植物体内多酚氧化酶活性的测定实验
实验方法原理多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,在有氧的条件下,能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度,即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下:.实验材料马铃薯块茎试剂、试剂盒聚乙烯吡咯烷酮磷酸缓冲液磷酸缓冲液和度硫酸铵儿茶酚三氯乙酸仪器、耗材UV-1206UV-1240分光光度计离心机恒温水浴研钵或匀浆机试管移液管纱布袋实验步骤1. 粗酶液的制备称取马铃薯块茎5g于研钵中,加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮(事先用蒸馏水浸洗,然后过滤以除去杂质)和100 ml 0.1mol·L-1pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆,用几层纱布袋过滤,滤液加入30%饱和度硫酸铵,离心除沉淀,上清液再加硫酸铵使达60%饱和度,离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2~3 ml 0.01mol·L-1 pH6.5磷酸缓冲液中,即为粗制酶液。2. 活性酶的测定在试管中加入3.9 ml 0.05 mol·L-1 pH5.5磷酸缓冲液......阅读全文
多酚氧化酶的研究历史简介
多酚氧化酶(,PPO)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶,普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中,甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的活性。由于其检测方便,是被最早研究的几类酶之一。自1883年Yoghid发现日本漆树液汁变硬可能和某种活性物质相关,1938年Keilin D.和Ma
多酚氧化酶的理化性质
酶蛋白具有一般蛋白质的特性,在高温或低温条件下有易变性失活的特点。各类酶均有其活性的最适温度范围,一般在30C~50℃范围内酶活性最强。酶若失活、变性,则就丧失了催化能力。酶的催化作用具有专一性,如多酚氧化酶,只能使茶多酚物质氧化,聚合成茶多酚的氧化产物茶黄素、茶红素和茶褐素等;蛋白酶只能促使蛋白质
多酚氧化酶的基本信息
多酚氧化酶是一类含铜的氧化还原酶 。编号:EC 1.10.3.1 [1] (编号:EC 1.14.18.1 )。催化邻苯二酚氧化成邻苯二醌,也能作用于单酚单加氧酶的底物 。淡黄至暗褐色粉末或液体。溶于水,不溶于乙醇。有吸湿性。相对分子质量约为125000,最适pH为6.5,最适温度为2℃。多
多酚氧化酶(PPO)的分离提取
一、原理与目的多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶,植物受到机械损伤和病菌侵染后,PPO催化酚与O2氧化形成醌,是组织形成褐变,以便损伤恢复,防止或减少感染,提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用,所以伤口醌类物质出现是植物防止伤口感染的愈伤反应,因而受伤组织一般这种酶的活性就会提高。多
单胺氧化酶活性测定
实验材料 大鼠试剂、试剂盒 磷酸钠缓冲液蒸馏水盐酸苯乙胺甲苯5-羟色胺双草酸盐β-乙基-苯乙胺盐酸盐苯-醋酸乙酯闪烁液仪器、耗材 制冰机水浴锅试管试管架计数瓶离心机离心管移液枪漩涡振荡仪
多酚氧化酶的理化性质介绍
酶蛋白具有一般蛋白质的特性,在高温或低温条件下有易变性失活的特点。各类酶均有其活性的最适温度范围,一般在30C~50℃范围内酶活性最强。酶若失活、变性,则就丧失了催化能力。酶的催化作用具有专一性,如多酚氧化酶,只能使茶多酚物质氧化,聚合成茶多酚的氧化产物茶黄素、茶红素和茶褐素等;蛋白酶只能促使蛋
紫外可见分光光度计检测多酚氧化酶酶活性
多酚氧化酶(PPO)是一类由核基因编码在细胞质中合成的含铜质体的金属酶,其作用机理在于铜的氧化-还原作用。大麦中的多酚物质经过PPO的催化氧化后,具有单宁性质,易和蛋白质起交联作用而沉淀出来,进而影响啤酒的色泽、泡沫、风味和非生物稳定性。大麦中部分PPO以“潜伏”状态存在,在浸麦过程中,可通过去除一
吲哚乙酸氧化酶活性的测定
原理 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下,被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小,对调节体内吲哚乙酸的水平,起着重要的作用,而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 仪器药品 721型分光光度
