使用引物延伸荧光偏振探测法的高通量基因分型实验1
单重 PCR 的引物延伸法实验材料目的基因组DNA试剂、试剂盒10 X PCR 缓冲液4dNTP 混合液Taq DNA 聚合酶SNP 引物仪器、耗材384孔黑色 PCR 板多管移液器或液体操作工作站384孔 PCR 板封口垫带加热盖的热循环仪FP 读板设备实验步骤展开......阅读全文
小片段法进行基因分型（一）
摘要： 背景：用于基因分型的高分辨率熔解曲线技术既简单又有效。在以熔解为基础的方法中，探针法是基因分型的黄金标准，可以将等位基因与目标的匹配完全区分开。小片段基因分型法是代替探针的基因分型法。异源双链核酸分子的存在使得检测纯合子变得容易，其熔解峰的形状有明显的改变。纯合子G/C或A/T的基
小片段法进行基因分型（二）
结果： 图1显示的是校正之前的完整的熔解峰显示。 从低温和高温内标及扩增子熔解的中部区分熔解信号。图1：派生熔解曲线显示校准和扩增子的熔解峰。左边和右边的峰是校准内标的峰。94的熔解剖面图，接近76℃，从独立的PCR反应中生成。校准分子没有对其，纯合子的扩增峰没有清楚的分开。中部最窄且
引物延伸分析（primer－extension－analysis）
引物延伸分析（primer extension analysis）主要用于mRNA 5′端作图。poly（A）+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mRN
引物延伸分析（primer－extension－analysis）
引物延伸分析（primer extension analysis）主要用于mRNA 5′端作图。poly（A）+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mR
HLA基因分型方法：PCR－SSP法
PCR－SSP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增操作方法基本同PCR-RFLP，但引物是根据各等位基因的核苷酸序列设计的特异性引物，主要是针对第二外显子区域的多态性，用SSP扩增出来的产物具等位基因特异性。 3）凝胶电泳取PCR扩增的产物与上样缓冲液混合，加入2％琼脂糖凝胶加样孔中，其内
HLA基因分型方法：PCR－SSCP法
PCR－SSCP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP，也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。 3）非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳1．取PCR的扩增产物，加凝胶加样液3μl，95℃加热变性2min，冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍，加样3μl。2．取样品用微量
HLA基因分型方法：PCR－RFLP法
PCR－RFLP法1）提取细胞总DNA方法同前。 2）PCR扩增引物的设计1．引物长度一般为15～30bp，G＋C含量应在45％～55％之间。2．应避免连续出现4个以上的单一碱基。3．不能含有自身互补序列。4．两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体。5．与非特异扩增序列的同
人类血小板抗原1～4系统基因分型
关键词： PCR-SSP；人类血小板抗原；基因分型 摘要 目的：建立人类血小板抗原1～4系统序列特异性引物（PCR-SSP）分型方法。方法：合成14条引物，采用PCR-SSP方法对25名健康献血者的HPA-1～4系统进行基因分型；分型结果与采用等位基因特异性寡核苷酸点杂交（PCR-ASO）获得的
人类血小板抗原1～4系统基因分型
迄今，国际上已报道了9个血小板特异性抗原系统，包括人类血小板抗原（HPA）系统1～8以及Naka抗原。这些抗原都是在血小板输注和怀孕介导的同种免疫过程中被发现的。在现代临床输血工作中，为了能给新生儿同种免疫血小板减少症（NAITP）、输血后紫癜（PTP）以及血小板输注无效（PTR）等患者提供正确、及
荧光偏振的用途
荧光偏振免疫分析常用于测定半抗原的药物浓度。反应系统内除待测抗原外，同时加入一定量用荧光素标记的小分子抗原，使二者与有限量的特异性大分子抗体竞争结合。当待测抗原浓度高时，经过竞争反应，大部分抗体被其结合，而荧光素标记的抗原多呈游离的小分子状态。由于其分子小，在液相中转动速度较快，测量到的荧光偏振程度
偏振荧光分析
任何物质都处于不断运动中，液体环境中的荧光分子也不例外。因此当受到偏振光激发时，荧光分子的运动状态(如旋转或翻转)、荧光分子与其他因子相互作用(如相互结合或排斥)、其所处环境的性质(如溶液的黏度、温度_等因素都可能对荧光分子受激发后发出的偏振光的性质产生影响。对此进行分析比较，就可能揭开物质活动的内
荧光偏振简介
Perrin于1926年首先描述了荧光偏振理论，他观察到溶液中的荧光分子在受到偏振光激发时，如果在激发时分子保持静止，该分子将发出固定偏振平面的发射光（发射光仍保持偏振性）。然而，如果分子旋转或翻转那么发射光的偏振平面将不同于初始激发光的偏振平面。分子的偏振性与分子旋转驰豫时间成比例，分子旋转驰豫时
荧光定量PCR技术及其应用（一）
荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简
荧光定量PCR技术及其应用（一）
荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简
FQPCR技术简述
FQ-PCR技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。其特点、原理和方法以及应用简述如下。1 原理和方法FQ-PCR的工作原理是利用Taq酶的5’→3’外切酶活性，在PCR反应系统中加入一个荧光标记探针。该探针可与引物包含序列内的DNA模
