培养细胞染色体显示法实验
实验方法原理 培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和制出标本清晰度高等优点,是制备染色体极好的对象。实验材料 细胞试剂、试剂盒 HanksNaHCO3培养基血清秋水仙素仪器、耗材 酒精灯镊子培养瓶吸管离心管实验步骤 1. 培养细胞取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80 %~90 %汇合单层培养细胞;2. 加秋水仙素使用最终浓度为0.02~0.8 μg/ml营养液;温箱继续培养6~10 小时;或用低温封闭法:把培养细胞置于4 ℃条件下6~12 小时后,再于37 ℃温箱中继续培养6~10 小时处理(加秋水仙素);3. 采集分裂细胞可利用分裂中期细胞体变圆与底物附着不牢特点,此时手持培养瓶,左右反复横向水平摇动,令培养液在培养细胞表面反复冲涮;应用此法可使90 %的中期分裂细胞从瓶壁脱落;注意勿用力过猛,以防多量非分裂细胞脱落影响观察;4. 离心收集培养液,1000 转/分钟,离心5~10......阅读全文
培养细胞染色体显示法实验
实验方法原理 培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和制出标本清晰度高等优点,是制备染色体极好的对象。实验材料 细胞试剂、试剂盒 HanksNaHCO3培养基血清秋水仙素仪器、耗材 酒精灯镊子培养瓶吸管离心管实验步骤 1. 培养细胞取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80 %~90 %汇合单层培养细胞;
培养细胞染色体显示法实验——传代培养细胞染色体显示法
实验方法原理培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和制出标本清晰度高等优点,是制备染色体极好的对象。实验材料细胞试剂、试剂盒HanksNaHCO3培养基血清秋水仙素仪器、耗材酒精灯镊子培养瓶吸管离心管实验步骤1. 培养细胞取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80 %~90 %汇合单层培养细胞;2. 加
细胞培养染色体显示法
1) 传代培养细胞染色体显示法 1.培养细胞:取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。 2.加秋水仙素:使用终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液,温箱继续培养6~10小时;或用低温封闭法:把培养细胞置于4℃条件下6~12小时后,再于37℃温箱继续培养6
传代培养细胞染色体显示法
1.培养细胞:取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。2.加秋水仙素:使用zui终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液,温箱继续培养6~10小时;或用低温封闭法:把培养细胞置于4℃条件下6~12小时后,再于37℃温箱继续培养6~10小时处理(加秋水仙素)。3.采集分裂细
传代培养细胞染色体显示法
实验概要 传代培养细胞染色体显示法实验步骤1.培养细胞:取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。2.加秋水仙素:使用最终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液,温箱继续培养6~10小时;或用低温封闭法:把培养细胞置于4℃条件下6~12小时后,再于37℃温箱
传代培养细胞染色体显示法步骤
1.培养细胞:取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。 2.加秋水仙素:使用最终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液,温箱继续培养6~10小时;或用低温封闭法:把培养细胞置于4℃条件下6~12 小时后,再于37℃温箱继续培养6~10小时处理(加秋水仙素)。 3.