植物体内硝态氮含量的测定实验
实验方法原理在强酸条件下NO3-与水杨酸反应,生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在碱性条件下(pH>12)呈黄色,在一定范围内,其颜色的深浅与含量成正比,可直接用分光光度计测定。实验步骤一、材料仪器设备及试剂1. 材料:小麦或水稻等植物的叶片;2. 仪器设备:分光光度计;电子分析天平;10ml、20m
植物体内游离脯氨酸的测定实验
实验方法原理 在正常环境条件下生长的植物,体内游离脯氨酸的含量较低,但在逆境(如旱,寒,盐等)条件下,植物体内游离脯氨酸的含量可增加10-100倍,因此有人提出游离脯氨酸的含量可作为植物抗逆性指标。植物体内的游离脯氨酸用磺基水杨酸或酒精提取。在酸性条件下,脯氨酸和茚三酮反应生成稳定的红色产物,用比色
植物体内硝态氮含量的测定实验
实验方法原理 在强酸条件下NO3-与水杨酸反应,生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在碱性条件下(pH>12)呈黄色,在一定范围内,其颜色的深浅与含量成正比,可直接用分光光度计测定。实验步骤 一、材料仪器设备及试剂1. 材料:小麦或水稻等植物的叶片;2. 仪器设备:分光光度计;电子分析天平;10ml、2
植物体内丙二醛含量的测定实验
实验方法原理丙二醛(MDA)是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害,其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。测定植物体内丙二醛含量,通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应,生成红棕色的三甲川(3、5、5-三甲基恶唑2、4-二
植物体内游离脯氨酸的测定实验
实验方法原理:在正常环境条件下生长的植物,体内游离脯氨酸的含量较低,但在逆境(如旱,寒,盐等)条件下,植物体内游离脯氨酸的含量可增加10-100倍,因此有人提出游离脯氨酸的含量可作为植物抗逆性指标。植物体内的游离脯氨酸用磺基水杨酸或酒精提取。在酸性条件下,脯氨酸和茚三酮反应生成稳定的红色产物,用比色
植物体内游离脯氨酸的测定实验
实验方法原理在正常环境条件下生长的植物,体内游离脯氨酸的含量较低,但在逆境(如旱,寒,盐等)条件下,植物体内游离脯氨酸的含量可增加10-100倍,因此有人提出游离脯氨酸的含量可作为植物抗逆性指标。植物体内的游离脯氨酸用磺基水杨酸或酒精提取。在酸性条件下,脯氨酸和茚三酮反应生成稳定的红色产物,用比色法
植物体内硝态氮含量的测定实验
实验方法原理:在强酸条件下NO3-与水杨酸反应,生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在碱性条件下(pH>12)呈黄色,在一定范围内,其颜色的深浅与含量成正比,可直接用分光光度计测定。实验步骤:一、材料仪器设备及试剂1. 材料:小麦或水稻等植物的叶片;2. 仪器设备:分光光度计;电子分析天平;10ml、2
植物体内丙二醛含量的测定实验
实验方法原理丙二醛(MDA)是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害,其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。测定植物体内丙二醛含量,通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应,生成红棕色的三甲川(3、5、5-三甲基恶唑2、4-二
植物体内丙二醛含量的测定实验
实验方法原理 丙二醛(MDA)是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害,其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。测定植物体内丙二醛含量,通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应,生成红棕色的三甲川(3、5、5-三甲基恶唑2、4-
多糖多酚植物RNA提取的利器
众多文献报道,许多植物由于未能有效地分离纯化出其组织中的RNA, 而阻碍了其分子生物学方面的研究进展。比如Northern杂交分析,体外翻译分析或建cDNA文库,RT-PCR及差异显示分析等研究,都需要高质量的RNA。因此,提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。RNA提取的常见难
单宁酶及多酚氧化酶的作用和特性
单宁是水溶性多酚类物质。主要存在于高粱和豆科子实中。据报道,单宁与胰蛋白酶和淀粉酶或酶的底物反应,降低蛋白质和碳水化合物的利用率。单宁也可以与金属离子等化合物形成沉淀,还可以与维生素B12形成络合物而降低其利用率。 单宁及棉酚是阻碍高粱和棉粕(饼)大量使用的主要因素。现在多用微生物发酵法去除单宁和
