基因枪法转化大麦实验

实验材料麦穗试剂、试剂盒植物凝胶乙醇次氯酸钠蒸馏水亚精胺仪器、耗材EP 管移液枪实验步骤1. 组织培养基的准备( 1 ) 首先准备所需浓度 2 倍的植物凝胶,高压灭菌(见注 2 ) 。( 2 ) 所有的组织培养基都要过滤灭菌,因此除了无菌的储备液,其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀,调到合适的 pH 后过滤灭菌(使用瓶顶过滤器、0.22 μm 微孔滤膜)。( 3 ) 使用前将 2x 凝胶和 2x 培养基在水浴锅中加热至 60℃。( 4 ) 将所需储备液在无菌条件下加入到热的培养基中,培养基和植物凝胶混合后倒入 9 cm 培养皿中(Sterilin)。( 5 ) 分化培养时,使用高培养皿(100 mmx 20 mm,Falcon) 。( 6 ) 渗透处理时,使用 5 cm 小培养皿 (Sterilin) 。2. 幼胚的分离(1) 幼穗的采收与消毒① 当幼胚直径长到 1~2 mm 时米收麦穗(见注 3) 。② 在取......阅读全文

基因枪法转化大麦实验

实验材料麦穗                                                          试剂、试剂盒植物凝胶                                                                  乙醇        

基因枪法转化大麦实验

实验材料麦穗试剂、试剂盒植物凝胶乙醇次氯酸钠蒸馏水亚精胺仪器、耗材EP 管移液枪实验步骤1. 组织培养基的准备( 1 ) 首先准备所需浓度 2 倍的植物凝胶,高压灭菌(见注 2 ) 。( 2 )  所有的组织培养基都要过滤灭菌,因此除了无菌的储备液,其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀,调到合适

基因枪法转化大麦实验(二)

4. 粒子轰击幼胚(1) 幼胚渗透处理轰击前,取分离 1 天后的幼胚,放在高渗培养基中处理 4 h。每皿 20~30 枚幼胚,置于培养皿中心 1.6 cm2 范围内,盾片朝上。胚可以放得紧密一些,但相互之间不要碰到。轰击之后幼胚继续高渗处理 16 h。(2) 基因枪准备① 基因枪所有组件和内部的枪体

基因枪法转化大麦实验(一)

实验材料 麦穗试剂、试剂盒 植物凝胶乙醇次氯酸钠蒸馏水亚精胺仪器、耗材 EP 管移液枪实验步骤 1. 组织培养基的准备( 1 ) 首先准备所需浓度 2 倍的植物凝胶,高压灭菌(见注 2 ) 。( 2 )  所有的组织培养基都要过滤灭菌,因此除了无菌的储备液,其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀,

基因枪法转化小麦实验

实验材料幼胚盾片                                                          试剂、试剂盒乙醇                                                                  漂白消毒剂    

基因枪法转化小麦实验(二)

实验材料 BIO-RAD 亚微米金粉试剂、试剂盒 无水乙醇TE 缓冲液亚精胺仪器、耗材 离心管实验步骤 1. 准备金粉颗粒( 1 ) 称取 20 m BIO-RAD 亚微米金粉(0.6 μm) 至 1.5 ml 离心管中,加入 1 ml 无水乙醇。超声波处理 2 min,短暂离心 3s,然后弃上清。

基因枪法转化小麦实验(一)

实验材料 幼胚盾片试剂、试剂盒 乙醇漂白消毒剂仪器、耗材 诱导培养基实验步骤 下面介绍的是经过优化的针对幼胚盾片转化的方法,幼穗可以代替幼胚盾片使用。对某些特定的品种,幼穗转化比幼胚盾片转化更有效,如普通小麦品种 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier,以及其他小

基因枪法转化小麦实验——准备供体材料

实验材料幼胚盾片试剂、试剂盒乙醇漂白消毒剂仪器、耗材诱导培养基实验步骤下面介绍的是经过优化的针对幼胚盾片转化的方法,幼穗可以代替幼胚盾片使用。对某些特定的品种,幼穗转化比幼胚盾片转化更有效,如普通小麦品种 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier,以及其他小麦亚族 Tr

