situ)、在线(on-line)和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。 微量热法具有以下特点
胸腺肽的制备及检测实验
实验概要本实验从动物的胸腺中提取了胸腺肽,并进行了pH值、热原、超敏反应、急性毒性试验、无菌检查、多肽含量测定等相关检测。实验原理胸腺肽是存在于人及多种动物胸腺内的一组具有免疫调节活性的热稳定性多肽。分子量多在8 000~13 000之间,等电点在35~95之间。胸腺肽的主要功能为诱导T细胞
蛋白质用什么试剂检测
蛋白质用双缩脲试剂检测。双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制。会遇到蛋白质显紫色。双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶
Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 1 mg ml 钙调蛋白(- 70℃ 小量储存)
Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验
实验方法原理 实验材料 1 mg ml 钙调蛋白(- 70℃ 小量储存)有 CaM 激酶活性的酶样品10 mmol L 合成肽底物溶液试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液5 × CaM 激酶反应缓冲液仪器、耗材 30℃ 水浴实验步骤 1. 对 1.5 ml 微量离心管做双管标记,每个反应按以下
NK细胞活性检测实验步骤
细胞毒检测技术包括补体依赖细胞毒试验、NK细胞介导的细胞毒试验和特异性CTL活性检测,常用的实验技术有后两种。NK细胞(natural killer cell)是在天然免疫系统发挥主要作用的效应细胞,可直接杀伤病毒感染的靶细胞和某些肿瘤细胞。而细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymp
饲料蛋白酶的最新研究与应用进展
蛋白质、碳水化合物和脂肪是三种主要的常量营养元素,可提供动物生长所需的能量和必需营养物质。以蛋白质为例,必需的营养元素是氨基酸,它也是机体和所有生物代谢过程中必需的。动物可产生内源蛋白酶来消化蛋白质,例如胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶是最主要的内源蛋白酶。一般来说,内源蛋白酶对饲料蛋白的消化效率为
多肽磷酸化修饰及检测方法
磷酸化影响着细胞生命的方方面面。在细胞中,大概有1/3的的蛋白质被认为是通过磷酸化修饰的。蛋白质的磷酸化修饰与多种生物学过程密切相关,如DNA损伤修复、转录调节、信号传导、细胞凋亡的调节等。磷酸化蛋白质及多肽的研究可以帮助人们阐述上述过程的机理,进一步认识生命活动的本质。肽谷生物依据自身原料优势和技
人体活性肽的分泌周期的介绍
在不同的年龄时期,各种活性肽的分泌量也有很大差别,按分泌量划分,人的一生一般可分为: ①分泌充足期(25岁以前的青年期)这个时期内分泌量均衡、免疫功能强劲,人体一般不易出现疾病; ②分泌不足期(失衡期)(30—50岁壮年和中年期)这一时期如果活性肽分泌不足或失衡会出现各种相关的亚健康状态和轻
活性肽的的生理功能介绍
目前,它成为全世界研究的热点、大量的国内外研究结果表明:生物活性肽是涉及生物体内多种细胞功能的生物活性物质,在生物体内已发现几百种,不同的生物肽具有不同的结构和生理功能,如抗病毒、抗癌、抗血栓、抗高血压、免疫调节、激素调节、抑菌、降胆固醇等作用。 活性肽的的生理功能如下: 1.调节体内的水分
