HLA基因分型方法：PCR－RFLP法
PCR－RFLP法1）提取细胞总DNA方法同前。 2）PCR扩增引物的设计1．引物长度一般为15～30bp，G＋C含量应在45％～55％之间。2．应避免连续出现4个以上的单一碱基。3．不能含有自身互补序列。4．两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体。5．与非特异扩增序列的同源性应小于70％，或少于连续8个互补碱基。6．扩增HLA-D区基因多态性区段的引物应在该区第二外显子或高变区的边缘。 3）PCR扩增1．每100μl反应体系中分别加入：缓冲液10μl，引物各25pmol，DNA 1～2μg，10μl dNTPs，混合均匀后在95～97℃变性5～10min。2．加Taq DNA聚合酶2U，液体石蜡50μl覆盖放置水分蒸发，将样品置PCR扩增仪中完成扩增反应，变性，退火，延伸温度时间及Mg2＋的浓度随扩增引物及区段的不同而改变。 4）限制性内切酶消化取5μl PCR产物分别用......阅读全文
HLA基因分型方法：PCR－RFLP法
PCR－RFLP法1）提取细胞总DNA方法同前。 2）PCR扩增引物的设计1．引物长度一般为15～30bp，G＋C含量应在45％～55％之间。2．应避免连续出现4个以上的单一碱基。3．不能含有自身互补序列。4．两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体。5．与非特异扩增序列的同
HLA基因分型方法：RFLP法
RFLP法1）常规制备DNA盐析法1．用淋巴细胞分离液从抗凝血中分离出白细胞。2．每3ml细胞悬液加10ml红细胞裂解液溶解红细胞两次，再加2ml白细胞裂解液溶解白细胞。3．加50μl 10％ SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白质，37℃过夜或55℃ 3h。4．加0.25体积饱和醋酸钠溶液，剧烈摇动1
HLA基因分型方法：PCR－SSP法
PCR－SSP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增操作方法基本同PCR-RFLP，但引物是根据各等位基因的核苷酸序列设计的特异性引物，主要是针对第二外显子区域的多态性，用SSP扩增出来的产物具等位基因特异性。 3）凝胶电泳取PCR扩增的产物与上样缓冲液混合，加入2％琼脂糖凝胶加样孔中，其内
HLA基因分型方法：PCR－SSCP法
PCR－SSCP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP，也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。 3）非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳1．取PCR的扩增产物，加凝胶加样液3μl，95℃加热变性2min，冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍，加样3μl。2．取样品用微量
HLA分型方法
1.淋巴细胞毒试验 为HLA抗原分型常用方法。2.混合淋巴细胞培养试验本方法多用于组织相容性方面的研究，临床上主要用于器官移植。3.分子生物学技术一类是PCR为基础的基因分型。另一类是以测序为基础的基因分型。
HLA基因分型方法：PCR－指纹图法
PCR－指纹图法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP法 3）凝胶电泳取PCR产物10μl，加2μl的6×上样缓冲液，经12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，200V，2～3h。再用溴化乙锭染色30min，照相分析结果。
HLA分型的方法
①淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（＞20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原分型时可用T淋巴细胞或外周血淋巴细胞；进行Ⅱ类抗原分型时需用B淋巴细胞。②混合淋巴细胞培养试验：多
HLA的分型方法
HLA的分型方法是检验主管技师考试要求掌握的内容，医学教育网搜集整理相关内容供大家参考。 1.淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（>20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原
HLA细胞法分型试验简介
HLA-D和DP位点的抗原须用细胞法分型进行鉴定，所以又称LD抗原（lymphocytedefinedantigen），其鉴定方法普遍采用混合淋巴细胞培养（mixedlymphocyteculture，MLC），也称混合淋巴细胞反应（mixedlymphocytereaction，MLR）。1.试验
HLA细胞法分型试验简介
HLA-D和DP位点的抗原须用细胞法分型进行鉴定，所以又称LD抗原（lymphocytedefinedantigen），其鉴定方法普遍采用混合淋巴细胞培养（mixedlymphocyteculture，MLC），也称混合淋巴细胞反应（mixedlymphocytereaction，MLR）。
HLA细胞法分型试验介绍
HLA细胞法分型试验介绍： HLA-D和DP位点的抗原须用细胞法分型进行鉴定，所以又称LD抗原，其鉴定方法普遍采用混合淋巴细胞培养，也称混合淋巴细胞反应。 1.试验方法将分离的反应细胞（通常是患者的淋巴细胞）与刺激细胞（通常是供者或已知的标准淋巴细胞）配制成1×106/ml浓度的悬液，各加0.