细胞培养染色体显示
1) 传代培养细胞染色体显示法1.培养细胞:取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。2.加秋水仙素:使用最终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液,温箱继续培养6~10小时;或用低温封闭法:把培养细胞置于4℃条件下6~12小时后,再于37℃温箱继续培养6~10小时处理(
细胞培养染色体显示
实验概要掌握细胞培养染色体显示实验方法。实验步骤1. 传代培养细胞染色体显示法 1) 培养细胞:取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。 2) 加秋水仙素:使用最终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液,温箱继续培养6~10小时;或用低温封闭法:把培养细胞置于4℃
人末梢血微量全血培养染色体显示法
实验概要 人末梢血微量全血培养染色体显示法实验步骤1.培养液准备:取15ml培养瓶数个,每瓶内分别充入5ml培养液(pH 7.2),内含:1640培养液(含10%~15%小牛血清),PHA 0.1ml,青霉素100单位和链霉素100微克/毫升 培养液2.抽血针管准备:取2~5ml针管一
特殊细胞培养实验_悬浮培养法
实验方法原理悬浮培养是使贴附性细胞呈悬浮状态生长。如所培养的细胞本身属悬浮生长类型,则无须做任何处理,在传代时先做离心处理去除旧培养液,添加新培养液即可。但在培养贴附型细胞时,因其有贴附性,必须进行干扰使细胞不能贴附,才能形成悬浮状态生长的细胞。实验材料细胞仪器、耗材培养瓶搅拌器实验步骤1. 用大
特殊细胞培养实验_单细胞分离培养法
实验方法原理从理论上说各种培养细胞都可用以进行克隆培养。但实际上,初代培养细胞和有限细胞系(二倍体细胞)比较困难。无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞等则比较容易。其原因是,当体内任何细胞被置于体外培养后,对培养环境都有一个适应过程。期间细胞对营养液具有同化作用,即从培养液中摄取营养的同时,也向培养液排
体外培养细胞的染色体标本制备实验
实验材料细胞实验步骤1. 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液; 2. 继续培养3h; 3. 胰酶消化收集细胞至离心管; 4. 离心1000转/min,离心10min,去上清; 5. Hanks液洗,离心
体外培养细胞的染色体标本制备实验
实验材料 细胞实验步骤 1. 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液; 2. 继续培养3h; 3. 胰酶消化收集细胞至离心管; 4. 离心1000转/min,离心10min,去上清; 5. Hanks液洗,
初代细胞培养实验——消化培养法
初代培养或原代培养,可以用于:(1)从供体获取组织后的首次培养;(2)组织和细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大的变化,具有二倍体遗传性状,在供体来源充分、生物条件稳定的情况下(年龄、性别),在一定程度上能反映体内状态。实验方法原理合成培养基胰蛋白酶消化培养法,能把组织块分散成细胞团或单个细胞,便于细
肿瘤细胞原代培养实验——脱落细胞法
实验方法原理脱落细胞法是指采集人体各部位,特别是管腔器官表面的脱落细胞进行培养。实验材料肿瘤组织试剂、试剂盒完全培养基洗涤液仪器、耗材刀片培养箱培养皿实验步骤一、将新鲜的肿瘤组织去除脂肪和结缔组织。二、洗液洗2次后,用刀片将肿瘤组织切成细薄片。三、在切割的同时有许多上皮细胞脱落下来,脱落细胞经洗涤后
经培养外周血细胞的染色体制备实验
尽管从其他细胞也可以制备染色体,但人类外周血白细胞是最容易同步化的,从而可以对其染色体进行高分辨分析。实验材料用 Vacutainer (BectonDickinson) 或加有不含防腐剂的肝素纳.(25U ml) 的注射 器获取肝素化的全血试剂、试剂盒完全的 RPMI 10% FBS (胎牛血清)
经培养外周血细胞的染色体制备实验
实验材料 用 Vacutainer (BectonDickinson) 或加有不含防腐剂的肝素纳.(25U ml) 的注射 器 获取肝素化的全血 试
经培养外周血细胞的染色体制备实验
实验材料 用 Vacutainer (BectonDickinson) 或加有不含防腐剂的肝素纳.(25U ml) 的注射 器获取肝素化的全血试剂、试剂盒 完全的 RPMI 10% FBS (胎牛血清)培养基100 X 植物血凝素氨甲蝶呤 脱氧胸嘧啶核苷秋水仙素氯化钾固定剂仪器、耗材 无菌锥形聚丙烯
特殊细胞培养实验_微载体细胞培养法
