制备肌动蛋白实验——由骨骼肌丙酮粉制备肌动蛋白
实验材料骨骼肌丙酮粉试剂、试剂盒肌动蛋白解聚缓冲液仪器、耗材超速离心机实验步骤1. 准备贮存液和材料0.1 mol/L K+ATP,pH 7.00.1 mol/L DTT(冻存在 -20℃,避免反复冻融)0.1 mol/L CaCl20.1 mol/L Tris-HCl,pH 8.0肌动蛋白解聚缓冲液(惯称冷缓冲液 A):2 mmol/L Tris-HCI,pH 8.00.2 mmol/L ATP0.5 mmol/L DTT0.2 mmol/L CaCl2该缓冲液可以配制成不含 CaCl2 的 50x 贮存液并冻存(-20℃ )。2. 10 g 肌肉丙酮粉(用上文方法制备)和 200 ml 缓冲液 A 混合并在 0℃ 搅拌抽提 30 分钟。3. 不溶的碎片离心(SS-34 转头,16000 r/min,19950 g)10 分钟。4. 保留上清,0℃ 下在 20 ml 缓冲液 A 里重新抽提沉淀物 10 分钟。5. 再......阅读全文
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验
实验材料 冷冻肌肉试剂、试剂盒 肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材 玻璃器皿实验步骤 1. 准备下面的贮存液(都冷却到 4℃)。肌球蛋白抽提溶液:0.5 mol/L KCl,0.1 mol/L K2HPO4几升冷的用玻璃器皿蒸馏过的水(dH2O)4 mol/L KCl0.5 mol/L KCI0.5 mol
细胞肌动蛋白的遗传性能
结构蛋白的主要相互作用是基于钙粘蛋白的粘附连接。肌动蛋白丝通过纽 蛋白与α- 肌动蛋白和膜连接。 纽蛋白的头部结构域通过α-连环蛋白 , β-连环蛋白和γ-连环蛋白与E-钙粘蛋白结合 。 纽蛋白的尾部结构域与膜脂质和肌动蛋白丝结合。肌动蛋白是整个进化过程中最高度保守的蛋白质之一,因为它与大量其他蛋白
肌动蛋白的遗传性能介绍
结构蛋白的主要相互作用是基于钙粘蛋白的粘附连接。肌动蛋白丝通过纽 蛋白与α -肌动蛋白和膜连接。 纽蛋白的头部结构域通过α-连环蛋白 , β-连环蛋白和γ-连环蛋白与E-钙粘蛋白结合 。 纽蛋白的尾部结构域与膜脂质和肌动蛋白丝结合。 肌动蛋白是整个进化过程中最高度保守的蛋白质之一,因为它与大量
肌动蛋白的特性和存在形式
肌动蛋白是一类形成微丝的球状多功能蛋白质 。它基本上存在于所有真核细胞中 ,其中它可以以超过100μM的浓度存在;其质量约为42kDa,直径为4至7nm。
细胞肌动蛋白的具体形式
细胞肌动蛋白有两种形式:称为G-肌动蛋白的单体小球和称为F-肌动蛋白的聚合物长丝(即,由许多G-肌动蛋白单体组成的长丝)。 F-肌动蛋白也可以描述为微丝。两条平行的F-肌动蛋白链必须旋转166度才能正确地位于彼此的顶部。这产生了在细胞骨架中发现的微丝的双螺旋结构。 微丝的直径约为7nm ,螺旋每37
细胞肌动蛋白的功能和位置
肌动蛋白形成细丝('F-肌动蛋白'或微丝),其是真核细胞骨架的必需元件,能够经历非常快速的聚合和解聚动力学。在大多数细胞中,肌动蛋白丝形成更大规模的网络,这对于细胞中的许多关键功能是必不可少的:各种类型的肌动蛋白网络(由肌动蛋白丝制成)为细胞提供机械支持,并提供通过细胞质的运输途径以
肌动蛋白的结构和功能特点
它的氨基酸序列也是最高度保守的蛋白质之一,因为它在进化过程中几乎没有变化 ,在藻类和人类等多种物种中的差异不超过20%。它有两个显着特征:它是一种缓慢水解 ATP的酶 ,是生物过程的“通用能量货币”。 但是,ATP是必需的,以保持其结构完整性。其高效的结构由几乎独特的折叠过程形成。此外,它能够比任何
肌动蛋白的功能和位置介绍
肌动蛋白形成细丝('F-肌动蛋白'或微丝),其是真核细胞骨架的必需元件,能够经历非常快速的聚合和解聚动力学。在大多数细胞中,肌动蛋白丝形成更大规模的网络,这对于细胞中的许多关键功能是必不可少的: 各种类型的肌动蛋白网络(由肌动蛋白丝制成)为细胞提供机械支持,并提供通过细胞质的运
肌肉收缩蛋白质的制备
