技术和方案15酵母菌落PCR
实验步骤......阅读全文
酵母菌落PCR方法
问：很郁闷，zui近在做电转毕赤酵母，但是转化完了没有合适的筛选方法，如果提基因组的话费时费钱，而且由于我这个电转的几率十分低，也就有1%-10%，所以想用菌落PCR方法筛选，但酵母菌破壁很困难，如果处理不好的话基因组释放不出来，就没有阳性结果了。查了一些资料说用反复冻融法，是不是直接挑单菌落就行了
利用PCR分析酵母菌落
利用PCR分析酵母菌落主要用于确定酵母中是否携带目的DNA序列。实验方法原理用 PCR 分析酵母菌落时，无需纯化 DNA。本方案以单个酵母菌落的粗裂解液作为 PCR 扩增的模板，来确定酵母中是否携带目的 DNA 序列。 实验材料Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 标准参照物YAC 重组子的酵母
利用PCR分析酵母菌落
实验方法原理 用 PCR 分析酵母菌落时，无需纯化 DNA。本方案以单个酵母菌落的粗裂解液作为 PCR 扩增的模板，来确定 YAC 中是否携带目的 DNA 序列。实验材料 Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 标准参照物YAC 重组子的酵母菌株试剂、试剂盒 PCR 缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材
利用PCR分析酵母菌落
利用PCR分析酵母菌落 实验方法原理 用 PCR 分析酵母菌落时，无需纯化 DNA。本方案以单个酵母菌落的粗裂解液作为 PCR 扩增的模板，来确定酵母中是否携
酵母遗传学方法12：酵母菌落PCR方法
酵母菌落PCR方法1．在冰上配制反应混合液：2μl 10×菌落PCR缓冲液1.2μl 25mmol/L MgCl20.4μl 10mmol/L dNTPs10pmol 引物
技术和方案15－酵母菌落PCR
实验步骤
菌落PCR
菌落PCR可用于：（1）重组体的筛选；（2）重组体DNA测序分析。实验方法原理直接挑取菌落进行PCR，PCR的95℃加热可以破胞，释放基因组DNA或质粒，成为PCR体系的模板，然后进行链式扩增。实验材料菌落样品试剂、试剂盒dNTPPCR混合液仪器、耗材PCR仪实验步骤1. PCR混合液的制备（1）
菌落PCR
实验方法原理 直接挑取菌落进行PCR，PCR的95℃加热可以破胞，释放基因组DNA或质粒，成为PCR体系的模板，然后进行链式扩增。 实验材料 菌落样品
菌落PCR
实验方法原理 直接挑取菌落进行PCR，PCR的95℃加热可以破胞，释放基因组DNA或质粒，成为PCR体系的模板，然后进行链式扩增。实验材料 基因样品试剂、试剂盒 dNTPPCR混合液仪器、耗材 PCR仪实验步骤 1. PCR混合液的制备（1）Taq buffer（10×） 180 ul（2）dNT
菌落PCR（Colony－PCR）方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。具体方法：1、PCR混合物的制备T
菌落pcr步骤
一、引言常规的PCR扩增需要进行细菌培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增,操作繁琐耗时较长,同时在反复的操作中DNA量损失也较大,产率较低。在1989年 Gussow Clackson3建立了菌落PCR( colony PCR)法,菌落PR与我们通常的普通DNA的PCR的不同在于,直接以单个菌
菌落PCR实验
菌落PCR标签： 菌落 PCR菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。
菌落PCR（Colony－PCR）具体方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。具体方法：1、PCR混合物的制
酵母菌落直接质粒转化法
酵母菌落直接质粒转化法1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。3．加0.5ml PL
什么是菌落pcr假阳性
利用菌落作为模板进行PCR扩增，验证该菌落里是否带有目标片段。但是由于PCR是一个级联放大的过程，所以即使菌落中不含有目标片段，而是菌落表面沾有一部分之前连接，转化中用的目标DNA，也会导致PCR获得扩增条带，从而误认为这个菌落已经带有了目标片段，称之为假阳性。可以通过提质粒酶切，或者测序验证，排除
菌落PCR，快速鉴定重组质粒
质粒快速鉴定 试剂： Protoplasting buffer: 30mM Tris-HCl, pH8.0 0.33ml/1.0M 5mM EDTA 0.1ml/0.5M
酿酒酵母培养条件实验——菌落的影印培养
实验材料酵母集落天鹅绒仪器、耗材平板实验步骤1. 将一块灭菌的方天鹅绒绒面向上展平在复制柱上，并用金属环固定，注意不要接触天鹅绒表面。2. 把有酵母集落的平板翻过来，小心放在天鹅绒表面上，轻轻地用力以保证所有的集落压印在绒面上。3. 慢慢将平板移开，使尽量多的接种物黏在天鹅绒上。4. 将一个新平板翻
酵母菌形态及菌落特征的观察
一、目的要求 1．观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。2．观察酵母菌的菌落特征。3. 学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。 二、基本原理 酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖
细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落观察和细菌菌落制片
