多酚氧化酶(PPO)的分离提取
一、原理与目的多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶,植物受到机械损伤和病菌侵染后,PPO催化酚与O2氧化形成醌,是组织形成褐变,以便损伤恢复,防止或减少感染,提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用,所以伤口醌类物质出现是植物防止伤口感染的愈伤反应,因而受伤组织一般这种酶的活性就会提高。多酚氧化酶也可与细胞内其他底物氧化相偶联,起到末端氧化酶的作用。PPO的存在是水果、蔬菜褐变及营养丧失的主要原因之一。PPO氧化内源的酚类物质生成邻醌,邻醌再相互聚合成醌或蛋白质、氨基酸等作用生成高分子络合物而导致褐色素的生成,色素分子量愈高,颜色愈暗。多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。本实验将采用马铃薯为主要材料,通过组织细胞破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。通过本项实验,学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法,掌握相关仪器设备的操作使用,以及蛋白质的提取、分离的系统技术。二、材料与试......阅读全文
多酚氧化酶(PPO)的分离提取
一、原理与目的多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶,植物受到机械损伤和病菌侵染后,PPO催化酚与O2氧化形成醌,是组织形成褐变,以便损伤恢复,防止或减少感染,提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用,所以伤口醌类物质出现是植物防止伤口感染的愈伤反应,因而受伤组织一般这种酶的活性就会提高。多
多酚氧化酶的提取、纯化和活力测定
实验概要本文介绍了多酚氧化酶提取、纯化和活力测定的原理及方法等。实验原理很多植物受到机械损伤时在空气中会逐渐变成褐色,这是损伤时植物细胞破碎,原来彼此分开的多酚氧化酶和多酚类物质接触反应的结果。反应如下:+H2O多酚氧化酶+1/2O2多酚氧化酶(po1yphenoloxidase,PP0)是一种含铜
多酚氧化酶的提取、纯化和活力测定
实验概要本文介绍了多酚氧化酶提取、纯化和活力测定的原理及方法等。实验原理很多植物受到机械损伤时在空气中会逐渐变成褐色,这是损伤时植物细胞破碎,原来彼此分开的多酚氧化酶和多酚类物质接触反应的结果。反应如下:+H2O多酚氧化酶+1/2O2多酚氧化酶(po1yphenoloxidase,PP0)是一种含铜
多酚氧化酶的制备方法
由丝状菌(Alternaria; Asp. niger; Corio-lus)或担子菌(Cyathus; Polyporus cinereus; Pycno porus coc-cineus; Polyporus; Trametes) 的培养液,用室温以下的水提取后,再在低温下用冷的乙醇、含水乙醇或
多酚氧化酶的检测方法
活性测定常用检压法和分光光度法。前者应用多酚氧化酶(PPO)可催化儿茶素等底物在有氧条件下的氧化还原反应,根据底物的氧化速率与单位酶浓度和单位时间内的耗氧量成正比这一原理,用瓦氏呼吸仪测定反应过程中的耗氧量求得PPO活性的大小,此方法设备简便,但操作复杂,误差较大。后者利用邻苯二酚和D-儿茶素在PP
多酚氧化酶的研究历史
多酚氧化酶(,PPO)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶,普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中,甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的活性。由于其检测方便,是被最早研究的几类酶之一。自1883年Yoghid发现日本漆树液汁变硬可能和某种活性物质相关,1938年Keilin D.和Mann
关于多酚氧化酶的简介
多酚氧化酶是一类含铜的氧化还原酶。编号:EC 1.10.3.1(编号:EC 1.14.18.1)。催化邻苯二酚氧化成邻苯二醌,也能作用于单酚单加氧酶的底物。淡黄至暗褐色粉末或液体。溶于水,不溶于乙醇。有吸湿性。相对分子质量约为125000,最适pH为6.5,最适温度为2℃。 多酚氧化酶是种末端
多酚氧化酶的研究方向