肌球蛋白分子能够尾部对尾部地聚集,然后平行排列成肌原纤维的粗丝,分子的头部伸出粗丝的表面,形成与细丝联结的“横桥”。在横纹肌的肌原纤维中两个肌球蛋白分子头部间的距离是14.3纳米,而头部在粗丝上分布的周期是42.9纳米。这是粗丝面向同一方向的两个头部之间的间距。 平滑肌的肌球蛋白其大小和形状和
肌动蛋白(Actin)动力学调节机制
细胞骨架的定义分为狭义和广义两种,前者是微丝,微管和中间纤维的总称,它们存在于细胞质内,又被称为“胞质骨架”。后者还包括细胞外基质(extracellular matrix)、核骨架(nucleoskeleton)和核纤层(nuclear lamina)。细胞骨架是细胞内运动,细胞器固定,细胞外型维
肌动蛋白丝的微观结构简介
微丝是双股肌动蛋白丝以螺旋的形式组成的纤维,直径为7纳米,螺距为36纳米,两股肌动蛋白丝是同方向的。肌动蛋白纤维也是一种极性分子,具有两个不同的末端,一个是正端,另一个是负端。 微丝与它的结合蛋白(binding protein)以及肌球蛋白(myosin)三者构成化学机械系统,利用化学能产生
肌动蛋白丝的化学结成介绍
肌动蛋白单体(又被称为G-Actin,全称为球状肌动蛋白,Globular Actin,下文简称G肌动蛋白)为球形,其表面上有一ATP结合位点。肌动蛋白单体一个接一个连成一串肌动蛋白链,两串这样的肌动蛋白链互相缠绕扭曲成一股微丝。这种肌动蛋白多聚体又被称为纤维形肌动蛋白(F-Actin,Fibr
关于肌动蛋白丝的功能简介
微丝除参与形成肌原纤维外还具有以下功能: 形成应力纤维 非肌细胞中的应力纤维(stress fiber)与肌原纤维有很多类似之处:都包含肌球蛋白II、原肌球蛋白、细丝蛋白和α-辅肌动蛋白。培养的成纤维细胞中具有丰富的应力纤维,并通过粘着斑固定在基质上。在体内应力纤维使细胞具有抗剪切力。 小
小鼠β肌动蛋白(βactin)酶联免疫分析(ELISA)
小鼠β-肌动蛋白(β-actin)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中β-肌动蛋白(β-actin)含量。实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠β-肌动蛋白(β-actin)水平。用纯化的小鼠
肌动蛋白动力学信号通路研究背景
细胞外信号通过G蛋白偶联受体(GPCR)、整合素和受体酪氨酸激酶(RTK)调节肌动蛋白动力学。GPCR构成了一个受体的大蛋白家族,它感知细胞外的分子并激活细胞内的信号转导途径,最终激活细胞反应。整合素是跨膜受体,是细胞间和细胞外基质相互作用的桥梁。当被触发时,整合素反过来触发通向内部的化学途径(信号
肌动蛋白丝的组装过程简介
微丝能被组装和去组装。当单体上结合的是ATP时,就会有较高的相互亲和力,单体趋向于聚合成多聚体,就是组装。而当ATP水解成ADP后,单体亲和力就会下降,多聚体趋向解聚,即是去组装。高ATP浓度有利于微丝的组装。所以当将细胞质放入富含ATP的溶液时,细胞质会因为微丝的大量组装迅速凝固成胶。而微丝的
制备克隆实验
试剂、试剂盒 ATP -巯基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 连接缓冲液 T4DNA 连接酶
制备电泳实验
洗脱 连续电泳 等电聚焦制备电泳 实验方法原理 严格来说洗脱不能达到制备的目的,它只能得到微克到毫克级的样品。通常是用其他方法分离的粗样品
制备电泳实验
实验方法原理 严格来说洗脱不能达到制备的目的,它只能得到微克到毫克级的样品。通常是用其他方法分离的粗样品通过某种电泳方法进一步分离纯化后,再用扩散洗脱或电泳洗脱收集纯样品,继而用作其他分析的需要。实验材料 凝胶切片仪器、耗材 解剖刀匀浆器实验步骤 1. 扩散洗脱扩散洗脱是用解剖刀或匀浆器将凝胶切片捣
制备克隆实验
试剂、试剂盒ATP-巯基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶连接缓冲液T4DNA 连接酶平末端插入物克隆载体培养基仪器、耗材FALCON 2059 多聚丙烯试管37°C 恒温箱水浴箱实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ATP(10 mmol/L)β-巯基乙醇(可选择)IPTG(100 mmol/L