实验概要1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特征。2．学习细菌菌落制片的方法。实验原理 菌落形态是指某种微生物在一定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用观察这些特征，来区分各大类微生物及初
细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落观察和细菌菌落制片实验
实验方法原理利用血液培养基富有营养及粘性等特性来培养细菌，在此培养基上生长的菌落在固定时粘性很大，能够牢固地附着在载玻片或盖玻片上，便于制片和观察。另外，血液培养基又是较好的保存菌种用培养基，故由此培养基所制的菌落制片能保存较长时间。实验材料圆褐固氮菌枯草芽孢杆菌灰色链霉菌酿酒酵母白色葡萄球菌试剂、
细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落观察和细菌菌落制片实验
实验方法原理 利用血液培养基富有营养及粘性等特性来培养细菌，在此培养基上生长的菌落在固定时粘性很大，能够牢固地附着在载玻片或盖玻片上，便于制片和观察。另外，血液培养基又是较好的保存菌种用培养基，故由此培养基所制的菌落制片能保存较长时间。实验材料 圆褐固氮菌枯草芽孢杆菌灰色链霉菌酿酒酵母白色葡萄球菌试
菌落－PCR－分析克隆的重组体实验
菌落 PCR 分析克隆的重组体实验试剂、试剂盒溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 缓冲液热稳定 DNA 聚合酶引物仪器、耗材无菌枪头琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂（Stratagen
菌落－PCR－分析克隆的重组体实验
实验方法原理 菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。使用载体上的通用引物，进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用
菌落pcr会出现假阳性结果吗
最近做酶切连接转化，最后做鉴定时，以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带;当把菌落接种到LB液扩菌后，以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以菌落为模板进行PCR检测，再重新以菌液为模板进行PCR检测，因为菌落或者菌液PCR假阳性的几率还是比较高的。但
菌落－PCR－分析克隆的重组体实验
试剂、试剂盒 溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 缓冲液 热稳定 DNA 聚合酶引物仪器、耗材 无菌枪头琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂（Stratagene)Tween20，10%
比较细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落特征
菌落特征比较：细菌：湿润，粘稠，易挑起。放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌zhi落较小，多有色素。酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚。霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状。无固定大小，多有光泽，不易挑起。生长在固体培养基上，由单个细胞繁殖形成的、肉眼可见的细菌群体。
比较细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落特征
菌落特征比较：细菌：湿润，粘稠，易挑起。放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌zhi落较小，多有色素。酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚。霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状。无固定大小，多有光泽，不易挑起。生长在固体培养基上，由单个细胞繁殖形成的、肉眼可见的细菌群体。
菌落PCR的操作步骤及仪器有哪些
1.取15-20ul Tris-HCl 放到编好号的0.5ml 的ep管中2.用灭菌牙签，或枪头，沾取少量菌体（多了效果不好）3.并将枪头或牙签在刚取出来的Tris-HCl中涮一下，可以看到溶液略微变浑浊4.盖上管盖，100C煮沸5-10min5.离心，取1-2ul上清配制PCR反应体系。如果菌体较
cDNA文库组标准流程七:快速鉴定、菌落PCR
1．质粒快速鉴定 试剂：Protoplasting buffer:30mM Tris-HCl, pH8.0 0.33ml/1.0M 5mM EDTA 0.1ml/0.5M 50mM
Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法
模板的处理：1.平板上的菌落长到肉眼可见时（约12小时）；2.将除了模板之外的其它PCR反应液的组分准备好，并分装。引物最好使用Kit中已有的检测专用的引物，或者一条使用载体上的引物，一条使用基因的特异性引物（这样做可以鉴定非定向克隆的方向）；3.用半根灭菌的牙签（节约，而且好用）挑取菌落，在PCR