DPBSA的配制与灭菌
实验方法原理不断地搅拌将干粉溶解，调整至终体积，检测 pH 和传导率，按预订量分装进行高压灭菌。I>PBS 干粉实验材料D-PBS 干粉超纯水试剂、试剂盒搅拌粒仪器、耗材容器抽吸器硼硅酸盐玻璃器皿传导率测量仪或渗透压计pH 计高压灭菌器高压灭菌胶带或无菌指示标签实验步骤1. 在容器中加入1L 超纯水。2. 将容器放到磁力搅拌器上，转速设定为20 r/min 左右。3 . 打开 D-PBS 干粉的包装或取 10 个药片，慢慢地加人容器中边加入边搅拌。4. 一直搅拌到干粉完全溶解。5. 检测样品的 pH 和传导率，并做记录。(a) pH 的变化不应超过 0.1 个单位（不同的配方 pH 可能不同）。(b)传导率的变化不应超过 15 μS/cm 的 5% 。也可选择测定渗透压（或都测），每批之间应该显示类似的传导率。(c)丢弃测量用样品，注意不要加回到原液中。6. 将容器中的液体分装到有刻度的瓶子中。7 . 盖好瓶盖，密封。用带......阅读全文
Nunc细胞工厂
实验方法原理用培养液制备细胞悬液，将悬液注入单元的各小室内。使长边朝下，放置。将单元旋转 90度，放平后用 CO2 充气。然后封闭，进行培养。实验材料单层细胞0.25%天然胰蛋白酶D-PBSA试剂、试剂盒生长培养液仪器、耗材Nunc细胞工厂硅酮管和连接器血细胞计数板或电子细胞计数器和计数用液体实验步
Nunc细胞工厂
Nunc细胞工厂 实验方法原理 用培养液制备细胞悬液，将悬液注入单元的各小室内。使长边朝下，放置。将单元旋转 90度，放平后用 CO2 充气。然后封闭，进行培
藻酸盐包被
实验方法原理 用胰蛋白酶消化 75 cm2 培养瓶中的细胞，计数后与藻酸盐溶液混合。用注射器将藻酸盐细胞悬液滴加入氯化钙溶液，制成微珠，然后悬浮培养。实验材料 D-PBSA胰蛋白酶试剂、试剂盒 适合细胞生长的培养液藻酸钠溶液仪器、耗材 无菌滤器实验步骤 盐溶液，含有：(a)NaCl，8.0 g(b)
Nunc细胞工厂
实验方法原理 用培养液制备细胞悬液，将悬液注入单元的各小室内。使长边朝下，放置。将单元旋转 90度，放平后用 CO2 充气。然后封闭，进行培养。 实验材料
藻酸盐包被
实验方法原理 用胰蛋白酶消化 75 cm2 培养瓶中的细胞，计数后与藻酸盐溶液混合。用注射器将藻酸盐细胞悬液滴加入氯化钙溶液，制成微珠，然后悬浮培养。 实验材料
培养瓶中单层培养细胞生长曲线的绘制
实验方法原理 开始一系列的培养，每天在一定的时间计数细胞直至它们到达平台期。 实验步骤 材料 无菌 单层细胞培养，A549,Vem 或 HeLa-S3,
藻酸盐包被
用胰蛋白酶消化 75 cm2 培养瓶中的细胞，计数后与藻酸盐溶液混合。用注射器将藻酸盐细悬液滴加入氯化钙溶液，制成微珠，然后悬浮培养。实验方法原理用胰蛋白酶消化 75 cm2 培养瓶中的细胞，计数后与藻酸盐溶液混合。用注射器将藻酸盐细胞悬液滴加入氯化钙溶液，制成微珠，然后悬浮培养。实验材料D-PBS
动物细胞培养
动物细胞培养 基本练习 2.2 无菌技术I：吸取与移液 练习2 细胞培养介绍 2.2 无菌技术I：吸取与移液 练习3无菌技术II：准备培养基 练习4：单层细胞的换液 练习5：玻璃器皿的清洗和灭菌 练习
方案18.3－细胞增殖的密度限制实验