基因枪法转化小麦实验——DNA包裹金粉颗粒

实验材料BIO-RAD 亚微米金粉试剂、试剂盒无水乙醇TE 缓冲液亚精胺仪器、耗材离心管实验步骤1. 准备金粉颗粒( 1 ) 称取 20 m BIO-RAD 亚微米金粉(0.6 μm) 至 1.5 ml 离心管中,加入 1 ml 无水乙醇。超声波处理 2 min,短暂离心 3s,然后弃上清。重复用乙

基因枪法转化小麦实验——使用-PDS1000/He-基因枪轰击

实验材料金粉试剂、试剂盒乙醇消毒液实验步骤注意:由于基因枪通过高压使粒子加速到极高的速度,故操作基因枪时应采取适当的安全措施并且佩戴安全眼镜。在任何使用基因枪转化的实验中,必须设置对照检测分化和选择效率(见注 40) 。( 1 )  根据 PDS-1000/He (见图 4.2 ) 基因枪操作指南操

农杆菌介导的大麦转化方法实验

实验材料植物凝胶pBract 质粒pSoup 质粒试剂、试剂盒利福平卡那霉素仪器、耗材MG L 培养基实验步骤1. 组织培养基的准备提前准备好所需浓度 2 倍的植物凝胶,高压灭菌(见注 3 ) 。所有的组织培养基都要过滤灭菌,因此除了无菌的储备液,其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀,调到合适的

农杆菌介导的大麦转化方法实验

实验材料 植物凝胶pBract 质粒pSoup 质粒试剂、试剂盒 利福平卡那霉素仪器、耗材 MG L 培养基实验步骤 1. 组织培养基的准备提前准备好所需浓度 2 倍的植物凝胶,高压灭菌(见注 3 ) 。所有的组织培养基都要过滤灭菌,因此除了无菌的储备液,其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀

农杆菌介导的大麦转化方法实验

实验材料:植物凝胶                                                                  pBract 质粒                                                                 

基因枪法转化小麦实验——轰击后未成熟盾片培养

实验材料幼胚盾片试剂、试剂盒新霉素磷酸转移酶草胺膦乙酰转移酶基因仪器、耗材基因枪诱导培养基分化培养基实验步骤1. 诱导愈伤( 1 ) 基因枪轰击后,将盾片分散转移,每个重复分到 2~3 个含诱导培养基(MS9%  0.5 Dag) 的平皿中,大约 10 个盾片一皿(见注 48)。( 2 ) 用封口膜

基因枪法介绍

基因枪法,又称粒子轰击(particle bombardment),高速粒子喷射技术(High-velocity particle microprojection)或基因枪轰击技术(gene gun bombardment),是由美国Cornell大学生物化学系John.C.Sanford等于198

基因枪法的作用

基因枪法,又叫粒子轰击细胞法或微弹技术。基因枪的作用是用压缩气体(氦或氮等) 动力产生一种冷的气体冲击波进入轰击室(因此可免遭由“热”气体冲击波引起的细胞损伤),把粘有DNA 的细微金粉打向细胞,穿过细胞壁、细胞膜、细胞质等层层构造到达细胞核,完成基因转移。只有很少部分的细胞符合这样的要求,大多数会

什么是基因枪法?

基因枪法,又叫粒子轰击细胞法或微弹技术。基因枪的作用是用压缩气体(氦或氮等) 动力产生一种冷的气体冲击波进入轰击室(因此可免遭由“热”气体冲击波引起的细胞损伤),把粘有DNA 的细微金粉打向细胞,穿过细胞壁、细胞膜、细胞质等层层构造到达细胞核,完成基因转移。只有很少部分的细胞符合这样的要求,大多数会

转基因技术基因枪法简介

  利用火药爆炸或高压气体加速(这一加速设备被称为基因枪),将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中,然后通过细胞和组织培养技术,再生出植株,选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。与农杆菌转化相比,基因枪法转化的一个主要优点是不受受体植物范围的限制。而且其载体质粒的构建

Nature公布大麦基因组图谱

  大麦是世界上最重要的粮食作物之一,17日Nature公布了目前为止最完善的大麦基因组测序图谱。这项由美国农业部主导的大工程,在德国、日本、芬兰、澳大利亚、英国、美国和中国科学家们的共同努力下,历经六年终于取得了重大进展。大麦基因组图谱将成为人们提高大麦产量、增强大麦抗虫抗病能力、增加大麦营养价值

基因枪法可以得到永久转基因植株吗?

