培养细胞的染色实验——Giemsa染色法
实验方法原理Giemsa 染色是最常用的方法之一,它简便、快速,适用于多种细胞和染色体染色。试剂、试剂盒Giemse甘油甲醇Sorensen仪器、耗材滴管玻璃片实验步骤1. 染液制备(1)称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml,在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合,研磨至无颗粒;(2)再将剩余甘油混在一起;56 ℃保温2 小时后,加入33 ml纯甲醇,保存于棕色瓶内。2. 染色步骤(以盖片培养法或涂片法为例)(1)用pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液,按1:9 比例取Giemsa染液和Sorensen缓冲液混合配成染色液;(2)细胞标本用甲醇固定10 分钟,或1:3醋酸/甲醇固定30 分钟,用滴管把染色液布满玻片上(注意不要有气泡,用染色缸染色亦可);(3)染10~15 分钟后,用自来水冲去玻片上多余的染料,空气干燥、二甲苯透明、光学树脂胶封固。3. 结果胞核染成紫红色或蓝......阅读全文
蛋白质凝胶染色法实验
实验步骤总蛋白质的检测1. 总蛋白质色度法染色简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群,使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度,那么银染法是可选择的色度方法。如果需要对切下的蛋白质进行质谱分析,则首选不会引入共价蛋白
蛋白质凝胶染色法实验
实验步骤 总蛋白质的检测 1. 总蛋白质色度法染色 简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群,使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度,那么银
细菌芽孢染色实验_Schaeffer-Fulton-氏染色法
实验方法原理用着色力强的染色剂孔雀缘或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内卡进入菌体的染料经水洗后被脱色,而芽孢一经着色难以被水洗脱当用对比度大的复染剂染色后,芽孢仍保留初染剂的颜色,而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色,使芽孢和菌体更易于区分。实验材料蜡样芽孢杆菌(约2d 营
染料染色法测定细胞数
结晶紫检测法: 1、在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104~10×4 WEHI-164细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液),37℃ 5% CO2的二氧化碳培养箱中培养2~3小时,让细胞帖壁。 2、用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品,根据需要3
原代悬浮细胞吉姆萨染色法
原代悬浮细胞吉姆萨染色法涂片法:1. 用含有5%—10%血清的等渗液将培养的细胞调制成密度为106个/ml的细胞悬液;2. 将1滴细胞悬液滴于一张载玻片的一端,用另一块干净的载玻片,按照血液涂片法将细胞铺展于载玻片上;3. 载玻片在空气中干燥后,再用甲醇固定;4. 对涂有细胞的载玻片进行染色;5.
原代悬浮细胞吉姆萨染色法
原代悬浮细胞吉姆萨染色法涂片法:1. 用含有5%—10%血清的等渗液将培养的细胞调制成密度为106个/ml的细胞悬液;2. 将1滴细胞悬液滴于一张载玻片的一端,用另一块干净的载玻片,按照血液涂片法将细胞铺展于载玻片上;3. 载玻片在空气中干燥后,再用甲醇固定;4. 对涂有细胞的载玻片进行染色;5.