实验方法原理微载体细胞培养开始于60年代末期,最早使用离子交换凝胶作为载体,轻微搅动即可悬液在培养基中,因而可增加细胞附着的面积,达到大量培养细胞的目的。后来,根据细胞附着生长的特点,对微载体进行了改良,使其带有电荷或其它介质,更利于细胞附着和生长。这一方法亦可用于常规量的培养,也可用于大规模的培养
初代细胞培养实验——组织块培养法
实验材料组织试剂、试剂盒Hanks培养液胰蛋白酶NaHCO3仪器、耗材吸管培养瓶烧杯眼科剪眼科镊实验步骤1. 剪切把组织小块(1cm3)置入小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂液二三次以去掉表面血污,吸净Hanks液,用眼科剪反复剪切成1mm3块为止;2. 摆布用弯头吸管吸取若干小块,置入培养
细胞原代培养实验——组织块直接培养法
实验材料孕鼠新生小鼠试剂、试剂盒RPMI1640培养基牛血清胰蛋白酶Hanks液酒精青霉素链霉素仪器、耗材培养瓶青霉素瓶废液缸血球计数板蜡盘手术器械大头针离心管小玻璃漏斗三角烧瓶平皿吸管试管移液管无菌纱布无菌眼科剪实验步骤 一、将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死,置75%酒精泡2-3秒钟(时间不能过长、以免
病毒的培养方法实验——传代细胞培养法
实验方法原理从人及动物某些组织,特别是肿瘤组织,经多次传代可建立传代细胞系,这种细胞能无限地传代,某些传代细胞对病毒敏感范围较广,可用作病毒的分离鉴定,如HeLa 细胞,Hep-2 细胞及KB 细胞。三种细胞均来自人肿瘤组织细胞,HeLa 细胞来自子宫颈癌,Hep-2 细胞来自喉癌而KB 细胞来自上
氮舱减压法裂解培养细胞实验
基本方案 实验方法原理 通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法,能释放完整的细胞器和制备细胞膜。该方法的原理很简单:细
氮舱减压法裂解培养细胞实验
实验方法原理 通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法,能释放完整的细胞器和制备细胞膜。该方法的原理很简单:细胞放在一个压力舱中,在高压下(约5500kPa,相当于800psi)氮气首先被溶解在细胞中,当压力突然消失时,氮从溶液中迅速气化,并引起细胞膜的拉伸和扩
氮舱减压法裂解培养细胞实验
实验方法原理通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法,能释放完整的细胞器和制备细胞膜。该方法的原理很简单:细胞放在一个压力舱中,在高压下(约5500kPa,相当于800psi)氮气首先被溶解在细胞中,当压力突然消失时,氮从溶液中迅速气化,并引起细胞膜的拉伸和扩展
特殊细胞培养实验_加支持物培养法
实验方法原理加支持物培养法是预先向培养容器中加入各种可使细胞贴附的支持物,进行培养的方法。待细胞贴附于支持物生长增殖后,可进行各种实验和观察。观察时可把支持物从瓶中抽出,能做各种技术处理,是研究工作中常用的方法之一。各种对细胞无毒性的如玻璃、塑料、鸡卵壳膜、胶原、硅橡胶、袋泡茶包装纸等,均可做支持物
培养细胞染色体显色法
培养细胞染色体显示法1) 传代培养细胞染色体显示法1.培养细胞:取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。2.加秋水仙素:使用最终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液,温箱继续培养6~10小时;或用低温封闭法:把培养细胞置于4℃条件下6~12小时后,再于37℃温箱继续培
病毒的培养方法实验—组织培养法原代细胞单层培养
实验方法原理组织培养是目前培养病毒应用最广的一种培养方法,其优点是①经济适用,结果正确且敏感;②较实验动物易于控制。原代细胞单层培养法,是指动物(包括脊椎动物和无脊椎动物)的组织自机体取出后,经胰酶或其他细胞分散剂消化处理,得到单个细胞悬液。以一定量接种到特定容器中,加入细胞生长所必需的营养液,置合
特殊细胞培养实验_多孔塑料培养板单细胞克隆法
实验方法原理多孔塑料培养板克隆细胞的主要过程是1. 制备出1~2 细胞/毫升低密度的细胞悬悬液;2. 向多孔塑料培养板各孔中分别接种细胞悬液0.5~1 ml,则每孔平均含1 个细胞。3. 镜下检测每孔所含细胞数,标记下含单细胞的孔,置温箱培养,数日后凡在已标记的孔中有生长增殖的细胞群即为克隆细
细胞原代培养实验——胰酶消化法
细胞原代培养可以:(1)为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段;(2)为传代培养创造条件;(3)服务于临床实践,用于药物筛选等。实验方法原理将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、