培养细胞的染色实验——吖啶橙染色荧光观察法

实验方法原理吖啶橙(Acridine Oringe:AO)是一种常用荧光染料,用于直接染色观察活细胞或固定染色观察细胞均可。吖啶橙对DNA和RNA都能染色,快速、简便和有一定的特异性。吖啶橙对活细胞毒性小,配成2×10-4~1×10-4 可用于直接染色观察法更好。实验材料细胞试剂、试剂盒酒精PBSCaCl2醋酸实验步骤1. 用盖片单层培养细胞,从瓶中取出后速用温Hanks液漂洗3~5 秒,以去除培养基中血清(于此步可进行直接染色观察活细胞);2. 投入95 %酒精或醋酸/甲醇固定15~30 分钟,微干(盖片边缘接触滤纸);3. 1 %醋酸作用30 秒;4. 1×10-4 吖啶橙染30 秒或1 分钟;5. 0.1 M CaCl2处理30 秒~2 分钟;6. PBS漂洗3 次,每次数秒;7. PBS封片,荧光显微镜下直接观察并拍照......阅读全文

培养细胞的染色实验——吖啶橙染色荧光观察法

实验方法原理吖啶橙(Acridine Oringe:AO)是一种常用荧光染料,用于直接染色观察活细胞或固定染色观察细胞均可。吖啶橙对DNA和RNA都能染色,快速、简便和有一定的特异性。吖啶橙对活细胞毒性小,配成2×10-4~1×10-4 可用于直接染色观察法更好。实验材料细胞试剂、试剂盒酒精PBSC

吖啶橙荧光染色

【临床意义】  红细胞系统细胞核发深绿色荧光。原始红细胞有时可看到粉红色核仁。粒细胞系统细胞核发黄绿色荧光。原始粒细胞有时也可看到粉红色的核仁。但嗜酸性粒细胞的细胞核发深绿色荧光,比红细胞系统还要深一些。  淋巴细胞核的荧光稍带灰绿色。  各系统细胞的胞浆内因含有核糖核酸(RNA),所以均发红色荧光

吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色

AO / EB原理与流程zhongyisheng:1、原理:吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA,使之发出明亮的绿色荧光。溴乙锭(E仅能透过胞膜受损的细胞,嵌入核DNA,发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强,荧光更为明亮,均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅

培养细胞的染色实验

Giemsa染色法 苏木精伊红染色法 Feulgen染色法 吖啶橙染色荧光观察法             实验方法原理 Giemsa 染色是最常用的方法

培养细胞的染色实验——Giemsa染色法

实验方法原理Giemsa 染色是最常用的方法之一,它简便、快速,适用于多种细胞和染色体染色。试剂、试剂盒Giemse甘油甲醇Sorensen仪器、耗材滴管玻璃片实验步骤1.  染液制备(1)称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml,在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合,研磨至无颗粒;(2)再

培养细胞的染色实验——Feulgen染色法

实验方法原理此染色法为Feulgen早在1924年提出的一种鉴别细胞中DNA的组织化学方法。细胞中的DNA在60 ℃用1 N HCl酸解离脱氧核糖核酸,使嘌呤碱基与糖苷犍破坏,嘌呤碱脱掉,脱氧核糖的中的醛基游离;醛基能与Schiff试剂相结合,形成一种紫色的复合物。本方法中酸的离解根重要,若温度过低

原代细胞DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法

基本原理:吖啶橙(acridine orange,AO)是一种常用荧光染料,吖啶橙与原代细胞内的DNA、RNA都有亲和力,但有一定的特异性,即结合后发不同颜色的荧光,DNA呈亮绿色,而RNA呈橘红色至火红色。此法简便快捷,既可染活原代细胞又可染固定原代细胞。用于直接染色观察活原代细胞或固定染色观

原代细胞DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法

基本原理:吖啶橙(acridine orange,AO)是一种常用荧光染料,吖啶橙与原代细胞内的DNA、RNA都有亲和力,但有一定的特异性,即结合后发不同颜色的荧光,DNA呈亮绿色,而RNA呈橘红色至火红色。此法简便快捷,既可染活原代细胞又可染固定原代细胞。用于直接染色观察活原代细胞或固定染色观

