免疫细胞化学技术观察细胞成分实验
实验方法原理免疫细胞化学是在细胞化学技术的基础上,吸收免疫学的理论和技术发展起来的一项技术,其基本原理是用荧光素或酶等标记物或显色物标记特异性抗体,通过免疫学中的抗原抗体反应与细胞内的相应抗原结合,形成带有荧光素或显色物的抗原抗体复合物,因此可用荧光显微镜或普通光学显微镜观察到复合物的存在,达到检测细胞内抗原物质的目的。细胞免疫化学是一项综合性的技术,包括标本的准备(制备、储存、固定等)、染色方法以及结果的分析判断,非特异性染色的减轻、消除等。实验材料细胞试剂、试剂盒福尔马林丙酮多聚甲醛仪器、耗材盖玻片培养瓶培养板实验步骤一、标本制备细胞可直接培养在盖玻片上、培养瓶内或培养板上,也可将一定量的细胞收集离心制成涂片。二、固定和固定制对于活细胞标本,常用的固定剂有以下几种。1. 福尔马林类10 %福尔马林或10 %中性福尔马林,其中以10 %中性缓冲福尔马林固定效果最好,最为常用。2. 丙酮类纯丙酮固定效果好......阅读全文
免疫细胞化学技术观察细胞成分实验
实验方法原理免疫细胞化学是在细胞化学技术的基础上,吸收免疫学的理论和技术发展起来的一项技术,其基本原理是用荧光素或酶等标记物或显色物标记特异性抗体,通过免疫学中的抗原抗体反应与细胞内的相应抗原结合,形成带有荧光素或显色物的抗原抗体复合物,因此可用荧光显微镜或普通光学显微镜观察到复合物的存在,达到检测
免疫细胞化学技术观察细胞成分实验
实验方法原理 免疫细胞化学是在细胞化学技术的基础上,吸收免疫学的理论和技术发展起来的一项技术,其基本原理是用荧光素或酶等标记物或显色物标记特异性抗体,通过免疫学中的抗原抗体反应与细胞内的相应抗原结合,形成带有荧光素或显色物的抗原抗体复合物,因
免疫细胞化学法的技术特点
免疫细胞化学是将免疫学基本原理与细胞化学技术相结合所建立起来的新技术,根据抗原与抗体特异性结合的特点,检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。
免疫细胞化学法的技术分类
①直接法:用标记抗体与抗体中的相应抗原直接结合,操作方法简便,特异性高,但敏感性较差,此法可用于检定未知抗原;②间接法:先用未标记的具有特异性的第一抗体与样品中的相应抗原结合,然后再以标记的第二抗体与特异性的第一抗体结合;第二抗体是用第一抗体作为抗原注入另一动物体内诱导产生的抗体,然后再结合以标记物
免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术的分类
1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。 3)按结合方式
免疫细胞化学
Introduction to Immunocytochemistry (House Ear Institute)A brief overview of common available methods. BrDU Immunocytochemistry using peroxidase and
免疫细胞化学和免疫荧光实验
载玻片/盖玻片处理聚醚酰亚胺或多聚赖氨酸在室温下包被盖玻片1小时。无菌水冲洗盖玻片(3次 ,每次5分钟)。可将盖玻片干完全干燥,并在紫外光下消毒至少4小时。在玻片上种植细胞,或准备细胞离心涂片器,或做好涂抹准备。磷酸盐缓冲液( PBS )进行简短的冲洗。第一步:细胞固定用预冷的甲醇、丙酮( 1-10
免疫细胞化学技术的某些新进展
免疫细胞化学技术在继续改进和完善中,新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外,80年代,新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章 叙述,本节 仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。 【
免疫细胞化学技术的某些新进展
免疫细胞化学技术在继续改进和完善中,新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外,80年代,新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章 叙述,本节 仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。 【
免疫细胞化学法
免疫细胞化学是将免疫学基本原理与细胞化学技术相结合所建立起来的新技术,根据抗原与抗体特异性结合的特点,检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。
免疫细胞化学术
免疫细胞化学(immunocytochemistry),是将免疫学基本原理与细胞化学技术相结合所建立起来的新技术,根据抗原与抗体特异性结合的点,检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。肽类与蛋白质种类繁多,均具有抗原性,当将人或动物的某种肽或蛋白质作为抗原注入另一种
免疫细胞化学法
①直接法:用标记抗体与抗体中的相应抗原直接结合,操作方法简便,特异性高,但敏感性较差,此法可用于检定未知抗原;②间接法:先用未标记的具有特异性的第一抗体与样品中的相应抗原结合,然后再以标记的第二抗体与特异性的第一抗体结合;第二抗体是用第一抗体作为抗原注入另一动物体内诱导产生的抗体,然后再结合以标记物
免疫细胞化学方法
1、细胞爬片;2、PBS洗3次×5min;3、4%多聚甲醛固定30min(4度冰箱中);4、3%H2O2 封闭内源性过氧化物酶,室温下10min;5、PBS洗3次×5min;6、10%动物血清封闭,室温下10min;7、甩去血清(不洗),一抗4℃ ;细胞8、PBS洗3次×5min;9、二抗室温下1h
免疫细胞化学-(ICC)