关于角蛋白酶的底物特异性作用介绍
角蛋白酶作用的底物除了角蛋白外,它还可水解多种蛋白质底物,包括可溶和不可溶的蛋白质。角蛋白酶可以降解如酪蛋白、明胶、牛血清白蛋白等可溶的蛋白质。也可以降解包括羽毛、羊毛、角质、人发、指甲等不可溶的蛋白质。个别角蛋白酶的底物范围很窄,例如鸡毛癣菌角蛋白酶只能降解鸟类羽毛,较难降解其它种类的角蛋白。
用肽适配体正向分析细胞过程实验1
实验材料用于遗传学筛选的酵母株肽适配体库试剂、试剂盒完全极限(CM) 缺失成分液体培养基和平板仪器、耗材30℃ 培养箱实验步骤1. 用高效乙酸锂转化法将 50~100 ug 肽适配体库(在 pJM-2 或 pJM-3 中)转化酵母筛选株(106~107 转化株)。将转化株涂布到 10 cm Glu/
用肽适配体正向分析细胞过程实验2
辅助方案 肽适配体靶点的鉴定实验方法原理通过配对相互作用或捕获法鉴定的肽适配体的假定靶点应当通过遗传学测试进行验证,例如:1. 用免疫沉淀法确定体内适配体的相互作用;2. 通过上位(显)性分析以确定适配体在与靶蛋白相同的区域发挥功能;3. 比较由靶蛋白删除或过表达引起的表型与由适配体造成的表型。实验
去甲基化酶Rph1底物特异性识别和催化机制
研究揭示酿酒酵母组蛋白去甲基化酶Rph1底物特异性识别和催化机制 11月10日,Biochemical Journal在线发表了中科院上海生命科学研究院生化与细胞所丁建平组关于酿酒酵母组蛋白去甲基化酶Rph1底物特异性识别和催化机制的研究成果。 人和酵母等真核生物中存在一类含有
PKA(蛋白激酶A)的活性如何测定
目的研究蛋白激酶C(protein KinaseC,PKC)和蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)在甲状腺癌发生过程中的作用.方法利用酶的放射分析方法测定手术切除经病理证实的18例甲状腺癌患者和17例甲状腺癌患者手术切除的肿瘤组织中PKC和PKA活性水平.结果甲状腺癌组织中胞膜和胞浆
方案5-蛋白质的胰酶消化实验
实验材料冻干的目标蛋白质试剂、试剂盒CaCl2NH4HCO3苯甲基磺酰氟(PMSF)胰酶贮存液Tween-20仪器、耗材聚丙烯试管水浴箱实验步骤1.冻干的蛋白质底物溶解在 1% 的碳酸氢铵中,控制使用尽量少的溶液体积,以达到较高的底物浓度。当蛋白质底物很微量(如小于 1mg) 时,加入 Tween-
叶明亮研究员:蛋白质组修饰谱分析新方法
中国科学院大连化学物理研究所 叶明亮研究员 2014年4月26日,首届全国质谱分析学术研讨会在北京西郊宾馆盛大开幕。来自中国科学院大连化学物理研究所的叶明亮研究员为大家带来题为《蛋白质组修饰谱分析新方法》的报告。翻译后修饰大多发生在具有重要生理调控功能的低丰度蛋白质
使用荧光底物的直接-ELISA-实验
实验概要使用荧光偶联一抗的直接 ELISA 测定的程序。实验步骤第 1 天:1. 在滤过的 PBS 中稀释包被抗体后,在每孔中加入 100 μl 进行包被。用封板膜覆盖酶标板,将酶标板在 4℃下孵育过夜。 第 2 天:2. 将 4 g Block ACE 粉末稀释于 100 ml 去离子水中,使用其
血管活性肠肽的临床意义
VIP检测常用于VIP瘤的诊断。VIP瘤是胰岛D1细胞的良性或恶性肿瘤,由于D1细胞分泌大量VIP而引起严重水泻、低钾血症、胃酸缺乏或胃酸过少,故又称为WDHA综合征。升高:见于WDHA综合征(水泻、低血钾症伴胰岛细胞腺瘤综合征)、短肠综合征、尿毒症、胰岛素瘤等。WDHA综合征主要是由于胰岛非细胞分