基因枪法注入基因后,该植物原则上一直都是转基因植物,无性繁殖的后代也一直是转基因植物,而其种子繁殖的下一代则不一定,有可能种子繁殖的下一代含有目标基因,也可能没有。

基因枪法的基本原理

这一方法是依靠一种基因枪来帮助导入外源基因。基因枪根据动力系统可分为火药引爆、高压放电和压缩气体驱动三类。其基本原理是通过动力系统将带有基因的金属颗粒(金粒或钨粒),将DNA吸附在表面,以一定的速度射进植物细胞,由于小颗粒穿透力强,故不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组,从而实现稳定转化的目的。它具有

基因枪法的操作过程

基因枪法: 将直径4um的钨粉或金粉在供体DNA中浸泡,然后用基因枪将这些粒子打入细胞、组织或器官中,具有一次处理多个细胞的优点,但转化效率较低。另外这种方法也用于基因治疗和抗体制备,并已取得初步成效。

基因枪法的定义和原理简介

基因枪法是一种基因导入仪技术,它把遗传物质或其他物质附着于高速微弹直接射入细胞、组织和细胞器,是目前国际上最先进的基因导入技术。气体基因枪以压缩气体(氦或氮)转换成的气体冲击波为动力,使气体基因枪枪产生一种“冷”的气体冲击波进入轰击室,因此可免遭由“热”气体冲击波引起的细胞损伤。气体基因枪可在广泛的

大麦基因编辑修饰淀粉研究获进展

近日,四川农业大学小麦研究所郑有良教授团队江千涛教授研究组利用CRIPR/Cas9技术对大麦淀粉合成酶基因SSIIa进行基因编辑,获得了高抗性淀粉大麦新种质,结合酶活、转录组和代谢组学阐明淀粉的特性变化机制,相关成果发表在国际著名学术期刊《碳水化合物聚合物》(Carbohydrate Polymer

棉花转基因技术基因枪法花粉活体育种实例

中国农科院棉花研究所针对 20 多个棉花品种,成功建立了高效、稳定的规模化转化体系,以流水线的操作方式,建立了高效、工厂化的棉花转基因技术体系。本文援引中国农业科学院棉花研究所的发明ZL内容,以制备转 GAPDH 基因棉花的具体方法为例,以应用实例演示棉花转基因技术的具体应用案例。土壤盐渍化是一个全

大麦6号染色体基因测序研究

  2013年11月15日,成立于1875年的嘉士伯实验室和华大基因旗下子公司――深圳华大科技服务有限公司(简称“华大科技”)宣布,双方将联合开展大麦6号染色体基因组破译工作,旨在为培育大麦新品种提供具有价值的资源。  基因序列信息是开展快速及现代育种的核心,有助于挖掘有利遗传突变,加速农作物育种改

吸枪法检漏介绍

 1.吸枪法检漏方法吸枪法检漏,又叫正压法检漏,是氦质谱检漏仪的常用检漏方法。吸枪通过细长管道与氦质谱检漏仪相连,被检件充入压力高于环境大气压力的氦气(或氦与氮混合或氦与大气混合气体),吸枪的吸嘴在被检件可疑有漏孔的表面以一定速度移动,通过漏孔漏出的气体的一部分进入吸嘴,随之进入检漏仪质谱室,得出泄

科学家成功绘制出大麦基因组草图

  据物理学家组织网10月17日报道,一个国际科学家小组在《自然》杂志上公布了高分辨率的大麦基因组草图。这项突破是朝着研发更优良的大麦新品种迈出的关键一步,不仅有助于防治禾谷类作物疾病,满足气候变化条件下的粮食需求,同时也会对啤酒和威士忌行业产生重要影响。   大麦基因组的大小几乎是人类基因组的两

酵母转化实验_乙酸锂转化

实验材料酵母试剂、试剂盒YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1.  在开始实验前2天,接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中,于30℃恒温摇床,培养过夜。 2.  转化的前一天晚上,往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD培养基,然后

酵母转化实验_电穿孔转化

实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1.  实验前两天,将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中,30℃过夜培养至饱和。 2.  转化前一天晚上,在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液,于30℃剧烈摇动培养过