HLA细胞法分型试验介绍
HLA细胞法分型试验介绍：HLA-D和DP位点的抗原须用细胞法分型进行鉴定，所以又称LD抗原，其鉴定方法普遍采用混合淋巴细胞培养，也称混合淋巴细胞反应。1.试验方法将分离的反应细胞（通常是患者的淋巴细胞）与刺激细胞（通常是供者或已知的标准淋巴细胞）配制成1×106/ml浓度的悬液，各加0.2ml到反
HLA有哪些分型方法？
①淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率(>20%为阳性反应)。Ⅰ类抗原分型时可用T淋巴细胞或外周血淋巴细胞；进行Ⅱ类抗原分型时需用B淋巴细胞。②混合淋巴细胞培养试验：多
关于HLA分型的DNA分型方法介绍
DNA分型主要分为两种方法：基于核酸序列识别的方法和基于序列分子构型的方法，常用的方法大致可分为大类： ①限制性片段长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism，RFP)。其原理是不同的DNA膜板山于序列的差异在限制性内切酶作用下将被切成大小
HLA分型技术
HLA分型技术主要组织相容性复合物（MHC）是脊椎动物体内最复杂且具有高度多态性的基因群。1984年George Snell 首次发现小鼠MHC即H－2，1958年Dausset 发现了人的MHC即HLA基因。MHC的表达产物称为主要组织相容性抗原，MHC抗原是有核细胞表面膜蛋白分子，对抗原递呈和免
HLA的分型方法有什么？
①淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（>20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原分型时可用T淋巴细胞或外周血淋巴细胞；进行Ⅱ类抗原分型时需用B淋巴细胞。 ②混合淋巴细胞培养
HLA基因分型方法：PCR－SSO（ASO）探针法
PCR－SSO（ASO）探针法1）常规提取DNA参见RFLP法 2）PCR扩增参见PCR-RFLP法 3）斑点杂交1．将5～20μl扩增产物，加变性液100～200μl室温处理5～15min。2．在尼龙滤膜（预先用2×SSC浸湿2min）上真空点样，每孔以10×SSPE 200μl冲洗，抽干，80℃
HLA分型技术（二）
（二)PCR/SSO技术 此法乃用人工合成的HLA型别特异的寡核苷酸序列作为探针，与待检细胞经PCR扩增的HLA基因片段杂交，从而确定HLA型别，PCR技术可将HLA复合体上指定基因片段特异性地扩增5～6个数量级；而专门设计的SSO（序列特异的寡核苷酸sequencedpecific ol
HLA分型技术（一）
HLA分型并不只是一种应用性的临床检测指标，免疫遗传学研究的发展，很大程度上依赖于以分型为主要手段的HLA多态性分析。60年代建立的并不断完善的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性；80年代起建立的DNA分型方法则侧重于基因的分型。 一、血清学分型技术 （一)HLA-Ⅰ类抗原
HLA分型的常用方法有哪些？
1.分子生物学技术： 一类是PCR为基础的基因分型，一类是以测序为基础的基因分型。2.淋巴细胞毒试验： 为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（＞20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原分型时可用T
分子生物学分型法有哪些？
（一）RFLP与PCR－RFLP分型法 限制性片段长度多态性（RFLP）分析，称为DNA－RFLP。DNA片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度增加，此类方法称为PCR-RFLP分型法。PCR－RFLP分型法所应用的PCR引物为HLA组特异性的，此法特别适应于
sbt做hla基因分型分析怎么做
sbt做hla基因分型分析怎么做HLA系统研究从70年代到80年代末期主要是血清学研究；90年代以来，HLA进入了分子水平研究阶段。HLA分型技术同样走过了这一历程。建立于60年代的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性。1991年第11届国际HLA专题讨论上提出了HLA的DNA分型方
HLA分型的血清学方法介绍
1964Terasaki建立了HLA微量淋巴胞毒实验方法来分析受试者的HLA型别，其主要过程是从全血或淋巴组织中分离出淋巴细胞，与HLA-特异性抗体包被的微孔板孵育，加入补体，使能与淋巴细胞表面HA抗原结合的特异性抗体通过经典途径激活补体，导致靶细胞水解(淋巴细胞毒性)。多年来这种血清学方法是确
关于HLA分型高分辨分型应用的介绍
1、地中海贫血治疗 2、造血干细胞移植异基因造血干细胞移植是现能根治重型Β地贫的方法。如有HLA相配的造血干细胞供者，应作为治疗重型Β地贫的首选方法。 3、急性白血病，骨髓移植。 4、对ANLL疗效较好。 ①同基因骨髓移植，供者为同卵孪生子。 ②同种异基因骨髓移植，供者为患者的兄弟姐妹
关于HLA基因复合体的分型技术介绍
HLAⅠ类抗原的DQ、DR用血清学检测法进行分型，因此在方法学上称为血清学鉴定的抗原（serologicallydefinedantigen，SD抗原）；DP和D特性需用细胞学方法进行检测，因此称为淋巴细胞鉴定的抗原（lymphocytedefinedantigen，LD抗原）。虽然HLA的基因
简述HLA低分辨分型的内容
采用序列特异性引物扩增HLA等位基因的特异性片段，经电泳分离，根据PCR结果的反应格局具判断被测标本的HLA等位基因型，具有通量大、正确性好的特点。反映了HLA抗原水平的等位基因类型，用于骨髓、器官移植组织配型的初筛。
关于HLA高分辨分型的介绍
过去治疗白血病通常是通过骨髓移植进行的，由于必须在麻醉状态下抽取骨髓捐献者的部分骨髓，整个过程对捐献者产生非常大的心理压力。现随着科学进步，只需抽取若干毫升静脉血，分离出干细胞，再输入患者体内即可。首先抽取患者和捐献者的静脉血样本，提取DNA，测出各自DNA碱基的顺序，最后通过软件比对分析得出H
HLA分型的基本信息介绍
HLA(humanleucocyteantigen)复合体是人类多态性最丰富的遗传系统，定位于第6号染色体短臂6P21.31区，长3600kb。1999年已完成全部序列分析及基因定位，在此区域内共确认了224个基因座位中128个为功能性基因，其中39.8%和免疫功能相关。HLA基因根据其编码分子
关于HLA分型的技术发展介绍
HLA系统研究从70年代到80年代末期主要是血清学研究，90年代以来，HLA进入了分子水平研究阶段。HLA分型技术同样走过了这一历程。建立于60年代的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性。1991年第11届国际HLA专题讨论上提出了HLA的DNA分型方法，随着测序技术的突飞猛进，
关于HLA分型的基本信息介绍
HLA分型 (HUMAN LEUCOCYTE ANTIGEN），即人类白细胞抗原)是一个由一系列紧密连锁的基因座位所组成的具有高度多态性的复合体。主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)是由染色体上一组编码与细胞间识别和抗原呈递相关蛋白的高