关于血管活性肠肽的基本介绍
血管活性肠肽(VIP),又名舒血管肠肽,是神经递质的一种,存在于中枢神经和肠神经系统中。VIP由28个氨基酸组成,主要是由肠道神经元释放。VIP在生物体内具有双重作用,既是胃肠道激素,又是神经肽。VIP功能多样,如扩张心、脑、肝血管,调节脑血流量,降低肺动脉压,降低血压,松弛支气管平滑肌,调节中
抗菌性活性肽的理化作用
天然抗菌肽通常是由30多个氨基酸残基组成的碱性小分子多肽,水溶性好,分子量大约为4000道尔顿左右。大部分抗菌肽具有热稳定性,在l00℃下加热10~15min仍能保持其活性。多数抗菌肽的等电点大于7,表现出较强的阳离子特征。同时,抗菌肽对较大的离子强度和较高或较低的pH值均具有较强的抗性。此外,
血管活性肠收缩肽的功能特点
中文名称血管活性肠收缩肽英文名称vasoactive intestinal contractor;VIC定 义在小肠中表达的一种二十一肽。对小肠收缩有较强的作用,但对血管收缩的作用较弱。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),激素与维生素(二级学科)
关于血管活性肠肽瘤-的简介
血管活性肠肽瘤又称Verner-Morrison综合征,绝大多数表现为内分泌肿瘤综合征,90%原发于胰腺,是胰岛D1细胞的良性或恶性肿瘤,由于D1细胞分泌大量血管活性肠肽(VIP)而引起严重水泻、低钾血症、胃酸缺乏或胃酸过少,故又称为WDHA或WDHH综合征。该病每年的发病率为千万分之一。平均发
诊断血管活性肠肽瘤的依据
分泌性腹泻是本病最明显的症状,水泻量大且持续时间长,尤其在禁食72小时以后腹泻仍无缓解者,有诊断价值;其他包括体重下降、腹部痉挛、皮肤潮红等。结合实验室检查、血清血管活性肠肽(VIP)测定、B超、CT、选择性胰动脉造影和经皮肝穿刺门静脉系置管取血法(PT-PC)等定位检查不难做出诊断。在本病的定
血管活性肠肽的临床意义
VIP检测常用于VIP瘤的诊断。VIP瘤是胰岛D1细胞的良性或恶性肿瘤,由于D1细胞分泌大量VIP而引起严重水泻、低钾血症、胃酸缺乏或胃酸过少,故又称为WDHA综合征。 升高:见于WDHA综合征(水泻、低血钾症伴胰岛细胞腺瘤综合征)、短肠综合征、尿毒症、胰岛素瘤等。WDHA综合征主要是由于胰岛
关于生物活性肽的基本信息
现代营养学研究发现:人类摄食蛋白质经消化道的酶作用后,大多是以低肽形式消化吸收的,以游离氨基酸形式吸收的 比例很小。进一步的试验又揭示了肽比游离氨基酸消化更快、吸收更多,表明肽的生物效价和营养价值比游离氨基酸更高。这也正是活性肽的无穷魅力所在。 生物活性肽(Bioact ive Peptide
关于芋螺毒活性肽的简介
20世纪80年代初,美国犹它大学的研究人员直接将芋螺毒组分注射到哺乳动物中枢神经系统,而抛开当时该实验室乃至大多数实验室已长期惯用的所谓的标准方法即腹腔内膜注射法(i.p.),结果显示,用颅腔注射法引发了大量的小白鼠不同的行为症状反应,这揭示了芋螺毒的药理多样性;而用i.p法,只有很小比例的小白
红细胞丙酮酸激酶活性
红细胞丙酮酸激酶活性介绍: 丙酮酸激酶为四聚体,是提供红细胞能量的重要的酶。缺乏此酶,红细胞因能量消耗而破坏。采用比色法。红细胞丙酮酸激酶活性正常值: a)比色法:10.1~20U/gHb; b)荧光斑点法:阴性。 红细胞丙酮酸激酶活性临床意义: 本试验可作为丙酮酸激酶缺陷的诊断试验。 红
注射用醋酸奥曲肽的类别和贮藏
类别同醋酸奥曲肽。规格(1)0.1mg(2)0.3mg贮藏遮光,密闭,在冷处保存。