实验概要免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测
免疫细胞化学-(ICC)
实验概要免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测
活细胞直接观察实验
实验方法原理培养的活细胞在一般显微镜下观察时,细胞是透明的,反差很小,难以观察到细胞清晰结构,只有应用附有相差装置的显微镜,才能使目的物与背底反差增强,能够看清细胞的轮廓和一些微细结构如线粒体、核仁、染色质等。实验材料细胞仪器、耗材相差聚光器相差接物镜实验步骤一、相差装置的使用相差装置或显微镜都由两
活细胞直接观察实验
实验方法原理 培养的活细胞在一般显微镜下观察时,细胞是透明的,反差很小,难以观察到细胞清晰结构,只有应用附有相差装置的显微镜,才能使目的物与背底反差增强,能够看清细胞的轮廓和一些微细结构如线粒体、核仁、染色质等。实验材料 细胞仪器、耗材 相差聚光器相差接物镜实验步骤 一、相差装置的使用相差装置或显微
活细胞直接观察实验
相差观察和摄影方法 实验方法原理 培养的活细胞在一般显微镜下观察时,细胞是透明的,反差很小,难以观察到细胞清晰结构,只有应用附有相差装置的显微镜,才能使目的物
细胞骨架观察实验
鬼笔环肽显示微丝蛋白染色法 抗管蛋白免疫染色法 考马斯亮蓝染色法 实验材料 细胞
细胞形态的观察实验
实验方法原理 微丝普遍存在于多种细胞,对细胞的形状和运动有一定作用。细胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合,从而破坏微丝,改变细胞的形状实验材料 成纤维细胞试剂、试剂盒 PBSTriton X-100M-缓冲液戊二醛固定液考马斯亮兰染液细胞松驰素BDMEM仪器、耗材 光学显微镜镊子平皿载片吸水纸恒
免疫细胞化学常用试剂
一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽类)
免疫细胞化学常用试剂
一、固定剂 1、4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.3) 2、4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 3、Bouin's液及改良Bouin’s液 4、Zamboni’s(Stefanini‘s)液 5、PLP液 6、Karnovsky's液(pH7.3) 7、0
电子显微镜免疫细胞化学技术2
(1)包埋剂的配制:商品提供的Lowicrys包埋剂由三个部分组成:单体(Monomer),交联剂(Crosslinker)和引发剂(Initator)。调整单体和交联剂的比例,增加交联剂的量,组织块的硬度增加。中等硬度的组织块,其配制比例如下:K4M:单体 17.30g交联剂 2.70g引发剂 0
电子显微镜免疫细胞化学技术2
(1)包埋剂的配制:商品提供的Lowicrys包埋剂由三个部分组成:单体(Monomer),交联剂(Crosslinker)和引发剂(Initator)。调整单体和交联剂的比例,增加交联剂的量,组织块的硬度增加。中等硬度的组织块,其配制比例如下:K4M:单体 17.30g交联剂 2.70g引发剂 0
电子显微镜免疫细胞化学技术1
免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献,但由于光学分辨率的限制,不可能从细胞超微结构水平观察和研究免疫反应。因此,Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白(ferritin)标记抗体的方法,为在细胞超微结构水平研究抗原抗体反应提供了可能。在此基础上,相继发展了杂交抗体
电子显微镜免疫细胞化学技术1
免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献,但由于光学分辨率的限制,不可能从细胞超微结构水平观察和研究免疫反应。因此,Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白(ferritin)标记抗体的方法,为在细胞超微结构水平研究抗原抗体反应提供了可能。在此基础上,相继发展了杂交抗体
电子显微镜免疫细胞化学技术概述
第七章 电子显微镜免疫细胞化学技术第一节 电子显微镜免疫细胞化学技术概述免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献,但由于光学分辨率的限制,不可能从细胞超微结构水平观察和研究免疫反应。因此,Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白(ferritin)标记抗体的方法,为在细
免疫细胞化学技术在肾脏疾病中的应用范围
第一节 免疫细胞化学技术在肾脏疾病中的应用范围在肾脏疾病时,免疫细胞化学技术主要应用于肾脏穿刺组织的检查,也可应用于血清或肾脏洗脱液及尿液的特殊检查,兹分述如下:一、肾脏组织的检查肾穿刺组织一般应切割为三小块,分别作冰冻切片、石蜡切片及超薄切片,进行荧光显微镜、光学显微镜及透射电镜观察。所应用的免疫
电子显微镜免疫细胞化学技术3
2.LR White 和Lr gold 是一种混合的丙烯酸单体的透明树脂,具有极低的粘度(8cps)和较强的嗜水性,因此有较强的穿透性,有利于抗体(或抗原)和免疫化学物质穿过LR树脂,达到组织结合部位。在免疫细胞化学的光镜(半薄切片)和电镜水平应用都具有良好效果。标本脱水至70%乙醇即可,能较好
细胞生理活动的观察实验
细胞的吞噬活动细胞的纤毛和鞭毛草履虫纤毛运动及食物泡的形成实验方法原理白细胞是机体防御系统中能游走的单位。它分为粒细胞系、单核细胞系、淋巴系三类。它们有许多生理功能,如游走性、变形运动、趋化性、吞噬异物等。在白细胞中,以粒细胞、单核细胞的吞噬活动较强,故称此二类细胞为吞噬细胞。单核细胞由血液进入组织