实验方法原理 细胞在无限制培养基中培养，生长至包和密度。用放射自显影测定 3 H-胸腺嘧啶脱氧核苷标记细胞的百分比。 实验材料 传代用的细胞
淋巴细胞的分离
实验方法原理 通过右旋糖酐促沉降作用去除红血细胞后，将枸橼酸或肝素抗凝的全血或血浆层加在致密的 Ficoll-Hypaque 层上面。离心后，大部分淋巴细胞位于 Ficoll-Hypaque 和血浆之间的界面。实验材料 肝素或枸橼酸抗凝的血液样本D-PBSAFicoll-Hypaque试剂、试剂盒
贴壁效率的测定实验
实验方法原理以低密度接种细胞，温育直至集落形成，染色与计数集落实验步骤材料无菌生长液 400 ml0.25% 粗制胰蛋白酶 10 mlPetri 培养皿，6 cm 20 个试管或通用玻璃容器，稀释用 20 个非无菌血球计数板或电子计数仪固定液：无水甲醇 100 mlD-PBSA 200 ml染料：结
细胞增殖的密度限制实验
实验方法原理细胞在无限制培养基中培养，生长至包和密度。用放射自显影测定 3 H-胸腺嘧啶脱氧核苷标记细胞的百分比。实验材料传代用的细胞 试剂、试剂盒生长培养基
乳腺上皮细胞培养
实验方法原理 在内源性巨噬细胞存在的条件下，将经离心得到的哺乳早期的乳汁上皮细胞放入营养丰富的培养液中培养，并可用混合性蛋白酶螯合液传代。试剂、试剂盒 RPMI 1640胎牛血清人血清胰岛素氢化可的松霍乱毒素胰蛋白酶液仪器、耗材 培养瓶 离心管实验步骤 材料无菌1. 生长培养液：RPMI 16402
乳腺上皮细胞培养实验
实验方法原理在内源性巨噬细胞存在的条件下，将经离心得到的哺乳早期的乳汁上皮细胞放入营养丰富的培养液中培养，并可用混合性蛋白酶螯合液传代。试剂、试剂盒RPMI 1640 胎
方案27.1－淋巴细胞的分离
通过右旋糖酐促沉降作用去除红血细胞后，将枸橼酸或肝素抗凝的全血或血浆层加在致密的 Ficoll-Hypaque 层上面。离心后，大部分淋巴细胞位于 Ficoll-Hypaque 和血浆之间的界面。实验方法原理通过右旋糖酐促沉降作用去除红血细胞后，将枸橼酸或肝素抗凝的全血或血浆层加在致密的 Ficol
乳腺上皮细胞培养实验
实验方法原理在内源性巨噬细胞存在的条件下，将经离心得到的哺乳早期的乳汁上皮细胞放入营养丰富的培养液中培养，并可用混合性蛋白酶螯合液传代。试剂、试剂盒RPMI 1640胎牛血清人血清胰岛素氢化可的松霍乱毒素胰蛋白酶液仪器、耗材培养瓶离心管实验步骤材料无菌1. 生长培养液：RPMI 16402. 胎牛血
方案23.3－乳腺上皮细胞培养实验
乳腺上皮细胞培养 实验方法原理 在内源性巨噬细胞存在的条件下，将经离心得到的哺乳早期的乳汁上皮细胞放入营养丰富的培养液中培养，并可用混合性蛋白酶螯合液传代。
多孔培养板中单层培养细胞生长曲线
实验方法原理 以三种不同的细胞浓度在多孔板中培养三组细胞，在达到平台期之前，每天计数一个板中的细胞。 实验步骤 材料 无菌 单层细胞培养：A549、V
利用单拷贝基因组探针及染色体彩绘进行荧光原位杂交
实验材料SSCD-PBSA糖原RNase多聚甲醛甲酰胺试剂、试剂盒固定液乙醇杂交缓冲液标记探针橡胶乳黏剂封固剂实验步骤含有重复序列探针的沉淀：大分子量黏粒探针往往含有重复序列，如果在杂交前不能封闭这些序列，将导致严重的非特异性杂交背景。人 Cot1 DNA 富含重复序列，可对黏粒的重复序列产生竞争性
利用单拷贝基因组探针及染色体彩绘方法进行荧光原位...
