小鼠免疫实验_制备免疫脾细胞:用可溶性抗原致敏

实验材料任意品系小鼠(6~8 周)试剂、试剂盒PBS完全和不完全弗氏佐剂抗原仪器、耗材22-G 注射针头带塞的 3 ml 注射器双头带塞的连接器无菌剪刀剃须刀片解剖刀片木制涂棒实验步骤1. 准备等体积 PBS 含 25~100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液(200~400 μl/鼠)。用双头带塞的连接器连接两个注射器,一个注射器装抗原,另一个装佐剂。来回推压注射器,使得其内容物从一侧到另一侧注射器,推压 5~10 min 直到得到稳定的乳化液。2. 用 22-G 的针给小鼠腹腔注射(每一个抗原 3~5 只小鼠)。3. 3 周后,用等体积的含 10~50 μg 抗原的 PBS 和不完全弗氏佐剂配制成(200~400 μl)的乳化液再次腹腔注射。4. 第二次免疫后 7 天,用无菌剪刀或剃毛刀片切掉小鼠尾巴 0.5 cm 采血。收集 100~200 μl 血装于 1.5 ml 的微量离心管。将小鼠放在产热灯下 30~60 s 保暖......阅读全文

小鼠免疫实验_-制备免疫脾细胞:用可溶性抗原致敏

实验材料任意品系小鼠(6~8 周)试剂、试剂盒PBS完全和不完全弗氏佐剂抗原仪器、耗材22-G 注射针头带塞的 3 ml 注射器双头带塞的连接器无菌剪刀剃须刀片解剖刀片木制涂棒实验步骤1. 准备等体积 PBS 含 25~100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液(200~400 μl/鼠)。用双头带塞

杂交瘤细胞免疫小鼠和脾细胞的制备介绍

  免疫小鼠:取 6~8 周龄 Balb/C 雌鼠,基础免疫 2 周,静脉再加强免疫一次,3~5 天后用于融合。  脾细胞制备:  1.引颈处死小鼠,用酒精消毒表体。  2.无菌条件下取出脾脏,剃除结缔组织和脂肪,用 5ml 无血清培养液冲洗一次。  3.把脾脏置于已消毒的 90~100 目不锈钢网

小鼠免疫实验_-用电泳分离的抗原进行免疫

实验材料任意品系小鼠6~8 周试剂、试剂盒冷的 0.1 mol L KClPBS抗原完全和不完全弗氏佐剂仪器、耗材组织研磨机22-G 注射针头带塞的 3 ml 注射器双头带塞的连接器无菌剪刀剃须刀片解剖刀片木制涂棒实验步骤1. 将含 10~50 μg 目的蛋白抗原的蛋白质混合物上样于适当的 SDS

抗原与免疫血清的制备实验

将抗原注射于动物体,可刺激动物的 B 淋巴细胞转化为浆细胞而产生特异性抗体,待动物血清中累积大量抗体时,采集其血液,分离析出血清,此即含抗体的免疫血清,或称抗血清。制备特异性强、效价高的免疫血清对于微生物的鉴定,传染病的诊断与治疗,抗原分析,免疫球蛋白的鉴定及其他蛋白质的鉴定与研究均有很大的用途。

抗原和免疫血清的制备实验

实验材料 家兔试剂、试剂盒 普通培养基甲醛盐水石灰酸盐水生理盐水仪器、耗材 标准比浊管离心机实验步骤 1. 抗原的制备:标准菌株的选择:所用的菌种伤寒杆菌H901和伤寒杆菌O901应具有典型形态菌落及生化反应。在生理盐水中不发生自身凝集,与特异血清有高度凝集者可作为菌种。2. 菌液的制备(1)原液制

抗原与免疫血清的制备实验

将抗原注射于动物体,可刺激动物的 B 淋巴细胞转化为浆细胞而产生特异性抗体,待动物血清中累积大量抗体时,采集其血液,分离析出血清,此即含抗体的免疫血清,或称抗血清。制备特异性强、效价高的免疫血清对于微生物的鉴定,传染病的诊断与治疗,抗原分析,免疫球蛋白的鉴定及其他蛋白质的鉴定与研究均有很大的用途。实

细-胞-毒-性-T-淋-巴-细-胞-的-诱-导-及-检-测

实验步骤基 本 方 案 1 从 C TL 前体中诱导细胞毒性注意:反应细胞应根据抗原的种类选择是否需要进行体内致敏。材 料反应细胞来源:未致敏的或者体内致敏的小鼠脾脏细胞(见辅助方案 1 和 2致敏培养基刺激细胞来源:未修饰或半抗原修饰的小鼠脾脏细胞(见辅助方案 3)R P M I -1 0 完全培

小鼠免疫实验

实验方法原理 实验材料 任意品系小鼠(6~8 周)试剂、试剂盒 PBS完全和不完全弗氏佐剂抗原仪器、耗材 22-G 注射针头带塞的 3 ml 注射器双头带塞的连接器无菌剪刀剃须刀片解剖刀片木制涂棒实验步骤 1. 准备等体积 PBS 含 25~100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液(200~40

抗原和免疫血清制备实验—抗红细胞抗体(溶血素)制备

实验材料家兔试剂、试剂盒红细胞悬液生理盐水阿氏液仪器、耗材离心机培养箱实验步骤1.  红细胞悬液的制备(1) 采血采取的绵羊血与灭菌的保存液等量混合,置冰箱中,可保存数周,也可用抗凝方法(2) 洗涤血球先将抗凝血液离心沉淀(2000 cpm×5分钟)吸去上清。加入2~3倍的生理盐水并用毛细滴管反复吹