姐妹染色单体分化染色实验
实验概要本文介绍了姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)的实验原理、操作步骤及注意事项等。实验原理姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)是20世纪70年代中期发展起来的染色体处
革兰氏染色法的染色原理
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类,是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G-菌,是因为一般认为革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。 通过初染和媒染后,细胞内形成了不溶于水的结晶紫一碘大分子复合物。革兰氏阳性细菌由
培养细胞染色体显示法实验
实验方法原理 培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和制出标本清晰度高等优点,是制备染色体极好的对象。实验材料 细胞试剂、试剂盒 HanksNaHCO3培养基血清秋水仙素仪器、耗材 酒精灯镊子培养瓶吸管离心管实验步骤 1. 培养细胞取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80 %~90 %汇合单层培养细胞;
细胞骨架观察实验—抗管蛋白免疫染色法
实验方法原理细胞骨架微管的主要成分主要为管蛋白(Tublin),用免疫荧光法能显出其清晰结构。实验材料细胞试剂、试剂盒PBS丙酮甲醛仪器、耗材碟皿恒温箱实验步骤1. 细胞培养用支持物细胞培养法,把细胞培养在小盖片上;2. 漂洗用镊子挟出小盖片,在温PBS中漂洗3 次,每次30 秒;3. 固定在
光学显微镜检测肿瘤细胞形态实验——HE染色法
实验方法原理HE染色也称苏木精-伊红染色,它是常规染色。苏木精是一种天然染料,它本身并不能染色,在经氧化后变成苏木红才是真正的染料,苏木对细胞核的亲和力并不强,而在媒染剂的帮助下才能较好显示细胞核,此时细胞核呈红色,只有在碱性环境中,苏木才变成蓝色。伊红Y是人工全盛染料,它可能是通过渗透或弥散作用完
革兰氏染色液染色法
1.葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液。 2.结晶紫染色液。 3.革兰氏碘液。 4.95%酒精。 5.番红染液。 6.载玻片。方 法 一、涂片标本的制备(见实验一) 二、革兰氏染色法 1.初染:在上述已固定的涂片上,滴加结晶紫染液,染色1分钟,水洗
细菌芽孢染色实验_改良的SchaefferFulton-氏染色法
实验方法原理用着色力强的染色剂孔雀缘或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内卡进入菌体的染料经水洗后被脱色,而芽孢一经着色难以被水洗脱当用对比度大的复染剂染色后,芽孢仍保留初染剂的颜色,而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色,使芽孢和菌体更易于区分。实验材料蜡样芽孢杆菌(约2d 营
姐妹染色单体分化染色法
1. 实验原理 姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)是20世纪70年代中期发展起来的染色体处理技术。1973年Latt在培养的细胞中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromode Oxyurdine,BrdU),用Hoechst 3
原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法
实验方法原理苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度,如果染料与含有脂类的试样接触,便有大量染料进入脂类物质的结构内,使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色,使脂质呈色。也可用四氧化锇染色,脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。实验材料细胞样品试剂
原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法
原理:苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度,如果染料与含有脂类的试样接触,便有大量染料进入脂类物质的结构内,使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色,使脂质呈色。也可用四氧化锇染色,脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。 配制试剂:1.苏丹红Ⅲ染
原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法
实验方法原理 苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度,如果染料与含有脂类的试样接触,便有大量染料进入脂类物质的结构内,使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色,使脂质呈色。也可用四氧化锇染色,脂肪酸或
原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法