血清制备实验
抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清,一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。高效价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。实验材料血仪器、耗材低温离心机4℃冰箱试管–80℃低温储藏箱实验步骤1. 取血后,37℃下,让血液凝固1 到2 小时(不加抗凝剂);2. 4℃冰箱过夜(让
制备克隆实验
试剂、试剂盒 ATP-巯基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶连接缓冲液T4DNA 连接酶平末端插入物克隆载体培养基仪器、耗材 FALCON 2059 多聚丙烯试管37°C 恒温箱 水浴箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ATP(10 mmol/L)β-巯基乙醇(可选择)IPTG(100 mm
血清制备实验
实验材料 血仪器、耗材 低温离心机4℃冰箱试管–80℃低温储藏箱实验步骤 1. 取血后,37℃下,让血液凝固1 到2 小时(不加抗凝剂);2. 4℃冰箱过夜(让血块固缩);3. 当血清自然析出后, 4℃,3000 转/分,离心10 分钟,分离血清,弃去不溶物;4. 将血清移至一干净试管,并分装成小份
血清制备实验
血清制备实验 实验材料 血 仪器、耗材
铜丝或铜粉硝化制备方法介绍
将铜丝或铜粉溶于6mol/L硝酸中保持铜稍过量,加热至溶液pH值3-4,以除去氢氧化铁沉淀,然后与10%(质量)的碳酸钠溶液混合,加热沸腾,有碱式盐析出,弃去上层清液,用水充分洗涤、过滤、干燥。将干燥的碱式碳酸铜在充分搅拌下于小火加热分解为黑色氧化铜粉末。
制备电泳实验——等电聚焦制备电泳
实验方法原理等电聚焦制备电泳是一种非变性制备技术。由于等电聚焦电泳技术的特点,因而是一种理想的制备方法。试剂、试剂盒电极液两性电解质Ultrodex实验步骤一、液体介质垂直柱状蔗糖密度梯度等电聚焦是原瑞典 LKB 公司早期用于制备和分析目的的等电聚焦方法。载体两性电解质在蔗糖密度梯度柱中形成 pH
ACTL6A肌动蛋白的结构特点及作用
该基因编码肌动蛋白相关蛋白(arps)的一个家族成员,与传统肌动蛋白具有显著的氨基酸序列同源性。肌动蛋白和ARPs都有肌动蛋白折叠,这是ATP结合裂缝,是一个共同的特征ARPs参与多种细胞过程,包括囊泡转运、纺锤体定向、核迁移和染色质重塑该基因编码哺乳动物BAF(BRG1/brm相关因子)复合物的5
ACTG2肌动蛋白的结构特点及作用
肌动蛋白是高度保守的蛋白质,参与各种类型的细胞运动和维持细胞骨架。脊椎动物中有三种肌动蛋白,α,β和γ。α-肌动蛋白存在于肌肉组织中,是收缩装置的主要组成部分β和γ-肌动蛋白在大多数细胞类型中共存,作为细胞骨架的组成部分,并作为细胞内运动的调节剂。这个基因编码肌动蛋白γ2;在肠组织中发现的一种平滑肌
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白纯化实验_DEAE纯化肌肉肌球蛋白
实验材料肌肉肌球蛋白试剂、试剂盒焦磷酸钠柱平衡缓冲液柱缓冲液高盐缓冲液肌球蛋白-DEAE 透析缓冲液仪器、耗材SDS-PAGE实验步骤一、准备 DEAE 柱和材料1. 准备贮存液和材料200 mmol/L 焦磷酸钠(NaPPi ),pH 7.0用 HCl 和 H3PO4 调 NaPPi 溶液的 pH
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验——肌球蛋白的纯化
实验材料冷冻肌肉试剂、试剂盒肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材玻璃器皿实验步骤1. 准备下面的贮存液(都冷却到 4℃)。肌球蛋白抽提溶液:0.5 mol/L KCl,0.1 mol/L K2HPO4几升冷的用玻璃器皿蒸馏过的水(dH2O)4 mol/L KCl0.5 mol/L KCI0.5 mol/L C