细胞毒性T淋巴细胞的诱导及检测

基 本 方 案 1 从 C TL 前体中诱导细胞毒性注意:反应细胞应根据抗原的种类选择是否需要进行体内致敏。材 料反应细胞来源:未致敏的或者体内致敏的小鼠脾脏细胞(见辅助方案 1 和 2致敏培养基刺激细胞来源:未修饰或半抗原修饰的小鼠脾脏细胞(见辅助方案 3)R P M I -1 0 完全培养基H

淋巴细胞杂交瘤(hybridoma)单克隆抗体技术1

1975年,Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元,也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。  制备单克隆抗体包括动物免疫

间接凝集实验及致敏红细胞制备方法

将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的颗粒载体上,然后与相应的抗体结合,也可出现颗粒载体的凝集现象,称为间接凝集反应。间接凝集反应比直接凝集反应敏感性为高,可用于微量抗体或抗原的检查。一、 间接血球凝集实验间接血球凝集实验是根据红血球表面的吸附作用而建立起来的。将细菌可溶性抗原提出使之吸附于红血球表面,

单克隆抗体的制备步骤

1、免疫动物的选择:免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。2、细胞融合:采用二氧化碳气体处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同

淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备方法

制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产,要经过几个月的一系列实验步骤,下面按照制备单克隆抗体的流程顺序,逐一介绍其实验方法。一、细胞融合前准备(一) 免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功,获得高质量的McAb至关重要。

从鼠弓形虫抗原致敏的树突状细胞中分离的...

实验概要通过注射在体外用TAg致敏过的来自于DC细胞的外质体,在体内诱导了弓形虫属特异性Th1分子免疫应答并获得了抗弓形虫感染的保护效应。研究证实致敏的DC衍生外质体能够对鼠弓形虫感染和其它某些病原感染产生免疫保护。这种无细胞疫苗对于人类疫苗策略是一种很有吸引力的保护工具。实验材料动物:8-10周龄

从鼠弓形虫抗原致敏诱导抗弓形虫感染的保护免疫应答

实验概要通过注射在体外用TAg致敏过的来自于DC细胞的外质体,在体内诱导了弓形虫属特异性Th1分子免疫应答并获得了抗弓形虫感染的保护效应。研究证实致敏的DC衍生外质体能够对鼠弓形虫感染和其它某些病原感染产生免疫保护。这种无细胞疫苗对于人类疫苗策略是一种很有吸引力的保护工具。实验材料动物:8-10周龄

淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术(一)

实验方法原理 1975年,Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元,也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体

抗原和免疫血清的制备实验——抗菌血清的制备

抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。在免疫学实践,为制备抗体常以抗原性物质(细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质)给动物注射。经过一定时间后,动物血清中可以产生大量的特异性抗体。这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清。实验材料家兔试剂、试剂盒普通培养基甲醛盐水石灰酸盐水生理盐水仪

免疫细胞:抗原递呈细胞

  1.抗原递呈细胞的概念  在机体的免疫应答过程中,能摄取、加工、处理抗原并将抗原信息提呈给T淋巴细胞的辅佐细胞,称为 抗原提呈细胞(APC)。  2.抗原递呈细胞的种类  抗原提呈细胞分专职性递呈细胞和非专职性递呈细胞两类。单核/巨噬细胞、树突状细胞(DC)和B淋巴细胞等能表达MHC Ⅱ类分子的

MHC对免疫应答中免疫细胞相互作用的约束作用(一)

   MHC另一个重要的生物学功能是约束免疫应答过程中各类免疫细胞的相互作用,又称为MHC的约束性(MHc restriction),包括免疫应答感应阶段Mφ-Th之间,反应阶段Th-B之间,以及效应阶段Tc-靶细胞之间的相互作用。MHc I类和Ⅱ类抗原分别对不同细胞起约束作用。  (一)M

免疫学实验抗可溶性肝抗原抗体(SLA)介绍

  抗可溶性肝抗原抗体(SLA)介绍:  抗可溶性肝抗原抗体是自身免疫性肝炎Ⅲ型的血清学标记,对于自身免疫性肝炎的诊断和鉴别诊断均具有重要价值。一般用间接免疫荧光法测定。  间接免疫荧光法实验原理:将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。  第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原

单克隆抗体制备的基本原理与过程

单克隆抗体制备的原理:B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,再进一步克隆化,这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤

单抗到底是怎么⽣产的?

  单抗到底是怎么生产的?  单克隆抗体(MAb)是针对专一的抗原决定簇产生的抗体,单克隆技术⼜名杂交瘤技术起源于1975年,由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗体。  杂交瘤技术制备单克隆抗是针对体的主要步骤包括:  (1)

单克隆抗体的制备过程

  1. 免疫动物  免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。  2.细胞融合  采用

单克隆抗体的制备过程

  1. 免疫动物  免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。  2.细胞融合  采用

单克隆抗体的制备过程

  1. 免疫动物  免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。  2.细胞融合  采用

单克隆抗体制备过程与原理

单克隆抗体(MAb)是针专一的抗原决定簇产生的抗体,单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年,由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗体。单克隆抗体制备过程有以下几个步骤,下面讲简要介绍。1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠

单抗是什么

动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,具有不同基因的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞(浆细胞)和记忆B细胞,大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一

单抗是什么

动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,具有不同基因的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞(浆细胞)和记忆B细胞,大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一

ICC用细胞抗原的制备

一、材料和试剂1、0.01M PBS(pH7.4): NaCl 8.0g; KCl 0.2g; Na2HPO4 1.44g; KH2PO4  0.24g; ddH2O至1000ml ; 高压灭菌,分装。2、0.25%胰酶:称取EDTA 0.02g   NaCl   0.8g  KCl  0.04g