细胞凋亡的形态:生化性质实验——吖啶橙染色

实验材料细胞试剂、试剂盒染液仪器、耗材试管实验步骤1b)将1μL的染色混合液放至12 mm×75 mm的玻璃试管的底部。加入25μL细胞悬浮液,转动手腕轻柔地混合。2b)将10μL的该混合液放在一干净的显微镜载玻片上,盖上22 mm2的盖玻片。用一 落射光显微镜的40×到60×的干物镜和一适合观察荧

细胞免疫荧光染色实验

实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec

细胞免疫荧光染色实验

实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec

培养细胞的染色实验——苏木精伊红染色法

培养细胞可用各种方法染色,有一般和特殊之分;一般染色为观察细胞一般形态之用,特殊染色为用于观察细胞的特殊成分和结构的染色方法。内容来源:组织培养和分子细胞学技术。实验材料苏木精试剂、试剂盒甘油冰醋酸伊红铵矾仪器、耗材载玻片盖玻片实验步骤1.  37 ℃温BSS漂洗3 次,每次20 秒~1 分钟;中性

植物细胞有丝分裂观察——染色观察法

实验材料蚕豆侧根试剂、试剂盒结晶紫 醋酸洋红 醋酸地衣红 改良石炭酸品红 盐酸仪器、耗材镊子 载玻片 吸水纸 显微镜 盖玻片 酒精灯刀片中期 (metaphase)从染色体排列到赤道面上,到它们的染色单体开始分向两极之前,这段时间称为中期。有时把前中期也包括在中期之内。中期染色体在赤道面形成所谓赤道

细胞凋亡的形态:生化性质实验——吖啶橙或溴化乙锭染色

实验材料细胞试剂、试剂盒染液仪器、耗材试管实验步骤1c)将1μL的染色混合液放至12 mm×75 mm的玻璃试管的底部。加入25μL细胞悬浮液,用手腕轻柔地混合。2c)将10μL的该混合液放在一干净的显微镜载玻片上,盖上22 mm2的盖玻片。用一 落射光显微镜的40×到60×的干物镜和一适合观察荧光

果蝇唾腺染色体制片实验_观察法

实验方法原理果蝇唾腺染色体是处于体细胞同源染色体的配对状态,由于多次复制而不分开,因而形成具有1 000-4 000根染色体丝的巨大染色体,又称为多线染色体.,本实验利用剖离果蝇三龄幼虫的唾腺,,压制染色体玻片标本的方法,观察多线染色体的特征。实验材料果蝇试剂、试剂盒水醋酸洋红仪器、耗材解剖针双筒解

染色体组型分析实验_观察法

实验方法原理染色体组型分析是对染色体组中处于有丝分裂中期时染色体的数目、大小、形态、着丝点的位置以及次缢痕、随体的有无等形态特征作一描述。将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像就称为该细胞的核型。 染色体的排列原则:①染色体的大小(即长度),②着丝粒的位置,③特殊标记。实验材料小鼠仪

吖啶橙和溴化乙啶双重染色

染料同时染色细胞,为鉴别凋亡细胞和坏死细胞提供较好的方法。染料: 吖啶橙(AO)膜通透性较高的染料 溴化乙啶(EB)正常细胞: AO- 绿色荧光强,EB- 染色红色荧光较弱;凋亡细胞: AO- 绿色荧光强度弱减,EB- 染色红色荧光加强;坏死细胞: AO- 绿色荧光强度弱或消失,EB- 染色红色荧光

培养细胞染色体显示法实验

实验方法原理 培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和制出标本清晰度高等优点,是制备染色体极好的对象。实验材料 细胞试剂、试剂盒 HanksNaHCO3培养基血清秋水仙素仪器、耗材 酒精灯镊子培养瓶吸管离心管实验步骤 1.  培养细胞取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80 %~90 %汇合单层培养细胞;