PPO与抗病性的关系人们已进行了广泛的研究[32]。植物在抵御病原微生物的侵染过程中,抗性相关酶发挥了重要作用,这主要包括了酚类代谢系统中的一些酶和病原相关蛋白家族PPO通过催化木质素及醌类化合物形成,构成保护性屏蔽而使细胞免受病菌的侵害,也可以通过形成醌类物质直接发挥抗病作用。目前已比较成功的有:
多酚氧化酶的制备方法
由丝状菌(Alternaria; Asp. niger; Corio-lus)或担子菌(Cyathus; Polyporus cinereus; Pycno porus coc-cineus; Polyporus; Trametes) 的培养液,用室温以下的水提取后,再在低温下用冷的乙醇、含水乙醇或
多酚氧化酶的基本信息
多酚氧化酶是一类含铜的氧化还原酶 。编号:EC 1.10.3.1 [1] (编号:EC 1.14.18.1 )。催化邻苯二酚氧化成邻苯二醌,也能作用于单酚单加氧酶的底物 。淡黄至暗褐色粉末或液体。溶于水,不溶于乙醇。有吸湿性。相对分子质量约为125000,最适pH为6.5,最适温度为2℃。多
多酚氧化酶的理化性质
酶蛋白具有一般蛋白质的特性,在高温或低温条件下有易变性失活的特点。各类酶均有其活性的最适温度范围,一般在30C~50℃范围内酶活性最强。酶若失活、变性,则就丧失了催化能力。酶的催化作用具有专一性,如多酚氧化酶,只能使茶多酚物质氧化,聚合成茶多酚的氧化产物茶黄素、茶红素和茶褐素等;蛋白酶只能促使蛋白质
多酚氧化酶的基本信息
多酚氧化酶是一类含铜的氧化还原酶 。编号:EC 1.10.3.1 (编号:EC 1.14.18.1 )。催化邻苯二酚氧化成邻苯二醌,也能作用于单酚单加氧酶的底物 。淡黄至暗褐色粉末或液体。溶于水,不溶于乙醇。有吸湿性。相对分子质量约为125000,最适pH为6.5,最适温度为2℃ 。多酚氧化
多酚氧化酶的理化性质
酶蛋白具有一般蛋白质的特性,在高温或低温条件下有易变性失活的特点。各类酶均有其活性的最适温度范围,一般在30C~50℃范围内酶活性最强。酶若失活、变性,则就丧失了催化能力。酶的催化作用具有专一性,如多酚氧化酶,只能使茶多酚物质氧化,聚合成茶多酚的氧化产物茶黄素、茶红素和茶褐素等;蛋白酶只能促使蛋白质
多酚氧化酶的研究历史简介
多酚氧化酶(,PPO)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶,普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中,甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的活性。由于其检测方便,是被最早研究的几类酶之一。自1883年Yoghid发现日本漆树液汁变硬可能和某种活性物质相关,1938年Keilin D.和Ma
多酚氧化酶的检测方法介绍
常用检压法和分光光度法。前者应用多酚氧化酶(PPO)可催化儿茶素等底物在有氧条件下的氧化还原反应,根据底物的氧化速率与单位酶浓度和单位时间内的耗氧量成正比这一原理,用瓦氏呼吸仪测定反应过程中的耗氧量求得PPO活性的大小,此方法设备简便,但操作复杂,误差较大。后者利用邻苯二酚和D-儿茶素在PPO催
多酚氧化酶的活性测定方法
常用检压法和分光光度法。前者应用多酚氧化酶(PPO)可催化儿茶素等底物在有氧条件下的氧化还原反应,根据底物的氧化速率与单位酶浓度和单位时间内的耗氧量成正比这一原理,用瓦氏呼吸仪测定反应过程中的耗氧量求得PPO活性的大小,此方法设备简便,但操作复杂,误差较大。后者利用邻苯二酚和D-儿茶素在PPO催化下
植物中的多酚氧化酶及作用
在植物(如苹果、荔枝、菠菜、马铃薯、豆类、茶叶、桑叶、烟草等)组织中,PPO是与内囊体膜结合在一起的,天然状态无活性,但将组织匀浆或损伤后PPO被活化,从而表现出活性。在果蔬细胞组织中,PPO存在的位置因原料的种类、品种及成熟度的不同而有差异,绿叶中PPO活性大部分存在于叶绿体内;马铃薯块茎中几乎所
植物中的多酚氧化酶及作用
在植物(如苹果、荔枝、菠菜、马铃薯、豆类、茶叶、桑叶、烟草等)组织中,PPO是与内囊体膜结合在一起的,天然状态无活性,但将组织匀浆或损伤后PPO被活化,从而表现出活性。在果蔬细胞组织中,PPO存在的位置因原料的种类、品种及成熟度的不同而有差异,绿叶中PPO活性大部分存在于叶绿体内[7];马铃薯块茎中
植物中的多酚氧化酶及作用
在植物(如苹果、荔枝、菠菜、马铃薯、豆类、茶叶、桑叶、烟草等)组织中,PPO是与内囊体膜结合在一起的,天然状态无活性,但将组织匀浆或损伤后PPO被活化,从而表现出活性。在果蔬细胞组织中,PPO存在的位置因原料的种类、品种及成熟度的不同而有差异,绿叶中PPO活性大部分存在于叶绿体内[7];马铃薯块