高分辨熔解曲线法HRM实现基因分型
HRM实现基因分型基因分型在动物、植物、微生物的物种、菌种筛查、筛选、缺陷、突变基因的检测，根据个体基因类型实现对诸如癌症治疗、监测等的精准用药，以及消费类基因检测如酒精代谢能力基因检测等等领域有很多应用。通常，基因分型SNP采用荧光探针终点法，检测一个位点需要两个荧光探针，如一个探针的荧光报告基团
荧光定量PCR技术特点、原理及其应用1
荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ- PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及
全自动核酸分子诊断系统的某些进展（一）
摘 要 随着后基因组时代的到来，全自动核酸分子诊断系统得到了广泛的应用。本文立足于国内外医疗仪器市场全自动核酸分子诊断系统的现状，介绍了全自动核酸分子诊断系统的基本组成及其关健技术。在此基础上介绍了国际上全自动分子诊断系统的主要生产商及其产品，并对具有代表性的几个产品的特点进行了分析。最后对全自动核
高通量筛选的FLIPR荧光检测法介绍
近年来,光学测定技术在美、英两国研究人员在高通量筛选检测中，努力进行了光学测定方法的研究，建立了大量的非同位素标记测定法，如用分光光度检测法筛选蛋白酪氨酸激酶抑制剂、组织纤溶酶原激活剂等，均获得成功。 放射性检测技术美国学者GanieSM在高通量药物筛选研究中，应用放射性测定法，特别是亲和闪烁
盘点：单核苷酸多态性（SNP）检测方法
单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms, SNP)主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，包括碱基的颠换、转换、插入和缺失。它是人类可遗传变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90%以上。SNP作为第三代分子标记，被广泛应用于分子
chip实验的input的引物是目的基因的引物吗
引物（primer），又名引子。是一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链，在引物的3′-OH上，核苷酸以二酯链形式进行合成，因此引物的3′-OH，必须是游离的。之所以需要引物是因为在DNA合成中DNA聚合酶仅仅可以把
HLA基因分型方法：PCR－指纹图法
PCR－指纹图法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP法 3）凝胶电泳取PCR产物10μl，加2μl的6×上样缓冲液，经12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，200V，2～3h。再用溴化乙锭染色30min，照相分析结果。
随机引物法（利用随机寡核苷酸延伸进行DNA的放射标记）
实验方法原理 此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983，1984)。 实验材料
“谁”动了我的扩增曲线？
各位老师在做荧光定量PCR实验的时候，是否遇到过非标准“S”型曲线的问题呢？俗话说的好，完美的PCR扩增曲线“千篇一律”，而有问题的PCR扩增曲线则是“千姿百态”。今天给大家分享一个案例：客户反映做绝对定量过程中，扩增曲线在线性增长期出现荧光信号突然下降的情况，在多组分图（Multicomponen
基因翻译的延伸
此过程在真核细胞和原核细胞中高度类似，下面只以原核细胞为例进行讨论。涉及到的因子主要有EF·Tu和EF·G，在真核细胞中对应的名称分别是是eEF1和eEF2。A. tRNA的转运和入位（1）非起始AA·tRNA结合EF·Tu·GTP形成一个三元复合物；（2）该三元复合物结合至核糖体P位点，tRNA反
FPA荧光偏振仪器
哨兵Sentry 200 是一款坚固，轻便，便携的单管仪器，专为进行荧光偏振分析而设计。所有必要的光学，电子和计算能力都包含在仪器中，可以独立于计算机使用。哨兵 Sentry 200 采用由Diachemix LLC 开创的革命性 LCD 光偏振技术（LCDp）。LCDp比传统的过滤开关技术运行
法医－－SNP－－复合检测体系的构建及应用
【摘要】目的 构建48-SNP 位点复合检测体系，用于个体识别、性别鉴定、ABO 基因分型。方法 采集225 份无关个 体样本( 血斑及口腔拭子) ， 18 份案例样本( 不同组织及体液斑) ，选择43 个常染色体位点、 4 个 ABO 基因位点和1 个性别 鉴定位点，根据单碱基延伸技术通过 Gen
MD应用文章下载:SNP基因分型高通量检测方法新思路
MD应用文章下载:SNP基因分型高通量检测方法新思路SNP基因分型高通量检测方法新思路单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP），主要指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90%以
DNA测序技术的现状和发展（五）
1.3 AB SOLiD测序仪AB SOLiD测序仪可以对由任何方法制成的DNA文库进行测序。AB SOLiD测序仪有一个极大的特点就是能够将富集模板片段的微珠在芯片上进行高度可控的任意排列。AB SOLiD测序仪也是使用如图5a中所示的微乳液PCR方法扩增模板片段的，不过，它这里使用的
SNP－的检测方法
SNP 的分型技术可分为两个时代，一为凝胶时代，二为高通量时代。凝胶时代的主要技术和方法包括限制性酶切片段长度多态性分析（RFLP）、寡核苷酸连接分析（OLA）、等位基因特异聚合酶链反应分析（AS2PCR）、单链构象多态性分析（SSCP）、变性梯度凝胶电泳分析（DGGE），虽然这些技术与高通量时代的