荧光免疫染色和DAPI染色实验步骤

免疫染色实验方法和步骤免疫染色(immunol staining)包括免疫荧光(immunol fluorescence)、免疫组化(immunol histochemistry)、免疫细胞化学(immunol cytochemistry)等,可以参考如下步骤进行操作。 1. 样品准备(Sample

SYPRO-Ruby-荧光染色实验

实验方法原理到目前为止,在常用来检测经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后的蛋白质的方法中,SYPRORUBY 可能是最灵敏的突光染色方法了,它能检测出仅含 1?2ng 蛋白的条带。遗憾的是,如此微量的蛋白条带经染色后用肉眼却不可见,需要一个荧光扫描仪检测(SYPRORuby 的最大激发光和发射光的波长分别是

SYPRO-Orange-荧光染色实验

实验材料单向凝胶电泳分离后的蛋白样品仪器、耗材铝箔荧光扫描仪塑料容器实验步骤1.电泳结束后,将凝胶置于盛有试剂 A 的塑料容器中,试剂 A 的量要足够覆盖整块凝股。例如,一’块典型的 mini 胶(8 cmXIOcm 或 8 cmX8 cm) 需用 50~IOOml 的试剂 A。2.用铝箔遮盖好容器

细胞免疫荧光染色

实验概要细胞免疫荧光染色实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、1

培养细胞染色体显示法实验——传代培养细胞染色体显示法

实验方法原理培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和制出标本清晰度高等优点,是制备染色体极好的对象。实验材料细胞试剂、试剂盒HanksNaHCO3培养基血清秋水仙素仪器、耗材酒精灯镊子培养瓶吸管离心管实验步骤1.  培养细胞取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80 %~90 %汇合单层培养细胞;2.  加

细胞铁染色实验

实验方法原理骨髓内的铁蛋白及含铁血黄素(细胞外铁)和幼稚红细胞的铁粒(细胞内铁)在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁,即普鲁士蓝反应.试剂、试剂盒盐酸溶液亚铁氰化钾溶液碱性复红贮存液复染应用液甲醛实验步骤一、 实验试剂:1. 4%盐酸溶液,小心取浓盐酸(38%)40ml慢慢滴加至冷蒸馏水340

细胞铁染色实验

实验方法原理 骨髓内的铁蛋白及含铁血黄素(细胞外铁)和幼稚红细胞的铁粒(细胞内铁)在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁,即普鲁士蓝反应.试剂、试剂盒 盐酸溶液亚铁氰化钾溶液碱性复红贮存液复染应用液甲醛实验步骤 一、 实验试剂:1. 4%盐酸溶液,小心取浓盐酸(38%)40ml慢慢滴加至冷蒸

病原性球菌的形态染色及培养实验——形态染色

实验步骤一、病原性球菌形态染色特征观察观察葡萄球菌,链球菌,肺炎球菌,脑膜炎球菌及淋球菌革兰染色标本片。注意各。菌的形态,排列及染色性。二、病原性球菌培养特征观察1.  观察金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌在血平板上菌落的形态,大小,表面,边缘,透明度,色素及溶血性,琼脂斜面培养基上菌苔的色素,及甘露醇

体外培养细胞的染色体标本制备实验

实验材料细胞实验步骤1. 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液; 2. 继续培养3h; 3. 胰酶消化收集细胞至离心管; 4. 离心1000转/min,离心10min,去上清; 5. Hanks液洗,离心

体外培养细胞的染色体标本制备实验

实验材料 细胞实验步骤 1. 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液; 2. 继续培养3h; 3. 胰酶消化收集细胞至离心管; 4. 离心1000转/min,离心10min,去上清; 5. Hanks液洗,

DNA荧光染色的样品制备实验

试剂、试剂盒PBS仪器、耗材DNA荧光染料流式细胞仪实验步骤DNA是细胞内含量比较恒定的参量,随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料(如PI)可选择性地定量嵌入核酸(DNA/RNA)的双螺旋碱基之间,与细胞特异性结合,DNA含量与荧光染料的结合量成正比,因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况

DNA荧光染色的样品制备实验

            试剂、试剂盒 PBS 仪器、耗材 DNA荧光染料 流式细胞仪 实验步骤