多酚氧化酶的理化性质介绍
酶蛋白具有一般蛋白质的特性,在高温或低温条件下有易变性失活的特点。各类酶均有其活性的最适温度范围,一般在30C~50℃范围内酶活性最强。酶若失活、变性,则就丧失了催化能力。酶的催化作用具有专一性,如多酚氧化酶,只能使茶多酚物质氧化,聚合成茶多酚的氧化产物茶黄素、茶红素和茶褐素等;蛋白酶只能促使蛋
多酚氧化酶的纯化和活力测定
实验原理很多植物受到机械损伤时在空气中会逐渐变成褐色,这是损伤时植物细胞破碎,原来彼此分开的多酚氧化酶和多酚类物质接触反应的结果。反应如下: +H2O 多酚氧化酶 +1/2O2 多酚氧化酶(po1yphenoloxidase,PP0)是一种含铜酶,它能够催化酚类物质转变成
多糖多酚植物RNA提取的利器
众多文献报道,许多植物由于未能有效地分离纯化出其组织中的RNA, 而阻碍了其分子生物学方面的研究进展。比如Northern杂交分析,体外翻译分析或建cDNA文库,RT-PCR及差异显示分析等研究,都需要高质量的RNA。因此,提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。RNA提取的常见难
多酚氧化酶活性的测定(氧电极法)
原理 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化生成醌。多酚氧化酶活性可以用氧电极测量反应耗氧的速度,或用比色法测量产物的形成,常用的底物如儿茶酚(邻苯二酚)和多巴(3,4-二羟苯丙氨酸)。 仪器药品 测氧仪
PPO活性测定——分光光度法
PPO活性测定可应用于:(1)研究PPO生理机制与调节。(2)了解酶的活性与植物组织褐变以及生理活动之间的关系。实验方法原理PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物,在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中,PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌,在分光光度计410
PPO活性测定
分光光度法 实验方法原理 PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物,在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中,PPO
多糖多酚植物RNA快速提取的方法
操作步骤:提示:(1) 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇!(2) 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 直接研磨法(推荐):a. 新鲜植物组织称重后取100m
单宁酶及多酚氧化酶的作用和特性
单宁是水溶性多酚类物质。主要存在于高粱和豆科子实中。据报道,单宁与胰蛋白酶和淀粉酶或酶的底物反应,降低蛋白质和碳水化合物的利用率。单宁也可以与金属离子等化合物形成沉淀,还可以与维生素B12形成络合物而降低其利用率。 单宁及棉酚是阻碍高粱和棉粕(饼)大量使用的主要因素。现在多用微生物发酵法去除单宁和
植物PPO的研究现状及展望
PPO与抗病性的关系人们已进行了广泛的研究[32]。植物在抵御病原微生物的侵染过程中,抗性相关酶发挥了重要作用,这主要包括了酚类代谢系统中的一些酶和病原相关蛋白家族PPO通过催化木质素及醌类化合物形成,构成保护性屏蔽而使细胞免受病菌的侵害,也可以通过形成醌类物质直接发挥抗病作用。目前已比较成功的
面粉白度测定仪对于鲜切面面粉白度的分析
理想的鲜切面色泽应是细腻洁白或呈奶油黄色,光洁度高,灰暗、无光泽是不受人们喜爱的。在对鲜切面色泽性状的进行选择时,应注意筛选面粉白度高、光泽度好、蛋白质和灰分含量低、支链淀粉含量高的品种,或面粉黄度高的品种。面粉的白度可以通过面粉白度测定仪进行检测,从而更好的生产鲜切面。 多酚
植物体内多酚氧化酶活性的测定实验
实验方法原理多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,在有氧的条件下,能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度,即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下:.实验材料马铃薯块茎试剂、试剂盒聚乙烯吡咯烷酮磷酸缓冲液磷酸缓冲液和度硫酸铵儿茶酚三氯乙酸仪器、耗材UV-1206UV-1