植物体内可溶性蛋白质含量的测定(福林-酚法)
该方法是双缩脲法的发展,包括两步反应:(1)在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。(2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原,混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。此方法操作简便,灵敏度比双缩脲法高100倍,定量范围为5~100μg蛋白质。Fol
植物氧化酶的简易鉴定实验
实验方法原理氧化酶能从代谢物上脱氢,并使其与氧直接结合,生成水或双氧水。如细胞色素氧化酶、抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶等。实验材料马铃薯块茎豌豆叶洋葱甘薯黄瓜刻度试管试剂、试剂盒邻苯二酚酒精溶液仪器、耗材电炉实验步骤一、材料与设备材料:马铃薯块茎、豌豆叶、洋葱、甘薯及黄瓜等,20ml刻度试管2支、电炉
植物氧化酶的简易鉴定实验
实验方法原理 氧化酶能从代谢物上脱氢,并使其与氧直接结合,生成水或双氧水。如细胞色素氧化酶、抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶等。实验材料 马铃薯块茎豌豆叶洋葱甘薯黄瓜刻度试管试剂、试剂盒 邻苯二酚酒精溶液仪器、耗材 电炉实验步骤 一、材料与设备材料:马铃薯块茎、豌豆叶、洋葱、甘薯及黄瓜等,20ml刻度试管
植物氧化酶的简易鉴定实验
实验方法原理:氧化酶能从代谢物上脱氢,并使其与氧直接结合,生成水或双氧水。如细胞色素氧化酶、抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶等。 实验材料马铃薯块茎
植物体内氧自由基含量的测定实验
实验方法原理在生物体中,氧作为电子传递的受体,得到单电子时,生成超氧阴离子自由基(O2-)。利用羟胺氧化的方法可以测定生物系统中O2-含量。O2-与羟胺反应生成NO2-,NO2-在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成粉红色的偶氮染料(对-苯磺酸-偶氮-α-萘胺)。取生成物在530nm波长处测定吸光度
植物体内氧自由基含量的测定实验
实验方法原理在生物体中,氧作为电子传递的受体,得到单电子时,生成超氧阴离子自由基(O2-)。利用羟胺氧化的方法可以测定生物系统中O2-含量。O2-与羟胺反应生成NO2-,NO2-在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成粉红色的偶氮染料(对-苯磺酸-偶氮-α-萘胺)。取生成物在530nm波长处测定吸光度
植物体内氧自由基含量的测定实验
实验方法原理 在生物体中,氧作为电子传递的受体,得到单电子时,生成超氧阴离子自由基(O2-)。利用羟胺氧化的方法可以测定生物系统中O2-含量。O2-与羟胺反应生成NO2-,NO2-在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成粉红色的偶氮染料(对-苯磺酸-偶氮-α-萘胺)。取生成物在530nm波长处测定吸光
抗坏血酸氧化酶活性常用的测定方法
酶活性以酶活单位(酶活单位为lmin氧化1 g还原性抗坏血酸的酶量)表示,即酶活单位/g鲜重。常用的测定方法是碘量法,这是一种经典的方法,所用仪器简单,准确性高;二是分光光度法,这种方法灵敏度和准确性高,重演性好,用途广,选择性好;三是氧电极分析法,该法灵敏度高,准确性好,但是氧电极对温度变化非
如何测定葡萄糖氧化酶的活性
测酶活性的实验:.用萃取化学公司法(Amano法的改进型)测定葡萄糖氧化酶(1)试剂①磷酸盐缓冲液(pH7.0):取6.805g磷酸二氢钾(KH2PO4; Merck, Art.4873)溶于350mL蒸馏水中。用1M氢氧化钠溶液(NaOH (4g溶于100ml水))将pH值调至7.0,用蒸馏水定容
多糖多酚植物RNA快速提取的方法
操作步骤:提示:(1) 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇!(2) 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 直接研磨法(推荐):a. 新鲜植物组织称重后取100m
面粉白度测定仪对于鲜切面面粉白度的分析
理想的鲜切面色泽应是细腻洁白或呈奶油黄色,光洁度高,灰暗、无光泽是不受人们喜爱的。在对鲜切面色泽性状的进行选择时,应注意筛选面粉白度高、光泽度好、蛋白质和灰分含量低、支链淀粉含量高的品种,或面粉黄度高的品种。面粉的白度可以通过面粉白度测定仪进行检测,从而更好的生产鲜切面。 多酚