中间丝的分离方法实验——从培养的细胞中分离Ⅰ~Ⅲ型中间丝

实验材料细胞试剂、试剂盒蛋白酶抑制剂裂解缓冲液解聚缓冲液组装缓冲液仪器、耗材匀浆器实验步骤1. 从培养皿或瓶中吸去培养基并用 5 ml 含蛋白酶抑制剂的冰冷的 PBS 洗细胞。2. 每 75cm2 瓶或培养皿用 1 ml 冰冷的裂解缓冲液 5 分钟裂解细胞。裂解缓冲液:在 PBS 中加入:1% Triton -X-1000.6 mol/L KCl10 mmol/L MgSO43. 每 ml 细胞裂解液加 0.5 mg DNA 酶Ⅰ,4℃ 冰浴 5 分钟或冰浴至细胞裂解物的黏滞度明显降低。4. 4℃ 下以 1500 g 离心裂解物 10 分钟。5. 用含有蛋白酶抑制剂并且含 5 mmol/L EDTA 的 PBS 洗沉淀物两次。6. 沉淀物在解聚缓冲液中混匀(蛋白终浓度应该大约为 1 mg/ml)并在 20℃ 搅拌 30 分钟。解聚缓冲液:10 mmol/L Tris-HCl,pH 8.08 mol/L 尿素0.2% β......阅读全文

电泳分离技术-两边翘起中间凹下形态的形成原因

主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致,多出现于较厚的凝胶中。       处理办法:待其充分凝固再作后续实验。

脐带和脐血来源干细胞的培养实验_从脐静脉分离干细胞

实验材料脐带试剂、试剂盒胶原酶培养基仪器、耗材导管实验步骤(a)在正常分娩后6〜12h内收集和处理脐带。(b)在脐静脉内插入导管,用PBSA完全地洗2次。(c)夹住远端脐带。(d)用0.1%胶原酶溶液充满静脉。(e)夹住近端脐带。(f)将脐带在37℃孵育20min。(g)轻轻按摩脐带,收集含有内皮和

从成年骨骼肌分离和培养成肌细胞实验

实验方法原理 在添加 20%(fetal bovine serum, FBS) 的 Ham's F12 培养中,原代细胞容易生长。在不改变培养条件的情况下,这些细胞增殖和分化,融合形成多个细胞核的肌管。这证明培养的细胞具有成肌性。试剂、试剂盒 Ham F12FBSD-PBSA仪器、耗材 手术

从成年骨骼肌分离和培养成肌细胞实验

分离培养细胞             实验方法原理 骨豁肌源性成肌细胞能够培养从几种成年动物骨骼肌分离的成肌细胞。在培养条件下,成肌细胞仍继续表达一些分化特征。成肌细胞称卫星细胞,分

从成年骨骼肌分离和培养成肌细胞实验

分离培养细胞             实验方法原理 骨豁肌源性成肌细胞能够培养从几种成年动物骨骼肌分离的成肌细胞。在培养条件下,成肌细胞仍继续表达一些分化特征。成肌细胞称卫星细胞,分

酵母细胞中质粒的加工实验——从酵母细胞中分离质粒

利用一个假定的突变通过互补作用克隆酵母菌基因的一般方法。该突变为cdc101-1,它对酵母菌的生长来说既是隐性的又是温度敏感的。它使酵母可以很正常地在30°C生长,而不能在37°C形成菌落。如果用一个酵母菌基因组文库转化cdc101-1菌株,通过分离温度不敏感菌落,那么就可能分离到一个可以互补这种突

1200℃精密型电阻丝实验电炉的优点

 主要包括铁铬铝合金电炉丝和镍铬合金电炉丝两大类。前者属铁素体组织的合金材料,后者属奥氏体组织的合金材料。此外,还有一些特殊用途的电热合金丝如钨丝、钼丝等实验电炉根据不同的用途,达到的不同温度,选择不同的电炉丝。  安晟实验电炉用铁铬铝电炉丝电热合金材料的特点是:  1.使用温度高,如HRE铁铬铝合

特殊细胞培养实验_单细胞分离培养法

实验方法原理从理论上说各种培养细胞都可用以进行克隆培养。但实际上,初代培养细胞和有限细胞系(二倍体细胞)比较困难。无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞等则比较容易。其原因是,当体内任何细胞被置于体外培养后,对培养环境都有一个适应过程。期间细胞对营养液具有同化作用,即从培养液中摄取营养的同时,也向培养液排

λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验

如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说,λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地

λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验

实验方法原理 如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说,λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。实验材料 噬菌体重组子大肠杆菌试剂、试剂盒 氯仿乙醇高盐缓冲液Tris-ClNaClEDT

λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验

            实验方法原理 如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说,λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。

需要RNA中间物的复制型转座

逆转录转座子都需要RNA中间物,但LTR逆转录转座子和无LTR逆转录转座子在转座的具体步骤上有很大的差别。LTR逆转录转座子进行转座时,形成cDNA的过程与逆转录病毒合成cDNA相同,双链cDNA通过剪切一黏接转座插入靶序列。无LTR逆转录转座子的转座过程较复杂,以LINE为例,转座的基本过程如下:

线粒体分离实验—从组织中分离线粒体

实验材料肝脏试剂、试剂盒MS仪器、耗材匀浆器实验步骤1. 取出肝脏,注意不要弄破胆囊。放进一置于冰上的烧杯中,剪去任何结缔组织。称其质量后放回烧杯中。用锋利的剪刀、手术刀或剃须刀片将之切成 1~2 mmol/L 的薄片,用匀浆缓冲液(1x MS) 冲洗两次以去除大部分的血。转移至匀浆器中。加入足够的

从原代组织细胞和原培养容器分离细胞的技术

一、从原代组织中分离细胞 将组织块分离(散)成细胞悬液的方法有多种,最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。 从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短,以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织,获得较高产量的有活性细胞。

新生大鼠心脏细胞的分离和培养实验

实验材料 Sprague Dawley 幼鼠试剂、试剂盒 胰酶液乙醇仪器、耗材 搅拌台烧杯实验步骤 组织消化和分离细胞1. 在细胞操作间内,放一个加热搅拌台,上放一个装有 100 ml 灭菌水的容量 600 ml 的烧杯,加热至 37℃。2. 准备胰酶液。用水浴或温箱使胰酶液温度保持在 37℃。3.

新生大鼠心脏细胞的分离和培养实验

分离及培养程序             实验材料 Sprague Dawley 幼鼠 试剂、试剂盒

新生大鼠心脏细胞的分离和培养实验

分离及培养程序             实验材料 Sprague Dawley 幼鼠 试剂、试剂盒

简述白色假丝酵母的培养

  本菌在血琼脂或沙保氏琼脂上,37℃或室温孵育2~3日后,生成灰白乳酪样菌落,涂片镜检,可看到表层为卵圆形芽生细胞,底层有较多假菌丝。若接种于4%玉蜀黍琼脂上,室温孵育3~5日可见假菌丝,芽生孢子,厚膜孢子。

原代细胞分离与培养方法介绍

  前言   凡是来源于胚胎、组织器官及外周血,经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞的培养也叫初代培养是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养,是建立细胞系的第一步,是一项基本技术。   原代细胞最接近和最能反映体内生长特性,适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。

白细胞直方图中间型细胞异常情况浅析

关键词 白细胞直方图;中间型细胞;目测分类;假阳性;假阴性目前,自动血细胞计数已普遍使用于各医院实验室,尤其是三分类的血球计数仪更为普遍。这种计数仪的原理是电阻抗法,此原理是基于细胞在测试系统中产生的脉冲大小,与仪器内设定的阈值比较而得出的数据。这些仪器不仅能检测更多的血细胞学实验结果,而且也还能提

细胞分离技术是细胞培养的基本方法

从原代组织中分离细胞 将组织块分离(散)成细胞悬液的方法有多种,最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短,以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织,获得较高产量的有活性细胞。1.胰蛋白酶 (Tryp

细胞培养的基本方法细胞分离技术(一)

细胞分离技术一、从原代组织中分离细胞 将组织块分离(散)成细胞悬液的方法有多种,最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短,以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织,获得较高产量的有活性细胞。1.胰蛋

细胞培养的基本方法细胞分离技术(二)

1.悬浮细胞 ●计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200~400g离心5分钟沉淀细胞,使用移液管移去上清到最小体积,不要搅乱细胞。 ●以1×107到5×107细胞/ml密度,在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞,或者以0.5×107到1×107在无血清培养基中,再次悬浮细胞。 ●

细胞增殖的无丝分裂

  细胞无丝分裂的过程比较简单,一般是细胞核先延长,从核的中部向内凹进,缢裂成为两个细胞核;接着,整个细胞从中部缢裂成两部分,形成两个子细胞。因为分裂过程中没有出现纺锤丝和染色体,所以叫做无丝分裂。(如蛙的红细胞)

原代细胞培养小鼠胚胎分离实验

鼠胚原代细胞培养             实验方法原理 原代细胞培养,是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,在体外培养,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物

原代细胞培养小鼠胚胎分离实验

鼠胚原代细胞培养             实验方法原理 原代细胞培养,是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,在体外培养,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物

原代细胞培养小鼠胚胎分离实验

原代细胞培养可应用于:(1)分子生物学;(2)细胞生物学;(3)遗传学;(4)免疫学;(5)肿瘤学;(6)病毒学等领域。实验方法原理原代细胞培养,是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,在体外培养,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物体内取出所需的组织(或器官),经胰酶消化,

胰腺上皮细胞分离及培养实验

实验方法原理从豚鼠胰腺组织分离细胞,用纱布或尼龙网过滤细胞悬液,将过滤的细胞悬液轻轻加于 BSA 液上面。通过 3 次连续离心和混悬细胞,使呈团状的细胞分散。然后,将细胞接种于涂有胶原蛋白的培养器皿。试剂、试剂盒F12K 组织培养液含有 20% 小牛血清HBSSHBSS-DVC葡萄糖胰蛋白酶液胰蛋白

牙髓干细胞的分离培养

实验方法原理 实验材料 牙试剂、试剂盒 灭菌无Ca2+和Mg2+的PBS(PBSA)MSC培养基消毒液(如聚维酮碘)仪器、耗材 非灭菌使用高速牙科钻时的装备(如空气压缩机)培养皿精细镊(小号和大号)牙科碳化钻头牙挖器高速牙科钻实验步骤 (a)用PBSA洗三遍,充分清洁牙齿表面。(b)用消毒液消毒,然

牙髓干细胞的分离培养

牙隨组织的分离 牙髓干细胞DPSCs/乳牙干细胞SHED的原代培养 DPSCs的传代培养             实验方法原理