原理:苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度,如果染料与含有脂类的试样接触,便有大量染料进入脂类物质的结构内,使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色,使脂质呈色。也可用四氧化锇染色,脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。配制试剂:1.苏丹红Ⅲ染色
革兰氏染色法
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立。细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌(G+),后者为革兰氏阴性菌(G—)。为观察方便,脱色后再用一种红色染料
肺结核患者痰标本抗酸染色实验_抗酸染色法
实验方法原理分枝杆菌一般不易着色,经加温或延长染色时间而着色后,能抵抗酸酒精的脱色作用,故又称抗酸杆菌。对人有致病性的分枝杆菌主要是结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌。实验步骤1. 取痰中粘稠脓性或干酪样带血丝部分涂片(略厚),自然干燥后,通过火焰固定,于涂片外周用蜡笔划圆。 2. 用木夹持玻片,滴加石
血细胞化学染色的染色法—α醋酸萘酚酯酶染色(αNAE)的介绍
(1)血细胞化学染色的染色法—α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)的原理:α-醋酸萘酚酯酶能将基质液中的α-醋酸萘酚水解,产生α-萘酚,再与重氮染料偶联,可形成不溶性的有色沉淀,沉淀于细胞质中。 (2)血细胞化学染色的染色法—α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)的操作方法:将甲醛生理盐水滴加在2张
原代细胞的脂类染色方法苏丹红Ⅲ染色法的染色步骤
1.用Hanks液漂洗盖玻片3次;2.用甲醛钙固定液固定20min;3.用蒸馏水漂洗盖玻片3次;4.用70%乙醇将盖玻片冲洗3次;5.用苏丹红Ⅲ染色液覆盖盖片样品,染色10—30min;6.用70%乙醇漂洗盖片3次;7.用甘油明胶封片后观察;
关于PI单染色法的实验原理介绍
1、PI单染色法— 细胞核的改变:由于凋亡细胞核的改变,造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究表明,用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色,其DNA可染性降低。许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。 2、PI单染色法— 光散射特性:凋亡细胞形态上
关于PI单染色法的实验步骤介绍
1、PI单染色法— 收集细胞{数目约(1~ 5)×106个/mL},500 ~ 1000 r/min离心5min,弃去培养液。 2、PI单染色法— 3ml PBS洗涤1次。 3、PI单染色法— 离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1—2小时。 4、PI单染色法— 离心弃去固定
培养细胞的染色实验——吖啶橙染色荧光观察法
实验方法原理吖啶橙(Acridine Oringe:AO)是一种常用荧光染料,用于直接染色观察活细胞或固定染色观察细胞均可。吖啶橙对DNA和RNA都能染色,快速、简便和有一定的特异性。吖啶橙对活细胞毒性小,配成2×10-4~1×10-4 可用于直接染色观察法更好。实验材料细胞试剂、试剂盒酒精PBSC
蛋白质凝胶染色法实验(四)
(3) 用 10% 〇 //V ) 甲醇、7 % ( V /V ) 乙酸进行简单的凝胶脱色。利用基于微波炉的方案可以加快染色过程的进行。 SYPRO R uby 蛋白质凝胶染料具有相对较高的消光系数和量子产率,因此它十分亮眼, 化学稳定性和光稳定性都很高。光谱的激发可借助紫外线或是蓝光光源;
蛋白质凝胶染色法实验(二)
关键步骤通常如下所述。(1) 固定凝胶,以固定蛋白质条带,并移除凝胶中的干扰物质, 如 S D S 、缓冲液和盐,这些物质会结合银并造成背景染色。(2) 用能够结合蛋白质并提高银结合能力的物质, 或是能够干扰剩余未结合的银造成的背景染色的物质来孵育凝胶。总之,这些各种各样的方法都和敏化作用有关。(3
蛋白质凝胶染色法实验(三)
尼罗红蛋白质凝胶染色剂尼罗红 (Nile red) 是一种吩囉嗪酮类染料, 当其从水转入到疏水环境,如 S D S 微粒或蛋白质-S D S 复合物中时,便显示出强烈的荧光增强作用。尼 罗 红 不 会 与 S D S 单体发生显著作用》利用这一特点开发出了一种适合 S D S 凝胶的迅速
蛋白质凝胶染色法实验(五)
磷 蛋 白 的 检 测作为基本的细胞信号机制, 指定氨基酸残基的可逆磷酸化作用的重要性已无需争辩。当前磷蛋白染料具有受ZL保护的构型,即磷酸基结合部分共价连接于荧光团。检测的方式是选择性结合磷酸化的氨基酸,但是没有荧光增强作用。从某种程度上讲, 许多可溶的荧光复合物都可作为总蛋白质染色剂
蛋白质凝胶染色法实验2
2. 总蛋白质荧光法染色荧光染色法结合了检测灵敏度 (可与银染法媲美) 与染色流程简便性 (与考马斯亮蓝染 色 或 Z n 2+ 反染法相同),且其线性定量范围较比色法大 10〜100 倍 。检测依赖于仪器,需要一个单色激发光源、能将波长较长的发射光从波长较短 (也更亮)的激发光中分离出来的选择性光