利用单拷贝基因组探针及染色体彩绘方法进行荧光原位杂交（FISH）实验材料 SSCD-PBSA糖原RNase多聚甲醛甲酰胺试剂、试剂盒 固定液乙醇杂交缓冲液标记探针橡胶乳黏剂封固剂实验步骤 含有重复序列探针的沉淀：大分子量黏粒探针往往含有重复序列，如果在杂交前不能封闭这些序列，将导致严重的非特异性杂交
温胰蛋白酶解离组织
实验方法原理 组织切碎后于胰蛋白酶中搅拌数小时，每隔半小时收集已分离的细胞，离心后加入含血清的培养基。 实验材料 组织 DBSS
温胰蛋白酶解离组织
实验方法原理组织切碎后于胰蛋白酶中搅拌数小时，每隔半小时收集已分离的细胞，离心后加入含血清的培养基。实验材料组织DBSS粗制胰蛋白酶D-PBSA试剂、试剂盒生长培养基皮氏平皿仪器、耗材培养瓶离心管瓶子磁力搅拌机镊子移液管血球计数仪实验步骤1. 将组织（1~5 g）移入加有新配制的无菌 DBSS （5
电穿孔法稳定转染
实验材料L8057-Y10细胞D-PBSA仪器、耗材培养瓶培养板F12 FB培养基G418(Invitrogen)选择性培养基电穿孔电穿孔专用杯电穿孔仪II电穿孔仪-II配套的效能扩增器-Plus实验步骤表达载体与 DNA 制备：pSVTKGH，线性化 [ Selden et al.，1986]此载
温胰蛋白酶解离组织
方案12.5 温胰蛋白酶解离组织实验方法原理组织切碎后于胰蛋白酶中搅拌数小时，每隔半小时收集已分离的细胞，离心后加入含血清的培养基。实验材料组织 DBSS
电穿孔法稳定转染
方案27.12 脂质体介导的瞬时转染 实验材料 L8057-Y10细胞 D-PBSA
电穿孔法稳定转染
实验材料 L8057-Y10细胞 D-PBSA 仪器、耗材 培养瓶 培养板
染料排斥法测定细胞生存力实验
实验方法原理萘黑、台盼蓝以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透过活细胞。将细胞悬液与染料混匀，在低倍显微镜下检査。试剂、试剂盒胰蛋白酶仪器、耗材巴斯德吸管 显微镜 手执计数器 生存力染料 血细胞计数板实验步骤材料无菌受试细胞，如胰蛋白酶消化的贴壁细胞、融化冷冻的细胞或原代离散
悬浮培养细胞生长曲线的绘制实验
实验方法原理以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养，每天计数细胞直至平台期。实验步骤 材料 无菌 悬浮细胞培养 培养液，l00 ml D-PBSA(细胞计数用） 24 孔板 非无菌 装培养板的塑料盒 CO2 温箱或 5% C02 以充盈塑料盒 操作步骤 1. 如单层培养那样（见方案 21.8
方案－21.9－悬浮培养细胞生长曲线的绘制实验
方案21.9 悬浮培养细胞生长曲线的绘制 实验方法原理 以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养，每天计数细胞直至平台期。
方案22.1－染料排斥法测定细胞生存力实验
实验方法原理 萘黑、台盼蓝以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透过活细胞。将细胞悬液与染料混匀，在低倍显微镜下检査。 试剂、试剂盒